灯盏花素对糖尿病大鼠肾组织VEGF表达的影响
发表时间：2014-06-11 浏览次数：1094次
糖尿病（Diabetes mellitus, DM ）是一组以慢性血浆葡萄糖水平增高为特征的代谢性疾病，其发病中心环节是胰岛素分泌和（或）胰岛素作用缺陷。糖尿病肾病（DN）是糖尿病中较为常见的慢性微血管并发症之一，糖尿病患者死亡的主要原因一也在于此。病程超过25年的糖尿病患者中糖尿病肾病的累积患病率非常高，通常在25%一40%之间。在美国约40 %的终末期肾病患者是由糖尿病肾病所致川，在我国，DN是导致终末期肾功能衰竭的第二位疾病[z7.现阶段遗传因素与长期高血糖等环境因素等综合因素导致糖尿病肾病发生[3」。已有部分临床资料表明灯盏花素具有治疗糖尿病肾病，但其作用机制尚不清楚。本实验通过建立糖尿病大鼠模型，观察灯盏花素对实验性大鼠肾组织VEGF的影响，本研究通过VEGF在糖尿病大鼠肾组织表达研究，探讨灯盏花素对肾脏的防治作用及可能机制。现报告如下。 1材料 1. 1实验大鼠：Sprague Dawley （SD）雌性大鼠40只（实验大鼠由暨南大学医学院动物中心提供），重量（190士10）g,适应性喂养1周后用于实验。随机将大鼠分为正常对照组12只和造模组28只。造模组大鼠禁食12h后，按STZ 60 m留kg剂量左下腹腔单次注射。注药后72 h尾尖取血测空腹血糖。糖尿病造模成功的标准：血糖）16. 65 mmol/L,共成模24只。 将模型成功的糖尿病大鼠随机分为两组：糖尿病无干预组（12只），灯盏花素干预组（12只），灯盏花素按80 m留kg每天腹腔注射1次。对照组正常饲料喂养。8周后制备肾组织标本进行免疫组化观测。 1. 2标本采集：三组大鼠于8周末测量体重、收集24小时尿液检测尿白蛋白。大鼠隔夜空腹，1%的戊巴比妥钠麻醉后心脏取血测定血糖化血红蛋白（HbA1C）、尿素氮（BUN）血肌酚（ Scr）。取大鼠左肾除去后称重，长轴方向纵切后，取小于2 em x 2 em x 0. 4 em肾组织放人10%多聚甲醛固定液中。 1. 3免疫组织化学分析：采用即用型二步法石蜡切片常规脱蜡，分级乙醇水化后行微波炉抗原修复巧min,按即用型二步法检测试剂盒（PV一6001）说明进行免疫组织化学操作，VEGF多克隆抗体的稀释度为1: 100.显色时间为5 min,蒸馏水冲洗终止反应，中性树胶封片。镜下观察出现棕黄色颗粒为阳性信号。每例标本1张切片，每张切片高倍镜下（x 400 ）随机选择2 -3个视野的肾小球及肾小管一间质，采用全自动图像分析系统Image一proplus5. 0图像分析系统测定该区域平均吸光度值，取其平均吸光度均值作为结果。 1. 4统计学处理：数据采用SPSS 13. 0软件进行分析，计量资料以均数士标准差（x士、）表示，采用单因素方差分析，尸<0. OS为差异有统计学意义。 2结果 VEGF在正常组主要有少量表达，在糖尿病组中VEGF表达较正常组明显增加，肾小球肾小管均有表达（P<0.05）；在灯盏花素治疗组，上述增加的表达受到显着抑制（P<0.05）0各组大鼠肾组织VEGF表达的具体情况分别详见表1和图to 3讨论 糖尿病肾病是糖尿病最常见微血管并发症之一，其病理学改变以肾小球细胞外基质堆积、系膜增宽、基底膜增厚、肾小球基底膜（GBM）增厚和肾间质发生纤维化为特征。近些年来发现血管内皮生长因子（VEGF）可能是糖尿病肾病早期蛋白尿产生和肾小球、肾小管肥大的重要原因之一。灯盏花素有扩张血管、降低血液薪稠度、改善肾脏血流量、抗肿瘤药等作用[“」。可有效保护肾小球的系膜细胞，降低微循环阻力，促进循环顺畅，降低细胞变性度，对防止肾小球硬化或者延缓硬化意义重大。有降低血液薪度、抗血栓形成、抗血小板聚集、抗凝、促纤溶等作用[‘」。尽管DN初期主要表现为肾小球病变所致的蛋白尿，但其远期预后却主要决定于小管间质病变的程度，肾小管间质病日益受到关注[6」。研究证明肾小管间质病变在糖尿病肾病发病中占有重要地位，而肾脏细胞外基质在肾间质中的过量堆积是肾小管间质病变及肾纤维化的重要特征。日前临床上对DN尚无治根的措施，主要以对症治疗和改善症状为主。已证实灯盏花素对早期糖尿病肾脏组织的氧化应激、i肾脏蛋白激酶C毒性、肾组织巨噬细胞浸润、肾小球转移生长因子p,和结缔组织生长因子的表达等有明显的保护作用。杜飞等证实[7」，灯盏花素治疗糖尿病大鼠血清对PTEC钠钾ATP酶活性的升高有明显的抑制作用，其对DN的防治作用可能部分通过抑制PTEC钠钾ATP酶活性实现。 本实验显示，灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏保护作用较强，其机制可能部分是通过下调糖尿病大鼠肾组织VEGF的表达来实现的，从而起到改善肾功能、防治糖尿病肾病的作用。 4参考文献 [1]Collins AJ, Kasiske B,Herzog C,et al. United states renaldata system 2006 annual data report abstract[J]am J KidneyDis , 2007 , 49 （1 suppll）；6 [2]中华医学会肾脏病分会透析移植I_作组1999年度全国透析移植登记报告[J〕中华肾脏病杂志，2001,17（2>:77 [3]Dronavalli S, Duka I, Bakris GL. The pathogenesis of diabeticnephropathy,Nat Clin Pract Endocrinol Metab,2008,4（8）：444 [4〕赵锦欢，张丽梅，李洋灯盏花素对糖尿病肾病的防治作用简介[J〕中国药、}U,2010,19（12）；86 [5〕蒋贤武，戈升荣，安高荣灯盏花素的药理作用研究进展[J〕中华现代临床医学杂志，2004,2（8>:7s1 [6]Phillips AO,Steadman R. Diabetic nephropathy:the centralrole of renal proximal tubular cells in tubulointerstitial injury[J[Histol Histopatho1,2002,17（1）；247 [7]杜飞，高原，姚君，等灯盏花素治疗糖尿病大鼠血清对近端小管上皮细胞钠钾ATP酶活性的影响[J〕中国中西医结合肾病杂志，2011,12（5）；436 [收稿日期：2014-02-12编校：郑英善]
