山豆根研究进展及毒性成分检测方法补充报道

　　传统中药山豆根(RadixSophoraeTonkinensis系豆科槐属植物越南槐(SophoratonkinensisGag-nep.)的干燥根及根茎，又名山大豆根、黄结、苦豆根，其使用在宋代《开宝本草》中已有记载。山豆根性寒，味苦，具有清热解毒、消肿利咽之功效，常用于火毒蕴结，咽喉肿痛，齿眼肿痛等疾患的治疗。从服用山豆根后出现头昏呕吐、汗出、步态不稳、惊厥、呼吸急促，心跳加快，血压升高等症状，推测服用山豆根可能会引起一系列的毒性反应。鉴于该药材的药毒双重特性，在其安全用药、质量可控及资源开发利用等多方面已引起较多的关注。本文查阅山豆根研究报道资料，从药理作用及毒性、物质基础、成分提取、分析检测等几个方面汇总归纳了最新研究进展，为山豆根的进一步合理开发、安全应用启发新的研究思路。此外，针对文献鲜见内容，本文报道山豆根药材的显微鉴别特征图片，以提供药材鉴别实验参考;并介绍液相色谱一质谱法对山豆根毒性成分金雀花碱型生物碱进行定性定量检测的方法，为该药材的安全用药监测提供参考方法。　　1山豆根研究近况　　1.1药理作用及毒性　　1.1.1药理作用　　抗肿瘤作用:山豆根可阻断或抑制肿瘤细胞DNA,RNA和蛋白质的合成，从而抑制癌细胞增殖，并干扰肿瘤细胞能量代谢或具有直接抑杀癌细胞作用。肖正明[4等研究发现山豆根水提物在离体试验中对培养的人肝癌细胞增殖具有抑制作用，能够降低线粒体活性。张良等发现复方山豆根注射液对B16黑色素瘤}IeWIS肺癌荷瘤有较好的抑制效果。姚仲青等通过小鼠肉瘤S180、小鼠Hzz肝癌实体型肿瘤、小鼠艾氏腹水癌(ESC)肿瘤模型试验研究，发现山豆根总生物碱有一定的抑制肿瘤细胞增殖的活性，但作用效果低，毒性大。　　抗炎镇痛作用:彭百承等研究发现，山豆根颗粒及饮片对急、慢性炎症均有明显的抗炎作用栗永福等在巴豆致小鼠耳肿胀模型和琼脂致小鼠肉芽肿胀模型中探究山豆根不同组分抗急慢性炎症作用，结果表明山豆根水提组分比醇提组分的抗炎效果好，但醇提组分发挥抗炎作用的安全范围大于水提组分。钱利武等探讨苦参及山豆根中主要生物碱的镇痛及抗炎活性，发现大部分苦参碱型生物碱具有一定程度的镇痛抗炎活性，而金雀花型及鹰爪豆型生物碱活性较弱，同时毒性较强。　　抑菌作用:胡庭俊。等研究山豆根的总生物碱、醇提物和水提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果，结果表明最小抑菌浓度(MIC，总生物碱为62.5mg·mL，醇提物为31.25mg·mL，金黄色葡萄球菌对山豆根醇提物中度敏感。杨艾青等用二倍稀释法测得山豆根醇提取液对沙门菌的MIC为250mg·mL-'，最小杀菌浓度为500mg·mL-'。戴五好等研究发现苦参、山豆根中生物碱对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、产碱假单胞菌、恶臭假单胞菌、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌等7种菌株都有抑制作用，其中氧化苦参碱、氧化槐果碱的抑菌作用较弱，槐定碱对甲型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌抑菌作用显著。　　对免疫系统的影响:帅学宏等将山豆根多糖应用于免疫功能低下的小鼠，发现其能影响机体内髓过氧化物酶、黄镖吟氧化酶和谷胧甘肤过氧化酶的活性，从而对机体免疫器官起到保护作用。胡庭俊等还发现山豆根多糖能促进雏鸡胸腺、脾脏、法氏囊等主要免疫器官的发育，显著地提高鸡的免疫器官指数。周明眉等研究发现山豆根非生物碱部位对小鼠免疫性肝损伤具有显著的保护作用，对免疫抑制小鼠的免疫器官非特异性免疫和特异性免疫均有促进作用。　　