ERCC1基因蛋白表达与鼻咽癌顺铂辅助化疗耐药的关系
发表时间：2014-05-07 浏览次数：943次
鼻咽癌是我国最常见的恶性肿瘤，据笔者近年来查阅的资料以及统计发现鼻咽癌的发病率明显增加，况且还有明显的年轻化趋势。故而研究该肿瘤的进展也明显地加快，因此从治疗上也发生了明显改进，从以往的放疗、化疗演变成当今的综合治疗———放疗加新辅助化疗。进而也强调治疗的个性化。目前的新辅助化疗治疗方案已被证实为行之有效的治疗手段[4]，该治疗手段可以用于缩小肿瘤瘤体体积，减少肿瘤细胞的浸润及转移，并可有效消除其他部位的隐性转移。新辅助化疗已成为鼻咽癌患者综合治疗的常规手段之一。顺铂是目前鼻咽癌放疗加化疗中使用广泛的化疗药物。但是目前传统治疗鼻咽癌的方法，疗效已经到了瓶颈，如何利用肿瘤基因标记物预测疗效，突破疗效瓶颈，成为当今研究热门。本课题用免疫组织化学技术检测ERCCl在正常鼻咽组织以及鼻咽癌患者肿瘤组织表达，从基因学方面来分析鼻咽癌细胞ERCCl表达与顺铂化疗耐药的关系，总结出ERCCl与鼻咽癌发病及耐药性的相关性，来给以指导鼻咽癌患者实现个体化治疗。其意义在于可以明显减少鼻咽癌复发及转移机会，从而明显提高鼻咽癌患者的生存率，减少家庭及社会的负担。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选择收集我院耳鼻喉科2006年3月～2012年3月手术切除并经病理证实的鼻咽癌组织标本38例，患者 的年龄为21～75岁，平均53岁。按照我国权威的病理分期标准：I期11例，Ⅱ期6例，Ⅲ期20例，Ⅳ期1例;组织学分类：鳞状细胞癌27例，腺癌6例，未分化癌5例，泡状核细胞癌1例;组织学分级：高分化11例，中分化8例，低分化13例，未分化6例。所有组织标本取得后均用甲醛固定，石蜡包埋保存。由两位病理科专家重新核对了组织标本和切片，复核了诊断，并临床资料保存完好的病例;另取正常卵巢组织30例作为对照组。
1.2 方法：免疫组化染色。
1.2.1 试剂：采用的试剂有即用型快捷免疫组化MaxvisionTM鼠抗兔，浓缩型鼠抗人ERCCl单克隆抗体(一抗)和HRP(二抗)广谱的DAB显色试剂盒以及检测试剂盒，均购自北京中山金桥生物技术有限公司。
1.2.2 免疫组化染色方法：将采集的组织标本通过专业切片，常规脱蜡水化，再置入柠檬酸盐(一定比例)缓冲液中行抗原修复(必须是通过高温高压)，等待冷却后用自来水冲洗切片，冲洗5min连续3次;滴加3% 过氧化氢室温下孵育10min，放置在4℃的冰箱24h，PBS冲洗5min连续3次;滴an-抗，室温下孵育15min，PBS冲洗5min连续3次;DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。
1.2.3 染色结果：采用双盲法来观察，在切片各个部位各随机选取一个约400倍视野，来观察不同视野中细胞染色的情况来计算阳性细胞百分比。判定结果：阳性细胞百分比<10%的代表阴性;10% ～30%为弱阳性;30% ～70%为中度阳性;>70%强阳性。
1.2.4 严格、真实、准确做好各项数据的记录、整理。
1.3 统计学处理：使用SPSSl6.0进行分析;2个和3个样本率的比较用χ2检验，生存率的计算用LifeTable方法，生存分析用Kaplan-Meier计算法和Log-ranktest时序检验;P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 鼻咽癌组织中ERCCl的表达及其与临床病理特征的关系：ERCCl阳性表达主要定位于细胞核，呈棕黄色颗粒状[4]。临床上采集30例正常鼻咽组织，38例中晚期鼻咽癌组织进行比较：对照组38例，阳性表达31例(占81.2%)，正常鼻咽组织30例，阳性表达17例(占56.6%)，差异性P=56.6/81.2=0.693，P>0.05。
