不同炮制方法巫山淫羊藿中3个黄酮类成分油水分配系数的比较

　　巫山淫羊蕾为小聚科植物巫山淫羊蕾助imedi-umwushanenseT.S.Ying的干燥叶，2010年版中国药典收载有生品和羊脂油炙品2种饮片规格，生品祛风湿、强筋骨力胜，羊脂油炙后增强温肾助阳作用，多用于阳屡、不孕。黄酮类成分是巫山淫羊蕾的主要活性成分，具有抑制破骨细胞、促进成骨细胞生长、抗抑郁、增强免疫功能、保护心脑血管系统、抑菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多方面的药理活性。文献报道巫山淫羊蕾中朝霍定C含量较高，羊脂油炙后朝蕾定C含量有的升高有的降低，淫羊霍昔含量增加}4-91。油水分配系数是药物在有机相和水相浓度的比值，与药物在体内溶解、吸收、分布、转运有关，目前已有朝蕾定Cno)和淫羊蕾昔“二单体的油水分配系数的测定，尚未见此类成分在巫山淫羊蕾水煎液中的油水分配系数的研究报道。饮片中成分复杂，存在相互作用，可能会影响此类成分的药效，因此本文比较了巫山淫羊霍生品和油炙品水煎液中朝蕾定C、淫羊蕾昔、淫羊蕾次昔3个成分(结构见图1)，在不同pH下油水分配系数，模拟巫山淫羊蕾中不同糖个数的黄酮昔类成分在其他成分影响下的体内吸收情况，为深入阐释羊脂油炙淫羊蕾增效机理提供依据。　　1材料　　1.1仪器Agilent1100高效液相色谱仪(DAD检测器，四元泵，在线脱气，自动进样)，SB-25一12DTDN型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，Sartorius2004MP型电子天平;国际型电机振荡机(上海市南汇县横滨人民公社农业机械厂);pH测定仪(HI98128型，北京哈纳科仪科技有限公司)。　　1.2试药　　巫山淫羊霍药材由贵州同济堂制药有限公司提供，经北京中医药大学中药生药系陈玉婷教授鉴定为巫山淫羊霍(EpimediumwushauenseT.S.Ying去除茎和叶柄，摘取叶片，备用。羊脂购于北京清真食品公司，经炼制后取羊脂油备用。　　生品:取巫山淫羊蕾药材叶片，喷淋清水，闷润，切制成1cm左右的宽丝，自然晾干。　　油炙品:取羊脂油置热锅内熔化，加人巫山淫羊霍丝，用文火加热，翻炒至油被吸尽，有光泽，取出放凉。每100kg巫山淫羊蕾，用羊脂油20kgo1.3试剂淫羊蕾昔对照品(中国食品药品检定　　研究院，批号为110737一200413，含量测定用);对照品朝蕾定C、淫羊蕾次昔11(自制，紫外图谱或红外图谱、NMR数据与文献报道一致，归一化法检测纯度分别为98.3%,98.8%);乙睛(色谱纯，美国Fisher公司);水为高纯水;正辛醇(分析纯，天津市光复精细化工研究所);石油醚(60一90℃)、正己烷、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酉氰二氯甲烷、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠均为分析纯(北京化工厂)。　　2方法与结果　　2.1色谱条件朝蕾定C,淫羊蕾昔、淫羊蕾次昔的含量测定方法为前期研究已发表的文献方法。采用ZobraxSB一C1。色谱柱(4.6mmx250mm,5N.,m)，流动相A为水，B为乙睛，梯度洗脱(0一10min,80%->75%A;10一28min,75%-->72%A;28一35min,72%-->65%A,35一55min,65%-->60%A,55一60min,60%->40%A)，检测波长270nm，流速1mＬ·min，进样量10μＬ．　　2.2水煎液的制备称取Sg巫山淫羊霍不同炮　　制品饮片，分别加人150mL蒸馏水浸泡1h，煎煮30min，纱布过滤，滤液备用，纱布用少量蒸馏水洗涤，倒人滤渣中，再加人蒸馏水50mL，煎煮20min,合并2次滤液，少量蒸馏水洗涤纱布及滤渣3次，与滤液合并，定容到250mL量瓶中，备用。　　