少腹逐瘀丸抗痛经作用机制研究

少腹逐痕丸是由当归、赤芍、川芍、没药、元胡、蒲黄、五灵脂、小菌香、肉桂及炮姜所组成，原方出自清代王清任的《医林改错》，现为《中国药典》所收载的具有活血化痪、祛寒止痛等功效，用于治疗血窟寒凝型月经不调、痛经的常用中成药。有关少腹逐疲丸的临床研究报道虽较多，但相关实验研究却鲜见。本实验以乙烯雌酚联合缩宫素复制小鼠痛经模型，对少腹逐癖丸的抗痛经作用及作用机制进行探讨。　　1材料　　1.1实验动物KM小鼠，清洁级，雌性，体质量18-22g,购自河北医科大学实验动物中心，实验动物使用许可证SYKK(冀)2006一。047，动物合格证号1003159。动物饲养在中药药理实验室，动物室温269C13、每日人工照明12h，每天上、下午各换气0.5h，分笼饲养，自由饮水，喂颗粒饲料。　　1.2药品少腹逐寮丸，吉林国药制药公司，批号100105;丹获妇康煎膏，昆明滇红药业有限公司，批号100204;乙烯雌酚，合肥久联制药有限公司，批号20100112;缩宫素注射液，南京新百药业有限公司，批号1002120.　　1.3试剂血栓烷Bz(TXBz)放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司;6一酮一前列腺素F,}(6一Keto一PGF,司放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司;超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所;丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。　　1.4仪器BL-420E十生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司;F1W一400恒温平滑肌槽，成都泰盟科技有限公司;54178型离心机，德国Eppen}orf公司;756MC型紫外一可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司;全自动7放免分析仪，北京金泉水科技有限公司。　　2实验方法　　2.1少腹逐瘫丸对缩宫素所致离体小鼠子宫平滑肌收缩的影响。　　2.1.1分组与给药:取小鼠}0只，随机分为空白对照组、模型组、丹获妇康煎膏组}}}kg体质量)、少腹逐癖丸高剂量组(8g/kg体质量)和低剂量组(4gfkg体质量)，每组10只。各组小鼠每日灌胃给药(或蒸馏水)1次，给药容量为20ml</kg体质量，连续7天。各组小鼠每日灌药Ch后，灌胃乙烯雌酚2mg/kg体质量，每日1次，空白组同时灌胃等容量蒸馏水。　　2.1.2指标检}J:末次给药30m1n后，将小鼠脱颈椎处死，开腹，迅速取出子宫，置于预冷Lock's液中清洗，以细线分别结扎子宫颈端及两侧卵巢端。将子宫置于含20mLLocke's液的恒温浴槽中，子宫颈端固定于固定器底部小钩上，卵巢端与张力换能器连接。温度保持37`U}0.1}，持续供氧，P}值为7.3。调节螺母加1g负荷，平衡40m1n,待子宫收缩稳定、恢复自发节律后，开始进行实验。将终浓度为5U/L缩宫素加人恒温浴槽中，空白组加人等量Lock's液，待子宫发生周期性收缩并稳定后，观察并记录15m1n内子宫收缩张力变化。　　2.2少腹逐挤九叶缩宫素所致小鼠痛经模型的影响。　　2.2.1分组与给药:同实验2.1.1。　　2.2.2指标检测:末次给药30m1n后，除空白组外，其余各组小鼠腹腔注射缩宫素1Ulkg体质量，记录各组小鼠30m1n内扭体反应的次数。测试结束后，各组小鼠断头取血，部分血液制备血浆，测定'FXB:及6一Ket。一PGF,a含量，剩余血液离心分离血清，测定血清SOD及MDA含量。　　2.3统计学处理统计结果用表示，采用SPSS11.5进行分析。所有数据先行正态性和方差齐性检验，各组间比较采用单因素方差分析，样本均数间的两两比较采用LSD一t检验。　　3结果　　3.1少腹逐疥丸对缩宫素所致离体小鼠子宫平滑肌收缩的影响与空白对照组相比，模型组小鼠子宫平滑肌收缩张力显著增强(P<0.01)。与模型组相比，少腹逐痕丸低剂量组、高剂量组小鼠子宫平滑肌收缩张力明显降低(P<0.O5)。　　3.2少腹逐疵九对缩宫素所致小鼠痛经模型的影响由表1可见，与空白对照组相比，模型组小鼠发生扭体反应次数显著升高(P<0.01)。少腹逐察丸高、低剂量组小鼠扭体次数与模型组相比有减少的趋势，但差异无显著性(P>0.05)。　　3.3少腹逐癣丸对痛经小鼠血装TXB},6一K}t.-PGP,a含量的影响由表2可见，与空白对照组相比，模型组小鼠血浆TXB:水平显著升高(P<0.01)，血浆水平显著降低(P<0.01)，血浆"T'XBZ/6-K1t。PGx;。比值显著升高(P<0.0d)。