对心血管系统的影响:黄彩云〔17〕等通过静脉注射苦参碱，发现其能显著拮抗乌头碱、氯化钡、结扎冠脉前降支诱发的心律失常和氯化钙一乙酞胆碱混合液诱发的小鼠心房纤颤或扑动，且抗心律失常作用呈现剂量效应。刘芬等[18〕研究表明氧化苦参碱具有降低血压的作用，且随着给药剂量的增加，降压作用逐渐增强，呈剂量依赖性。张涛研究报道山豆根总碱及其所含多种生物碱单体均能对抗心律失常，并具有强心作用。　　抗氧化、抗病毒、抗疲劳等作用:胡庭俊X20〕等研究表明山豆根多糖组分具有抗氧化作用。张玉等对山豆根多糖进行硫酸化修饰后发现其具有抗乙肝病毒(HBV)的作用。何晓艳等报道山豆根碱具有显著的保肝降酶活性，能防治多种肝病引起的肝功能损害，用其制成的肝炎灵注射液应用于肝炎的治疗钟正贤〔23〕等研究报道山豆根还具有抗凝、降酶和抗疲劳作用。　　1.1.2毒性作用山豆根毒性主要表现在神经系统、消化系统和呼吸系统，同时也可能对心血管系统产生影响。引起毒副反应的原因趁要是超量或长期月阴。　　急性肝毒性:李峰杰等发现大鼠连续灌胃山豆根水煎液后，可对肝脏产生毒性，且随着剂量增加，毒性增强;李素君;等通过多次给小鼠高、中剂量的山豆根水提组分和醇提组分，均造成明显的肝损伤，且水提组分的肝毒性大于醇提组分，并呈现明显的肝毒性“量一时一毒”关系。　　神经毒性:在山豆根急性毒性试验中，给药后大鼠出现抽搐、震颤、步态不稳、行走困难等神经系统中毒症状。人使用过量山豆根可致中毒性脑病，董高宏等报道患者因银屑病复发服用含有过量山豆根中药煎剂后出现神经系统中毒症状，经抢救症状消失。　　1.2山豆根的物质基础对山豆根的药效物质基　　础的研究报道，近10余年在三菇类、生物碱类的研究有了新的突破，同时非生物碱类如黄酮、多糖、酚类、有机酸，以及微量元素等成分的研究报道也逐渐增多。　　1.2.1生物碱类有研究认为，生物碱是山豆根的主要活性成分，也是其药效的物质基础从山豆根中分离得到的生物碱有以下4种类型:苦参碱型(matrine、金雀花碱型(eulexine),鹰爪豆碱型(sparteine)和羽扇豆碱型(lupinine，其中最常见的是羽扇豆(lupin类生物碱，又称喳诺里西p}(quino-lizidine)类生物碱。目前分离得到的生物碱类成分有20多个。窦金辉等从山豆根中分离得到苦参碱(matrine、氧化苦参碱(oxymatrine、槐胺碱(so-phoramine),槐醇(sophoranol)、氧化槐果碱(oxyso-phocarpine)、金雀花碱(eulexine)等。其后肖平等「30-3‘一先后从山豆根中分离得到Sa一经基槐果碱(Sa一hydroxysophocarpine),9a一经基苦参碱(9cx-hydroxymatrine)、(+)一14。一轻基苦参碱[(+)一14cx一hydroxymatrine1邻一经基苦参碱〔(一)-143一hydroxymatrine、(+)一Sa,9a一二经基苦参碱[(+)-Sa,9a-dihydroxymatrine},(一)一槐果碱[(一)-sophocarpine}，以及(+)-4a一乙酞苦参碱[(+)-14tx-acetylmatrine」和(一)-1邻一乙酞苦参碱[(一)一14,E一acetylmatrine。丁佩兰[32」等从I--IJ豆根中又分离得到(一)一14/3基氧化昌参碱[(一)一4(3一hydroxyoxymatrine，邓银华[33〕等又分离得到13,14-去氢槐醇(13，14一dehydrosophranol)。　　1.2.2黄酮类山豆根中富含黄酮类化合物，主要有黄酮(flavone)、二氢黄酮(ffavanone)、异黄酮(sofla-vone)、查耳酮(chalcone)和紫檀素类(pterocarpans)化合物，其中以二氢黄酮类(flavanones)化合物最为丰富。　　目前从山豆根中分离得到的黄酮类成分已有20多个。