自研硝苯地平缓释片(I)与原研制剂体外释放度一致性评价

　　硝苯地平(nifedipine)是具有代表性的钙拮抗剂药物，系目前临床治疗高血压和心绞痛的首选药物之一，但普通硝苯地平片存在药效持续时间短及副作用大的缺点，缓释片剂则能有效解决普通制剂的缺点。　　在国内，硝苯地平缓释片(I)有16家药厂生产，释放度检查均执行国家药品标准WS(X一056)-2004Z}2}。本实验分别使用国家药品标准和日本橙皮书的释放条件对已上市硝苯地平缓释片(I)和原研制剂(Adalat@一L10进行释放曲线测定和对比，并按《国家药品安全“十二五”规划》中关于“化学药品仿制药与原研药进行质量一致性研究和评价”的要求对硝苯地平缓释片(I)进行工艺改良，以日本拜耳药品株式会社生产的Adalat⑧一L10作为原研制剂，采用‘旧本厚生省药品体外溶出试验信息库”中Adalat@一L10的4种溶出条件进行试验研究，考察自研制剂与原研制剂。武加速6个月的样品在4种不同释放介质中释放曲线的一致性，并考察3批自研制剂释放曲线的均一性和重现性。　　1仪器与试药　　岛津LC一2010高效液相色谱仪、检测器;美国DISTEKEVOLUTION6300自动溶出仪;天津市天大天发科技有限公司ZRS一8G智能溶出仪。硝苯地平对照品:中国食品药品检定研究院，批号100338一201103，含量为99.9。原研制剂:Adalat⑧一L10，日本拜耳药品株式会社，批号JPR1912，规格10rng。已上市药品:硝苯地平缓释片(I），广东环球制药有限公司，批号100713一2，规格10mg。自研制剂:硝苯地平缓释片(I)，广东环球制药有限公司，批号20120201,20120202,20120203，规格10mg，批量为每批10万片。盐酸、氯化钠、冰醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠均为分析纯;聚山梨酷一80为色谱纯。　　2释放度测定方法　　2.1释放介质的配制水:纯化水。pH1.2人工胃液:取氯化钠2.0g，加水适量溶解后，加盐酸7mL，再加水稀释至1000mL,混匀，即得。　　pH4.0醋酸盐溶液:将0.OSmol·L醋酸溶液与0.OSmot·L醋酸钠溶液按16.4:3.6比例混合，即得。　　pH6.8磷酸盐缓冲液:取磷酸二氢钾1.7g和无水磷酸氢二钠1.775g，加水溶解并定容至1000mL，即得。　　2.2色谱条件流动相:0.1磷酸一甲醇一乙睛(40:30:30);流速:1.0mL·min:检测波长:235nm;进样量:20pL。色谱柱:依利特Cis柱150mmx4.6mm,5pm)。　　2.3释放度测定法避光操作。取样品6片，照释放度测定法(中国药典2010版二部附录XD)第一法，采用溶出度测定法(中国药典2010年版二部附录X)第二法(桨法)的装置，以水900mL(含0.3%聚山梨醋一80为释放介质，转速为75r·min，依法操作，分别在0.25,0.5,1,2,4,6,8,12h取溶液10mL,滤过，弃去5mL初滤液，并即时补充相同温度、相同体积的释放介质，续滤液作为供试品溶液。另取硝苯地平对照品约10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量超声使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取3mL，置100mL量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液及对照品溶液各20},L，注人液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积分别计算每片在不同时间的累计释放量。　　3方法与结果　　3.1释放量测定验证(释放介质:0.3%聚山梨酉旨一80水溶液)　　3.1.1专属性考察取空自片、自研制剂(批号:20120201)、原研制剂各1片及硝苯地平对照品10mg，按“2.3”项下释放度测定法操作，在1h时取样(原研制剂及自研制剂在1h时的释放约为50%，与对照品溶液浓度相当)，滤过，精密量取各续滤液及释放介质各20L，注人液相色谱仪，记录色谱图。结果见图1，空白辅料、释放介质对本品释放度测定无干扰，表明本方法专属性良好。　　3.1.2线性关系考察避光操作。精密称取硝苯地平对照品10tng，加甲醇溶解并用溶剂(0.3%聚山梨醋一80水溶液)稀释得系列浓度为2.004,4.008,6.012,8.016,10.020,12.024},g·znL的对照品溶液。精密量取上述对照品溶液各20},L，注人液相色谱仪，记录色谱图。以硝苯地平浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得线性方程:　　Y=7.132x10'}+4.092x103r=0.9999　　表明本品浓度在2.004一12.024g·mL‘的范围内线性关系良好。　　3.1.3重复性试验取自研制剂(批号:20120201)6片，按“2.3”项下释放度测定法操作，在12h时取样，滤过，精密量取各续滤液20},L，注人液相色谱仪，记录色谱图，计算释放度及RSD。结果见表l,RSD为0.93%，表明本方法重复性良好。　　3.1.4中间精密度试验取自研制剂(批号:20120201)6片，改变分析日期、人员、设备，按“2.3"项下释放度测定法操作，在12h时取样，滤过，精密量取各续滤液20L，注人液相色谱仪，记录色谱图，计算释放度及中间精密度RSD。