复方颠茄口服溶液中硫酸阿托品含量测定及质量标准研究

　　复方颠茄口服溶液是由颠茄配,橙皮配和经苯乙醋溶液混合制成的医院制剂。临床用于缓解胃痉挛引起的疼痛、恶心、呕吐等。主要成分为硫酸阿托品、东莫若碱和山蓖若碱等托烷类生物碱，其中硫酸阿托品为其主要成分。对于颠茄浸膏、颠茄流浸膏、颠茄草、颠茄合剂、颠茄浸膏片以及颠茄片的含量测定方法报道较多，多采用分光光度法,液相色谱法以及区带毛管电泳法。但是，尚未见到对于颠茄口服溶液含量测定和定性鉴别的文章报道。复方颠茄口服溶液的主要成分为硫酸阿托品，阿托品作为一种毒性很强的成分，在临床应用当中应该严格控制。该制剂在临床使用过程当中，医生也仅仅依靠颠茄浸膏中硫酸阿托品的含量进行推算该制剂中硫酸阿托品的含量，来确定给药剂量，缺乏准确的定量依据。　　中国药典2010年版一部仅收载颠茄草、颠茄,颠茄浸膏、颠茄流浸膏和颠茄片的质量控制方法。对于该制剂，国家药品标准中尚没有质量控制方法，各省药监局收录的医院制剂药品标准中仍没有含量测定的项目，且该制剂的检验标准仍不完善。本文对制剂中主要成分硫酸阿托品进行含量测定，并对制剂中共存的东蓑若碱及山食若碱进行鉴别，对该制剂的检验标准进行完善，为该制剂的质量控制提供分析方法。此外，本研究采用高效液相色谱方法对制剂中3种成分进行鉴别，较之以往文献报道采用薄层色谱法R」鉴别具有较高的灵敏度。　　1仪器和试药　　Agilent1200液相色谱仪，包括自动脱气机、四元泵、自动进样系统、紫外检测器、柱温箱、1200化学工作站，MettlerXS205电子分析天平CAPCELL1'AKC,s色谱柱(4.6mmx150mm,5hum,ColN0.AKAB04912;ColN0.AKAB04913);TnertsilODSSP色谱柱(4.6mmx150mm,5hum);SunFireC,。色谱柱(4.6mmx150mm,5mm)。　　复方颠茄口服溶液(临沂市人民医院制剂室提供，批号:20120822;20120726;20120914);对照品硫酸阿托品(批号100040-201011)、氢嗅酸东蕊若碱(批号100049一200308),氢嗅酸山莫若碱(批号100051-2011OS)购自中国食品药品检定研究院;色谱纯乙睛，高纯水，其他试剂均为分析纯方法色谱条件及系统适用性试验CAPCELLPAK22Cis色谱柱(150mmx4.6mm,5mm)，流动相:乙睛一磷酸盐缓冲液(取6.8g磷酸二氢钾溶于1000mL水中，加人三乙胺10mL，用磷酸调节pH至2.8)(10:90)，检测波长:210nm，流速:1.0mL·min，进样量:20}uL，柱温:30℃。精密量取混合对照品溶液20泌，注人液相色谱仪，理论板数按硫酸阿托品峰计应不低于4000,氢嗅酸东食若碱峰与氢嗅酸山食若碱峰之间的分离度应符合要求。　　2.2溶液制备　　2.2.1供试品溶液精密量取本品100mL置蒸发皿中，水浴上蒸干，加氨试液约巧mL，用乙酸乙醋提取5次(每次约15mL)，合并乙酸乙醋提取液，蒸干，残渣加流动相溶解并转移至25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.2.2对照品储备液精密称取硫酸阿托品对照品约15mg，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.2.3混合对照品溶液取氢澳酸东蓑若碱对照品、氢嗅酸山莫若碱对照品和硫酸阿托品对照品适量，加流动相分别制成每1mL各含氢嗅酸东蓑若碱与氢嗅酸山蓑若碱0.005mg，含硫酸阿托品0.05mg的溶液，即得。　　2.3方法学考察　　2.3.1线性关系考察精密量取对照品储备液1.0,2.0,3.0,5.0mI.，分别置于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，与对照品储备液一起，作为线性考察系列溶液，用0.45}tru微孔滤膜过滤后，注人液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，制备标准曲线，得回归方程:　　Y=24.70X一18.08r=0.9996　　表明硫酸阿托品在15.29一152.9g·mL范围内呈良好线性关系。　　