丁佩兰等分离得到山豆根色满二氢黄酮(S叩hora-tonkinochromane)A,B,C,D，I)f豆根色满查耳酮(sophor-atonkidochromane)A,B,C,(一)一三叶豆紫檀普〔(一)-trifolirhizin、芒柄花素(formononetin)和8一甲基雷杜辛(8-methylretusin)。邓银华C3a]等分离得到L一高丽槐素(L一maackiain)、红车轴草昔(trifolirhizin)、芦丁(quercetin),梅皮素(rutin)和异鼠李素一3一芸香糖着(isorhamnedn一3一rutinoside)，其中榭皮素}17异鼠李素-3一芸香糖昔为首次从该植物中分离得到。李行诺]3s]等分离得到8个黄酮类化合物:山豆根色满二氢黄酮I(sophoratonkinochrornaneI),7,2’一dihydroxy一4'一methoxy一isoflavanol,tonkinensisol、芒柄花素(form-ononetin)、金雀异黄素(genistein)、光甘草酚(glabrol)、lupinifolin和8一C一prenylkaempferol。杨瑞云等分离得到lupiwighteone和wighteoneo1.2.3三砧类20世纪90年代初山豆根中三褚类成分的研究报道较多，多为齐墩果烯型(oleanene)，个别为羽扇豆烷型(lupinane)，部分化合物在22位由淡基取代。如Takeshita-3'等分离出三菇及三裕皂昔类成分，分别是相思子皂醇C一E,H,I(abrisapogenolC-E,H,I),melilotigenin、紫藤皂醇A(wistariasapogenolA)、广东相思子三醇(cantoniensistriol)、羽扇豆醇(1u-peol)、大豆皂醇甲醋(kudzusapogenol)、槐花二醇(so-phoradiol),subprogeninA一D、大豆皂醇A和B(soyasa-pogenolAsB);Ding等[389」分离得到abrisapogeninl、脱氢大豆皂昔I(dehydrosoyasaponinI),subpmsidel一VlI;Sakamoto}}'〕等分离得到大豆皂昔(soyasaponin)I,II,A3,3一。一[a-L一鼠李糖基一(1->2)-D-毗喃半乳糖基一((1}2)-/3-D一葡萄糖基」一大豆皂醇甲醋、槐花皂昔(kaikasaponin)},};丁佩兰等〔32〕分离得到(+)-羽扇豆醇(+)-lupeol)和(+)一花二醇((+)一so-phoradiol)。　　1.2.4其他成分山豆根还含有酚性化合物(phe-nolic)、多糖(polysaccharide)、香豆素(coumarin),葱醒(anthraquinone),街醇(sterol)、咖啡酸(caffeicacid)、脂肪酸(fattyacid)、蛋白质(protein,氨基酸(aminoacid)、微量元素(traceelement)等多种成分。　　如丁佩兰等“1分离出番石榴酸乙醋(piscidicacidmo-noethylester)、麦芽酚(maltol)、香草酸(venillicacid)、对经基苯甲酸(P一hvdroxybenzaicacid)和咖啡酸十二醇}}(docosylcaffeate)等多个酚性化合物。山豆根中所含微量元素主要有砷、锑、秘、锡、锌、铜、锰等。　　1.3有效成分的提取工艺　　1.3.1生物碱的提取工艺　　邢建军〔42等比较了浸渍法、热浸法、超声法、渗媲法和加热回流法等5种提取方式，以苦参碱含量和干浸膏收率为评价指标，得到最佳方法为加热回流法。采用正交试验，系统地考察了乙醇浓度、溶媒用量、提取次数和提取时间对山豆根有效成分提取的影响，认为以乙醇用量为12倍量，提取2次，乙醇体积分数为50%，每次60min提取效果最好。　　