与模型组相比，少腹逐疲丸高剂量组小鼠血浆TXB:水平明显降低(P<0.05)，低剂量组也有降低趋势，但差异无显著性(P>0.05);明显升高、低剂量组小鼠血浆6一Keto一PGF,o:水平均高(P<0.05);高、低剂量组小鼠血浆'1'XPKeto一PGF,oc比值均趋于正常(P<0.05)。　　3.4少腹逐癣丸对痛经小鼠血清SDD,MDA含量的影响由表1可见，模型组小鼠血清SDD含量与空白组相比士现降低，但差异无显著性,血清?Y}DA含量明显升高。与模型组相比，少腹逐察丸高剂量组小清SAD值明显升高，低剂量组也有.高趋势，但差异无显著、;高、低剂量组小鼠血清MD}值均显著降低。　　4讨论　　痛经为常见妇科疾病，是指妇女在经期及前后出现下腹或腰部痉挛性疼痛，严重者可伴恶心、呕吐、手足厥冷、甚至晕厥，给患者的生活和工作带来影响。少腹逐癖丸是临床治疗痛经、月经不调的常用巾成药，具有活血化窟s散寒止痛功效。在前期的药效学研究中，笔者发现少腹逐癖丸具有抗炎、镇痛作用，本实验进一步对其抗痛经作用进行研究。结果显示，少腹逐疥丸能明显降低缩宫素诱发的离体小鼠子宫平滑肌收缩，并可抑制缩宫素诱发小鼠子宫痉挛性收缩引起的疼痛反应，证明其具有缓解子宫平滑肌痉挛疼痛作用。　　痛经的发病原因和机制复杂，涉及多个方面。现代研究发现，痛经的发生与1XA2/PG1:比例失调，引起子宫平滑肌痉挛性收缩，子宫平滑肌血流减少有关。1'XAZ是由血小板产生，具有收缩血管和促进血小板聚集作用。PG1}是由血管壁内皮细胞合成和释放，具有抗血小板聚集、舒张血管的生物活性。生理状态下，TX}z/PG12应处于平衡状态。如二者代谢失衡，其比值升高，就会导致血管收缩，血液处于高凝状态，即中医所述“血密证”。由于}`}z及PG1:的半衰期均很短，因此本研究以测定其稳定的代谢产物T`}B}及S一bet。一PGF,}含量来反映二者的代谢情况。(5-6〕实验结果显示，模型组小鼠血浆TxBZ含量显著升高，6一1}eto一PGF;a含量显著降低，'TXBZ/6一veto-PGF,}比值异常升高，与临床报道一致。经少腹逐寮丸治疗后，小鼠血浆3'XB}含量明显降低，。一PGF,。含量明显升高，'1'}B}/6一hPto一PGF,a比值趋于正常。　　组织的缺血、缺氧进一步导致超氧自由基产生过多，或抗氧化酶活性降低。[4〕体内超氧自由基过多可造成脂质过氧化、蛋白交联、损伤核酸等，导致细胞受损。MDA是氧自由基与生物膜多聚不饱和脂肪酸发生脂质过氧化的分解产物，其含量可反映肌体内氧自由基的水平，间接反映出组织的氧化损伤程度。而SG3}则是生命体内重要的抗氧化酶，能清除氧自由基，平衡肌体的氧化和抗氧化平衡，保护细胞免受损伤。川本研究结果显示，模型组小鼠血清M1}f}含量明显升高，JC1D含量也有降低趋势，显示缩宫素诱发痛经小鼠体内抗氧化能力降低，超氧自由基产生增多。　　而经少腹逐癖丸治疗后，小鼠血清r}}含量显著降低s}1}含量明显升高。提示增强体内抗氧化酶活性，清除氧自由基，减少氧化应激反应对子宫内膜的损伤可能为少腹逐燕丸治疗痛经的作用机制之一。　　综上所述，少腹逐癖丸对缩宫素诱导的小鼠痛经模型有较好治疗作用，其作用机制可能与调节t^}B2r}一1re=.}一PGF,比值，减轻子宫血管平滑肌痉挛性收缩，清除氧自由基有关。　　参考文献　　吕江明,李春艳,贾薇. 三叶青水提物抑制小鼠痛经作用[J].广州医药,2011,(04):39-42.doi:10.3969/j.issn.1000-8535.2011.04.019.　　吴丽丽. 少腹逐瘀丸治疗痛经和月经不调的药效学研究[J].时珍国医国药,2003,(10):595-596.doi:10.3969/j.issn.1008-0805.2003.10.005.　　阿依努尔,任红莉,蔡轶. 当归芍药散抗痛经作用的药效学研究[J].西北药学杂志,2009,(02):118-119.doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2009.02.020.　　李兰芳,谢丽君,李国风. 复方消经痛胶囊对缩宫素诱发大鼠痛经模型的镇痛作用[J].中成药,2009,(03):363-367.　　杨鉴冰,扬帆. 袪异康对子宫内膜异位症模型大鼠血浆TXB2和6-Keto-PGF1α的影响[J].中华中医药学刊,2010,(09):1881-1883.　　刘桂兰,李娟,刘妍. 异痛消对子宫内膜异位症大鼠TXB2、6-Keto-PGF1α及β-EP的影响[J].山东医药,2010,(44):61-62.doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2010.44.032.　　潘丽丽,卢丽萍,佟威威. 子宫内膜异位症患者氧自由基及相关因素分析[J].中国现代医学杂志,2005,(09):2799-2802.