2.3.2稳定性考察取本品，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件分别在0,2,6,12,24h进样，记录色谱图。结果硫酸阿托品峰面积RSD=1.3%，表明样品在24h内稳定性良好。　　2.3.3精密度考察取同一供试品溶液，连续进样6次，测定硫酸阿托品峰面积。结果:RSD=0.5%,表明仪器精密度良好。　　2.3.4重复性考察按“2.2.1”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别进样。结果:RSD=1.0%，表明方法的重复性良好。　　2.3.5加样回收率试验精密量取已测知含量的样品50mL，置于蒸发皿中，分别精密加人5mL硫酸阿托品对照品溶液(浓度为0.1348mg·mL一’)，按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，精密吸取20睡，注人液相色谱仪，计算加样回收率。结果，其平均回收率为:100.2%,RSD=1.7%。说明该方法可行。加样回收率试验结果见表to2.3.6检测限和定量限精密吸取硫酸阿托品对照品溶液适量，加流动相逐步稀释至色谱图中硫酸阿托品峰高分别为噪音的3倍和10倍，测得硫酸阿托品的检测限和定量限分别为3}g·mL-'和10I}g‘mL一i。　　2.3.7专属性考察分别取混合对照品溶液、供试品溶液和空白辅料同法制备的阴性对照溶液，注人液相色谱仪。在建立的色谱条件下，氢嗅酸东蓑若碱、氢澳酸山蓑若碱和硫酸阿托品之间的分离度良好，且与其他杂质峰之间达到完全分离。表明该方法专属性良好，见图1.　　2.3.8耐用性考察本课题改变流动相比例、柱温、流速、色谱柱品牌型号等试验条件，根据氢澳酸东蓑若碱峰与氢澳酸山蓑若碱峰之间的分离度，以及硫酸阿托品峰的理论板数进行考一察试验条件的耐用性。结果见表2。经试验，以上变动均能通过本试验系统适用性试验的要求。表明该方法耐用性良好。　　2.3.9光谱纯度考察采用高效液相色谱仪自带的DAD检测器光谱学纯度检测功能，分别对3种成分色谱峰的光谱学纯度进行检测。结果表明:3种成分的光谱学纯度值均大于仪器给出的17值。　　2.4定性鉴别按“2.2”项下方法分别制备供试品溶液及混合对照品溶液，按色谱条件进液相测试。结果:供试品溶液与混合对照品溶液的色谱图中显示保留时间相同的3个色谱峰，见图1。采用DAD检测器分别查看3个色谱峰的紫外吸收光谱图，供试品溶液与混合对照品溶液保留时间相应的色谱峰均具有相同的紫外吸收特征。　　2.5样品含量测定按“2.2.1”方法制备供试品溶液，按色谱条件进液相，记录色谱图，求得样品中硫酸阿托品含量如表3.　　3讨论　　3.1流动相的选择本课题分别考察了乙睛一磷酸盐缓冲液在不同比例时的色谱图，结果表明，当乙睛比例大于13%时，氢嗅酸东蓑若碱与氢嗅酸山蕊若碱两色谱峰分离度达不到要求。当乙睛比例小于7%时，硫酸阿托品峰流出时间太长，且峰形较宽，积分不准确。本课题选择乙睛一磷酸盐缓冲液比例为10:90，此时，各色谱峰之间的分离度较好，且基线平稳峰形较好，积分准确。　　3.2提取溶剂的选择本课题比较了氯仿和乙酸乙醋2种有机溶剂作为提取溶剂。2种溶剂均能达到充分提取的效果。但是，氯仿在提取的过程中，较容易产生乳化现象，且氯仿毒性较强因此，选择乙酸乙酉旨作为提取溶剂.　　3.3检测波长的选择由于硫酸阿托品分子结构中没有共扼结构，无明显的紫外吸收，为了便于紫外检测器检测，本课题参考中国药典一部,中对颠茄浸膏的含量测定，选择在210rim近紫外波长处进行检测。　　参考文献1 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