梁燕明〔43等采用渗流和温浸2种传统方法和C02超临界萃取法分别提取山豆根中苦参碱，运用高效液相色谱法测定各提取物中含量，结果用超临界萃取方法萃取的苦参碱含量比渗渡法高出0.072%，比温浸法高出0.105%，结论为超临界萃取方法萃取的苦参碱的含量要高于传统方法。　　Guo等运用无支撑液膜技术提取山豆根中的苦参碱。以苦参碱水溶液为供体相，三氯甲烷为无支撑液膜相，磷酸盐缓冲液为受体相，研究萃取时间、萃取温度、液膜厚度和受体相的pH对萃取量的影响，发现萃取温度为45℃，受体相为纯磷酸，三氯甲烷为0.2mL，萃取时间为4h时，苦参碱的萃取率上升到54%。与液液萃取相比，无支撑液膜最大的优点是能提取到高纯度的苦参碱。一种分子印迹高聚物固相萃取法提取山豆根中的苦参碱。研究用三聚氰胺一脉醛树脂作为功能单元，苦参碱为样品，当样品和功能单元的质量比为5mg·0时，分子印迹高聚物对苦参碱具有很高的吸附和洗脱能力。　　在苦参碱的提纯和洗脱时，用分子印迹高聚物作吸附剂，丙酮作洗脱剂，分子印迹高聚物对苦参碱的选择性最高。用分子印迹固相萃取法得到的苦参碱量是相同条件下用液一液萃取所得到的1.4倍。　　杨帆等报道了以苦参碱和氧化苦参碱的总含量为考察指标，比较温浸、超声、回流和快速溶剂萃取(ASE)4种提取方法对山豆根中苦参碱和氧化苦参碱提取效果的影响，结果ASE在提取效果上优于其他3种提取方法。通过单因素和正交实验优化ASE的提取条件，得到最佳提取工艺:乙醇体积分数为40%，提取温度为90℃，提取时间13min，提取2次1.3.2黄酮的提取工艺杨瑞云4}}等采用正交试验，考察了溶剂浓度、液料比、提取时间、提取次数对广豆根中总黄酮提取量的影响。最佳提取工艺为65%乙醇，液料比10:1，提取3次，每次2.5h。彭湘君[48〕等以总黄酮含量为考察指标，采用常规回流、超声、微波辅助萃取及索氏提取等方法对山豆根进行提取，认为微波辅助萃取法和超声提取法具有高效、省时等优点，提取效果较好。　　1.4主要成分的分析检测技术对山豆根成分的分析检测，可以分为对生物碱和非生物碱的检测两大部分。　　1.4.1生物碱　　对山豆根生物碱的分析检测研究报道较多，近10余年报道的技术更新，方法更成熟。容量法和比色法是生物碱测定应用较早的方法，张超49]等研究用容量法和酸性染料比色法测定山豆根总生物碱。　　毛细管电泳用于生物碱测定亦是较早被关注的技术，纳鹏君等报道了:采用胶束毛细管电泳法(MECC)测定山豆根中的苦参碱及氧化苦参碱的含量。黄庆华〔51〕等采用毛细管电泳高频电导法测定山豆根中苦参碱的含量。　　报道最多的仍是高效液相色谱(HPLC)法。杨文远等选用Shim一packCLC一ODS色谱柱，甲醇一水一三乙胺(55:45:0.02)为流动相，紫外215nm为检测波长，建立HPLC法测定山豆根中的苦参碱和氧化苦参碱。梁燕明[53〕选用。DS一C1，柱，乙睛一0.OSrnol·L-'磷酸二氢钠(85:15)为流动相，用HPLC法测定山豆根中苦参碱的含量，并采用C0}超临界萃取法制备供试液。袁祥慧〔s4〕等选用以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱，乙睛一无水乙醇一磷酸水溶液(80:10:10为流动相，测定山豆根中的苦参碱和氧化苦参碱;曹玉梅〔ss等采用HPLC法测定清咽合剂中山豆根生物碱的含量;李南等采用超高效液相色谱法(UPLC)，快速测定山豆根中的苦参碱和氧化苦参碱;黄颖57〕等研究报道了山豆根HPLC指纹图谱。　　色谱一质谱(LC/MS)联用方法用于山豆根生物碱分析报道不多。bong-sa一等报道了LC/MS/MS定性、定量分析山豆根中的苦参碱和氧化苦参碱;郭志峰等用气质联用方法对山豆根中生物碱进行定性分析，鉴别出氧化苦参碱、苦参碱、金雀花碱和万一甲基金雀花碱及它们的异构体。　　