ERCCl表达与中晚期鼻咽癌患者的年龄、组织学类型、组织学分级以及肿瘤发生的部位等临床病理特征及发病率均无明显的相关性[3](P>0.05)。
2.2 鼻咽癌组织ERCCl表达与顺铂化疗耐药的关系：38例鼻咽癌组织中放疗加化疗耐药者30例，其中ERCCl阳性表达23例(76.67%);放疗加化疗敏感者26例，ERCCl阳性表达者为8例(30.77%)，放疗加化疗耐药组ERCCl阳性表达率明显高于敏感组，差异有统计学意义(72～11.87，P<0.05)。耐药组积分值为(5.17±3.38)分，敏感组积分值为(2.38±2.26)分，放疗加化疗耐药组积分值明显高于敏感组，差异有统计学意义(t=3.656，P<0.05)。
3 讨论
目前，医学界已有共识，对于鼻咽癌治疗的难点为鼻咽癌细胞对化疗药物，尤其是对一线化疗药顺铂产生耐药性，严重阻断了化疗药物的抗肿瘤效应。顺铂是鼻咽癌新辅助、辅助化疗中常用的药物，进入肿瘤细胞后与DNA结合，形成铂-DNA加合物(Pt-DNA加合物)，导致DNA链内或链间交链，干扰DNA转录和复制，从而抑制肿瘤细胞的分裂。核苷酸切除修复(NER)能力与铂类药物的耐药密切相关。ERCCl基因蛋白在NER通路中对于识别和去除Pt-DNA，加合物、修复DNA链间交链、参与DNA再合成过程至关重要，ERCC1过表达可使停滞在G2/M期的损伤DNA迅速修复，尤其是ERCC1能使顺铂诱导的DNA络合物的清除增加，导致其对顺铂耐药。鼻咽癌是我国最常见的恶性肿瘤，中晚期近年来鼻咽癌发病增加，且有年轻化趋势，肿瘤进展也加快。据文献报道，中晚期鼻咽癌患者5年生存率约为20%左右。况且鼻咽癌细胞对化疗药物在中晚期鼻咽癌患者中敏感性渐差，特别是一线化疗药顺铂的耐药性尤为明显，故而严重影响抗肿瘤药物的疗效。多数患者由于耐药或抗药性，因出现复发或转移，最终导致治疗失败。本课题用免疫组织化学技术检测ERCCl在正常鼻咽组织以及鼻咽癌患者的肿瘤细胞组织中的表达，从组织基因水平上了解癌变的细胞ERCCl表达与临床一线常用规药物-顺铂的化疗耐药的相关性，从而揭示ERCCl与鼻咽癌发病及其耐药性的相关性，来指导临床鼻咽癌病人的个体化治疗。其意义在于可以明显减少鼻咽癌复发及转移机会，从而明显提高鼻咽癌患者生存率，减少家庭及社会的负担，减少医疗资源的浪费.其将产生良好社会及经济效益，故而值得临床推广。
4 参考文献
[1] 蔡永广，符爱珍，劳 逸.新辅助化疗联合放疗治疗中晚期鼻咽癌疗效观察[J].现代肿瘤医学，2007，15(2)：187.
[2] 王凤明，孙 健，朱 莉，等.放化疗综合治疗局部晚期鼻咽癌113例疗效观察[J].实用癌症杂志，2007，22(1)：77.
[3] 梁 颖，高剑铭，胡伟汉，等.诱导化疗联合同期放化疗对局部晚期鼻咽癌的远期疗效[J].癌症，2007，26(8)：885.
[4] 董 云，李志革.ERCC1、BRCA1在非小细胞肺癌的表达与顺铂耐药的研究进展[J].现代肿瘤医学，2010，18(5)：1037.
[5] 李 霞.切除修复交叉互补基因1的研究进展[J].临床和实验医学杂志，2010，9(22)：1747.
[6] 曹轶林，芩 洪.核苷酸切除修复与铂类耐药研究进展[J].现代肿瘤医学，2008，(11)：122.
[收稿日期：2014-01-10 编校：李晓飞]