2.3水煎液中油水分配系数测定方法　　取巫山淫羊蕾不同炮制品水煎液10mL，每个炮制品15份，水浴蒸干水分，分别用pH1.2的盐酸溶液以及pH2.O,pH3.O,pH4.O,pH5.O,pH6.0,pH6.8、pH7.0、pH7.4、pH7.8、pH8.0、pH9.0、pH10.O,pH11.O,pH12.0的磷酸盐缓冲液溶解残渣，定容到10mL量瓶中，作为供试液。用0.45N,m微孔滤膜过滤，分别进样10p,L，测定峰面积，色谱图见图2，以外标法计算浓度，得到朝霍定C,淫羊蕾昔和淫羊蕾次昔II3个指标性成分在不同pH条件下的浓度，作为Cn。　　精密量取用不同pH条件复溶的缓冲溶液5mL,置离心管中，加等量的水饱和的正辛醇，用封口膜封口，同样于25℃恒温培养振荡器中振摇24h，静置后在3500:·min条件下离心15min，吸取下层水相，过滤，进样10p,L，测定峰面积，按外标法以峰面积计算3者的不同pH条件下的浓度，作为C水。　　2.43个黄酮类成分油水分配系数测定结果巫山淫羊霍生品和油炙品水煎液中，不同pH下朝蕾定C、淫羊蕾昔、淫羊霍次昔n油水平衡系数测定结果见表1。　　2.4.1朝蕾定C油水分配系数测定结果分析在各个pH点，巫山淫羊蕾生品和油炙品水煎液中朝蕾定C的油水分配系数的大小没有规律性变化。　　因成人胃液pH在0.9一1.5之间，酸性较强，小肠液pH在7.6左右，大肠液pH在8.3一8.4之间，选择了pH为1.2,7.4,7.8和8.0，比较生制品中朝薰定C的油水分配系数。pH1.2,7.4,7.8条件下，朝霍定C油水分配系数高低为:Ｐ油炙>Ｐ生;pH8条件下，油水分配系数高低为:Ｐ生>Ｐ油炙。油炙品中朝蕾定C油水分配系数，在pH6一8之间是上升趋势，且比生品高，说明油炙品在肠内会比生品易于吸收。　　2.4.2淫羊霍昔油水分配系数测定结果分析巫山淫羊霍生品和油炙品水煎液中，pH1.2,pH7.气pH7.8,pH8.O,pH9.0条件下，油水分配系数高低均为:Ｐ油炙>Ｐ生。油炙品中淫羊蕾昔的油水分配系数，在pH6一8之间，呈上升趋势。生品在pH1.2条件时，分配系数较小，说明生品中淫羊霍普在胃液中亲水性较大，不利于药物的进一步渗透与吸收。　　不同炮制品中淫羊蕾昔的油水分配系数比朝霍定C高很多，说明淫羊霍昔在体内分布吸收会好于朝霍定C。　　2.4.3淫羊蕾次昔n油水分配系数测定结果巫山淫羊蕾生品和油炙品水煎液中，淫羊霍次昔11的油水分配系数变化趋势波动较大，不同的pH条件会影响其在体内的吸收分布，生品中淫羊蕾次昔11在pH2时油水分配系数最大(16.50)，油炙品在pH5时最大(19.50)，在pH1.2一5之间，是上升趋势，在pH6一12之间，是缓慢下降趋势。炮制方法对淫羊霍次昔11的油水平衡系数影响很大。pH1.2,pH7.4,pH7.8,pH8.O,pH9.0条件下，油水分配系数高低均为:Ｐ油炙>Ｐ生，说明淫羊蕾次昔fl在油炙品中肠内吸收分布比生品好。　　3讨论　　药物在体内的作用强弱和起效时间快慢除了与其自身的结构有关外，还与有效成分的溶出率、药物的解离常数和油水分配系数有关。传统临床使用中药多以汤剂为主，因此探讨炮制对巫山淫羊蕾水煎液中3个黄酮类成分的影响，对饮片炮制和临床应用具有指导意义。　　前期实验测定了朝蕾定C和淫羊蕾昔的平衡溶解度和油水分配系数，结果朝霍定C的平衡溶解度要远远大于淫羊蕾昔，说明朝蕾定C易溶于水。但油水分配系数朝蕾定C要小于淫羊蕾昔，说明朝蕾定C在体内的分布吸收比淫羊蕾昔差。这可能与两者的化学结构有关，朝蕾定C是三糖昔，易溶于水，使亲油性降低，不利于透过细胞膜。　　