近5年亦有薄层扫描法、红外光谱法、荧光检测法用于山豆根生物碱测定的报道如，潘莹f60]等采用双波长薄层扫描法测定山豆根中氧化苦参碱的含量，比较了乐业、德保、靖西、那坡四产地山豆根所含氧化苦参碱含量。沈亮[61」等采用傅里叶变换红外光谱结合二阶导数谱法检测山豆根中的生物碱，分析了山豆根不同部位的生物碱成分。Liang-等通过荧光显微镜和显微分光计来检测山豆根中的苦参碱，以及在各组织中的分布情况。发现利用这些荧光特征可以鉴别山豆根，区别于北豆根等其他类似中药。　　1.4.2非生物碱山豆根中非生物碱类成分主要有黄酮、只祷、多糖、酚、微量元素等类化合物。近年来对山豆根中的非生物碱类成分的分析报道逐渐增多。　　严红亮等建立了HPLC法测定山豆根药材中红车轴草昔和高丽槐素含量的方法，色谱柱为Kroma-silC,a，流动相为乙睛一0.1%醋酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为310nm。邓放〔64〕等建立了RP一HPLC测定山豆根中三叶豆紫檀昔含量的方法，以SymmetryshieldRPC,。柱为色谱柱，流动相为甲醇一水。　　2008-2009年尚有用HPLC法测定山豆根中单一黄酮类成分红车轴草营、高丽槐素的研究报道[6s-66·0张媛媛等用薄层色谱法(TLC)定性鉴别山豆根中的糖、有机酸、皂昔和酚类物质，并用紫外分光光度法定量检测糖、皂昔和酚类的总含量，用酸碱滴定法定量测定有机酸的总含量。结果薄层色谱板上可鉴别出糖、有机酸、皂昔和酚等四大类物质。祝路68·等采用三甲基硅烷化进行衍生，运用GC一MS法定陛、定量分析山豆根非生物碱部分化学物质组成和含量，共鉴定了24个化合物，定量测定了19个化合物的含量。　　孟君等利用微波消解一氢化物发生一电感藕合等离子体发射光谱联用技术，在最佳工作条件下，测定了山豆根中的砷、锑、秘和锡微量元素的含量;李爱红运用火焰原子吸收光谱法对山豆根中微量元素锌、铜、锰、铁和镁进行了分析检测。　　2山豆根定性定量检测方法补充报道　　2.1定性分析图谱　　2.1.1性状及显微鉴别图谱　　山豆根为豆科植物越南槐的根及根茎，根茎膨大呈不规则结节状，顶端有茎基残留，下端有生根数条;根呈长园柱形，略弯曲，常有分枝。表面棕色至棕褐色，具有不规则纵皱纹及突起的横长皮孔。质坚硬，难折断，断面粗糙，纤维状，断面皮部淡棕色至类白色，木部黄白色，似蜡质。有豆腥气，味极苦(见图1).　　显微鉴别:山豆根药材的横切面中，木栓层为数至10列细胞(见图2一A);皮层外侧的1一2列细胞含草酸钙簇晶，断续形成含晶细胞环，含晶细胞的壁木化增厚(见图2一B);皮层与韧皮部散有纤维束，形成层成环(见图2一A);木质部发达，射综宽1一8列细胞，导管类圆形，大多单个散在，或2至数个相聚，有的含黄棕色物，木纤维成束散在(见图2一C);薄壁细胞含淀粉粒，少数含方晶(见图2一C)。山豆根粉末为棕色，单个纤维表面有不规则纵裂纹，细胞壁常见分支(见图2一D)，纤维束周围细胞含草酸钙方晶细，形成晶纤维(见图2一E)，偏光显微镜下呈多彩状(见图2-F);晶厚壁细胞常成群存在于薄壁细胞中，无色或淡黄色，类圆形或长方形，内含草酸钙方晶(见图2一G)，偏光显微镜下呈多彩状(见图2一H);少数呈类圆形或长椭圆形，壁厚，孔沟明显(见图2一I,J);导管呈淡黄色或金黄色，主要为主要为网纹导管(图2一K);淀粉粒多为单粒，类圆形，层纹不明显(见图2一L)o2.1.2LC一MS鉴别图谱　　试验条件:仪器为PE一SCIEXAPI一300液相质谱/质谱仪;色谱柱选用Supelco一NH2(5}.,m,2.1mmx250mm};流动相为乙睛一20mmol}L‘甲酸铰水溶液，梯度洗脱.