结果见表1，中间精密度RSD为1.4%，表明本方法中间精密度良好。　　3.1.5准确度试验精密称取对照品适量，分别加人一定比例的空白辅料，配制成10%,60%,110%3种不同浓度溶液，滤过，精密量取各续滤液20L，注人液相色谱仪，记录色谱图，每浓度平行操作3份，计算回收率。另取原研制剂，进行加样回收试验，结果见表2、表3，回收率平均值分别为99.4%}100.2%，表明本方法准确度良好。　　3.1.6滤膜干扰试验精密称取对照品10.15mg，按“2.3”项下释放度测定法操作制得对照品溶液，分别精密量取弃去初滤液。（不过滤、直接进样),3,爪10mL后的续滤液各20},L，注人液相色谱仪，记录色谱图，比较峰面积。结果见表4,RSD为0.2%，表明滤膜对本品释放度测定无吸附干扰。　　3.1.7溶液稳定性试验L87取自研制剂(批号:20120201)，按“2.3”项下释放度测定法操作，分别以pH1.2,pH4.O,pH6.8溶液及水900mL(均含0.3%聚山梨醋一80)为释放介质，在12h时取样。　　取各供试品溶液及对照品溶液，置室温条件下避光放置，分别在0,4,8,12,16,20,24,36,48h精密量取各20p,L，注人液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积RSD。结果见表5，表明4种介质样品溶液在室温条件下避光放置48h稳定。　　3.1.8色谱条件变化取对照品溶液，在确定的色谱条件基础上，考察分别改变磷酸浓度、流速、柱温、色谱柱及流动相比例对测定的影响。色谱条件变化见表6,测定结果见图2一6，在色谱条件有微小变化时，测定不受影响，表明此方法耐用性良好。　　3.2已上市药品及原研制剂释放度比较取已上市药品硝苯地平缓释片(I)及原研制剂，分别使用国家药品标准及日本橙皮书的释放条件(见表7)，按“2.3”项下释放度测定法操作。结果见图2，两者在相同的释放条件下释放行为不相似(fa因子<50)。　　3.3释放曲线测定和对比结果　　3.3.1自研制剂与原研制剂对比取自研制剂(批号20120201)及原研制剂，进行加速稳定性试验，在温度40℃士2℃、相对湿度75%土5%条件下放置6个月，得加速6个月自研制剂及加速6个月原研制剂样品。按“2.3”项下释放度测定法操作，分别测定0d自研制剂(批号:20120201)、加速6个月自研制剂(批号:20120201,0d原研制剂、加速6个月原研制剂样品，在pH1.2,pH4.O,pH6.8溶液及水900mL(均含0.3聚山梨酷一80)释放介质中的释放曲线，并采用相似性fz因子法评价不同pH介质条件下自研制剂与原研制剂释放曲线的相似性。结果见图4.fz因子汇总见表8，结果表明自研制剂与原研制剂Od、加速6个月样品在4种不同释放介质中释放曲线人因子均大于50;自研制剂Od与加速6个月样品在4种不同释放介质中释放曲线.fz因子均大于$0，基本重叠。　　3.3.2在不同转速下释放曲线对比分别取原研制剂及自研制剂，按“2.3”项下释放度测定法操作，分别使用50r·min,75r·min,100r·min3种不同转速测定两者的释放曲线，并采用相似性关因子法评价不同转速下自研制剂与原研制剂释放曲线的相似性。结果见图5。转速为50,75,100r·min时，分别为76,65,65。表明不同转速下自研制剂与原研制剂的释放行为相似(关>50)a3.4自研制剂均一性、重现性　　分别取3批自研制剂(批号:20120201,20120202,20120203)0d及加速6个月样品，按“2.3”项下释放度测定法操作测定，计算各时间点批内及批间RSD。结果见表9,3批自研制剂Od及加速6个月样品批内、批间RSD均<5.0%要求:前期RSD<20%，后期RSD<10%，表明样品均一性及工艺重现性良好。　　4结论与讨论　　由于硝苯地平在4种介质(均含0.3%聚山梨醋一80)溶解度相近(pH1.2:57g·mL-L;pH4.0:65p,g·mL;pH6.8:45p,g·mL;水:59Ig·mL，故本实验仅验证一个介质(0.3%聚山梨醋一80水溶液)释放量的测定方法。　　自研制剂与原研制剂(Od样品、加速6个月样品释放曲线对比试验研究可知:1.所测定原研制剂4条释放曲线与日本公布的同品种数据一致;自研制剂与原研制剂在4种不同释放介质中的释放曲线相似，在不同转速下也相似，可以判定自研制剂与原研制剂体外释放行为一致，药学等效。2.自研制剂Od样品与加速6个月样品在4种不同释放介质中的释放曲线基本重叠;3批自研制剂均一性和重现性均符合《化学药物口服缓释制剂药学研究技术指导原则》要求仁。表明自研制剂样品稳定且可产业化。　　在日本，硝苯地平缓释片(I)也有9家药厂生产，尽管处方和工艺不同，但均需与原研制剂(Adalat⑧一L10)在上述释放条件下进行4条释放曲线对比。已上市药品与原研制剂(Adalat)-L10)无论用日本释放度标准测定，还是用国内标准测定，释放曲线均不一致(无因子均小于50)，两者体内生物利用度不一致的概率也将高达90%+4}o为此，依据药品一致睦评价，用修改了已上市药品处方和工艺而所得的自研制剂做了上述研究，研究结果表明自研硝苯地平缓释片(I)也能做到与原研制剂(Adalat⑧一L10)“质量一致”。本试验也为本品将要进行的与原研制剂人体生物等效性对比试验提供了依据。　　参考文献1 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