淫羊蕾昔的油水分配系数比朝蕾定C的分配系数高出约40倍，不同炮制品水煎液中朝蕾定C的油水分配系数相应的也比淫羊蕾昔低，但倍数降低很多，说明单体成分的油水分配系数与饮片水煎液有较大差别，饮片中多种成分有相互作用，影响朝蕾定C和淫羊蕾昔的分配系数，因此应在单体成分研究的基础上，深人研究在中药饮片中的不同成分的油水分配系数变化规律。　　朝蕾定C、淫羊蕾普、淫羊蕾次昔fl分别为三糖昔、二糖昔和单糖昔，在炮制过程中存在成分的转化，生品和油炙品水煎液中油水分配系数不同，说明糖的个数对此类成分的油水分配系数有影响。中医药理论认为羊脂油本身具有温肾助阳作用，其主要成分为脂肪酸油，巫山淫羊蕾羊脂油炙品与清炒品比较，新产生9个化合物，其中有8个化合物来自于羊脂油，且本实验在与体内环境接近的pH范围内，油炙品中的油水分配系数均高于生品，说明羊脂油中的成分促进了巫山淫羊蕾中药效成分的分布吸收，可能是油炙后增效的作用机制之一。　　参考文献1 MENG Ning(孟宁),KONG Kai(孔凯),LI Shi-weng(李师翁).Advances in studies on chemical constituents and pharmaceutical activities in species of Epimedium(淫羊藿属植物化学成分及药理活性研究进展).Acta Bot Boreali-Occident Sin(西北植物学报),2010,30(5):10632 HUANG Jian(黄健),ZHANG Jin-chao(张金超),ZHANG Tian-lan(张天蓝),et al.Influence of epimedium glycoside on osteoclastic bone absorption and its function mechanism(淫羊藿苷对破骨细胞骨吸收功能的影响及其作用机制).Chin Sci Bull(科学通报),2006,51(24):28513 LIU Yi-heng(刘亦恒),ZHANG Hai-ying(张海英),ZANG Hong-min(臧洪敏), et al.Effect of Herba Epimedii flavone on the osteoblasts metabolism in vitro(淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的机制研究).China J Chin Mater Med(中国中药杂志),2006,31(6):4874 PEI Li-kuan(裴利宽),GUO Bao-lin(郭宝林).A review on research of raw material and cut crude drug of Herba Epimedii in last ten years(近10年淫羊藿药材及饮片研究进展).China J Chin Mater Med (中国中药杂志),2007,32(6):4665 JIA Kui-rong(贾魁荣).Content determination of epidemin C in crude Epimedium wushanense materials and decoction pieces (巫山淫羊藿药材及饮片中朝藿定C含量测定).China J Chin Mater Med (中国中药杂志),2008,33(6):7076 XIE Juan-ping(谢娟平),XIANG Ji-ming(向纪明),WANG Hao-dong(王浩东).Effects of different processed products on the main ingredient of epimedin C and icariin of Epimedium wushanense(不同方法炮制对巫山淫羊藿中主要成分朝藿定C和淫羊藿苷的影响).Chin J Pharm Anal (药物分析杂志),2011,31(4):674