流量初始13.5min保持80:20比例，之后以线性梯度于1min内变换至60:40，保持于该比例10.5min，然后以线性梯度于1min内变换至80:20，保持于该比例4min;流速为400},L·min;分流比率为9:1;进样量为10},L;扫描范围为m/z100一400，正离子模式。　　溶液制备:取生药粉末约0.5g，加色谱流动相溶液10mL,混合。超声震荡提取30min。用0.45N.,m滤膜滤过后作为供试液。分析结果:液相色谱数据显示，分析时间30min，山豆根样本提取液的总离子流色谱图如图3所示;图4为山豆根样本提取液的提取离子流色谱图:苦参碱保留时间为9min,m/z249[M+H〕十;氧化苦参碱(b)保留时间为26min,m/z265[M十H]+;质谱分析结果:苦参碱m/z249的主要碎片离子有m/z176和148(见图5一A);氧化苦参碱m/z265的主要碎片离子有m/z247、205,176和148(见图5一B).　　2.2液质联用测定毒性生物碱含量　　据文献报道山豆根中的金雀花型及鹰爪豆型生物碱活性较弱，但毒性较强〔9〕。本研究组在前期研究基础上〔s}7，建立了液相色谱/质谱/质谱联用仪的多反应监测扫描方式方法，同时测定山豆根样品中苦参碱、氧化苦参碱、金雀花碱和N一甲基金雀花碱的含量(图6)，可为控制毒性较大的金雀花碱型生物碱成分含量提供参考，方法简报如下。　　试验条件:液相质谱联用仪器、流动相、流速、流量、分流比率、进样量同“2.1.2"。色谱柱采用Cis}5EA,m,2.1mmx250mm);扫描设定:苦参碱m/z249/148;N一甲基金雀花碱m/z205/108;氧化苦参碱m/z265/247;金雀花碱m/z191/148，均为正离子对扫描。　　供试液制备:精密称取生药粉末约0.59，精密加色谱流动相溶液10mL，混合。超声震荡提取30min。用0.45N.,m滤膜滤过后作为供试液。图谱及线性范围:液相/质谱分析如图7所示。保留时间苦参碱约9min,N一甲基金雀花碱约10min，金雀花碱约15min，氧化苦参碱约25min。标准工作曲线范围，苦参碱1}6mL-I,N一甲基金雀花碱45一180gymL-'，金雀花碱0.5一2g·mL，氧化苦参碱1一6g·mL。　　3讨论　　3.1山豆根具有清热解毒、消肿利咽之功效，具抗肿瘤、抗炎镇痛、抑菌、增强免疫、抗心律失常等药理活性，多用于肿瘤、咽喉肿痛、病毒性肝炎等多种疾病的治疗。山豆根在用于多种疾病治疗的同时，也可诱发急性肝毒性、神经毒性、胃肠道反应等多种毒副作用，出现胃肠道反应和神经毒性反应等中毒症状，严重时可导致死亡。超量或长期服用是引起山豆根中毒的主要原因。　　3.2山豆根功效和毒性的相关性、量效关系等研究报道不多。目前对山豆根的功效、毒性作用机制的研究尚不充分，功效研究和毒性研究之间缺乏相关性;山豆根中黄酮、三菇、有机酸等非生物碱类成分的药理作用、毒性方面的研究报道仍较少，有待进一步深人研究。　　3.3山豆根的化学成分报道主要有生物碱、黄酮、三菇、多糖等类成分。较多的研究报道认为山豆根生物碱是其功效和毒性的主要物质基础，其中苦参碱和氧化苦参碱是已知的主要功效成分。对山豆根的质量检测研究报道主要集中在苦参碱和氧化苦参碱，鲜见对其他成分的检测报道。近年研究发现生物碱中的金雀花碱类毒性更大。本文补充了山豆根中毒性较大的成分金雀花碱、N一甲基金雀花碱的液相质谱/质谱法测定，并可同时测定苦参碱、氧化苦参碱，且方法干扰少，专属性强，适用于含量微少或基质较复杂的样本。　　3.4山豆根非生物碱部位对免疫性肝损伤具有　　显著的保护作用，对免疫抑制小鼠的免疫器官非特异性免疫和特异性免疫均有促进作用，对这部分的开发利用，以及分析检测方法有待进一步研究。　　参考文献1 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