离子色谱法测定奥沙拉嗪钠原料药中甲磺酸的含量

　　急慢性溃疡性结肠炎为一种主要局限于肠粘膜及粘膜下层的炎症性肠病，目前发病机制尚不清楚，在全球范围内发病率呈增加趋势，治疗急慢性溃疡性结肠炎的常用药为柳氮磺毗A}，其在结肠内可被细菌分解为起效成分5一氨基水杨酸(5-ASA和无活性的磺胺毗陡，但磺胺毗咤易引起不良反应，导致不少病例因而减量或中止治疗。奥沙拉嗓钠(oisalazinesodium)，别名为奥柳氮、地泊坦，化学名3,3’一偶氮双(6一经基苯甲酸)二盐。由瑞士PharmaciAB公司研发，并于1989年在丹麦首次上市。由于其口服后在胃肠道吸收少，在结肠部位被细菌分解成相同的二分子的5一氨基水杨酸，增强了治疗效果，降低了不良反应，因此近年来常用来替代柳氮磺毗。奥沙拉凑钠的主要合成路径常以水杨酸为原料，经甲醋化、硝化、甲磺酞化、催化氢化、偶合、碱解等反应步骤制取，该路线步骤较多，操作复杂，收率低且易引入反应副产物。通过测定奥沙拉嗓钠中甲磺酸的含量，可控制合成产物的质量。目前，欧洲药典7.0版及英国药典2012版均采用高效液相色谱联合电化学检测器的方法对奥沙拉嗓钠中的甲磺酸进行测定，并规定其允许限度为0.3%。此外，甲磺酸的测定法还包括离子色谱法、GC法以及容量法等，其中离子色谱法作为20世纪70年代发展起来的一种新型液相色谱分析技术，因其操作简便，灵敏快速，具有较高的精密度和较强的抗干扰能力，保证了分析结果的准确可靠，且该方法所使用的淋洗液中较少使用有机溶试剂，也更为环保，近年来也被应用于药物及合成中间体的分析等方面，但国内尚未见到采用离子色谱法测定奥沙拉嗓钠中甲磺酸的相关报道。本文采用高纯水溶解样品，建立了采用离子色谱测定奥沙拉嚓钠中甲磺酸含量的方法，经方法学验证，该法简便、环保，灵敏度高，稳定性和重复性好，结果准确，可有效地控制奥沙拉凑钠原料药的质量。　　1仪器与试药　　1.1仪器MetrohmIC761型离子色谱仪，包括电导检测器(瑞士万通公司);分离柱:ASupp7一250阴离子分析柱(250mmx4.0mm,5Nm;梅特勒AE一240型电子分析天平;超纯水系统(TTL一10B)(北京同泰联科技公司)。　　1.2试药甲磺酸对照品(纯度为99.96%，碳酸钠、碳酸氢钠为分析纯，实验用水均为电阻率为18.2MS2·cm的高纯水;奥沙拉凑钠原料药(西安大唐制药有限公司提供，批号2012060、20120602,20120603)。　　2方法与结果　　2.1色谱分析条件色谱柱:ASupp7-250阴离子柱(250~x4.0mm,5Nm);流动相:3.2mmoL·碳酸钠和1.0mmolL’碳酸氢钠一丙酮(95:5)，等度洗脱;流速:0.7mL·min;进样量:20p,L2.2标准曲线制备精密称取甲磺酸对照品适量，用高纯水溶解制成浓度为0.1334mg·mL的溶液，作为甲磺酸对照品储备液;精密移取储备液1.0,2.0,5.0,7.0,10.0mL，分别置100mL量瓶中，加高纯水稀释定容至刻度，即得标准曲线系列溶液，浓度分别为1.334,2.668,6.670,9.338,13.34pg·mL。　　2.3供试品溶液的制备称取奥沙拉嗦钠原料约O.lOg，精密称定，置25mL量瓶中，加高纯水20mL超声至溶解，再用高纯水稀释至刻度，摇匀。进样前用0.45N.,m微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。　　2.4专属性试验依次进样空白溶剂(高纯水)、甲磺酸对照品溶液和供试品溶液，可知色谱图中11.18min的色谱峰为甲磺酸的峰，甲磺酸峰与其他色谱峰之间分离度良好，无相互干扰。色谱图见图t。　　2.5线性关系考察取“2.2”项下系列浓度的对照品溶液，分别进样20L，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积Y为纵坐标，浓度X(g·mL)为横坐标进行线性回归，得回归方程:　　Y=5.7342X一0.7637r=0.9999　　结果表明甲磺酸浓度在1.334一13.34g·mL‘范围内呈良好线性。　　2.6精密度试验取同一份供试品溶液，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD(n二6)为0.48%，结果表明精密度良好。　　2.7检出限试验在上述色谱条件下，依据SlN=3确定甲磺酸的检出限为0.10.A,gmL-'o2.8稳定性试验取已制备好的同一份供试品溶液，分别在0,1,2,4,8,12和24h进样，记录峰面积，计算RSD(n=7)为1.6%，结果表明供试品溶液24h内稳定性良好。　　2.9重复性试验取奥沙拉凑钠(批号20120602),按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液6份，进样测定，结果样品中甲磺酸的平均含量(n=6)为0.10%,RSD为2.1%。　　2.10回收率试验称取已知甲磺酸含量(0.10%)的奥沙拉凑钠样品(批号20120602)0.OSg共9份，随机分成3组，每组3份，精密移取对照品储备液5mL置20mL量瓶中，加水稀释至刻度，作为对照品储备液(2),3组分别精密加人对照品储备液(2)1.0,1.5,2.0mL，按“2.3”项下方法制备供试溶液，得到浓度水平为已知含量的80%,100%及120%的3个浓度组，在上述色谱条件下进行测定，每组平均回收率(n=3)分别为100.1%,99.6%,99.5%,RSD分别为2.0%,0.54%,0.64%;9份样品的平均回收率为99.7%。　　2.11样品测定分别取批号为20120601,20120602,20120603的奥沙拉嚓钠原料药样品各2份，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。在上述色谱条件下进行测定，将所得甲磺酸峰面积以“2.5”项下的标准曲线计算，结果上述3批奥沙拉嗓钠样品中甲磺酸的含量分别为0.11%,0.10%,0.10%。　　3讨论　　3.1实验中考察了含有不同质量浓度的碳酸钠与碳酸氢钠的流动相系统，结果表明以3.2，碳酸钠一1.0mmol·L一1碳酸氢钠的流动相系统进行等度洗脱时，所获得色谱图最理想，为了延长阴离子色谱柱使用寿命，拟在该流动相系统中加人一定量的丙酮。加人后甲磺酸色谱峰的色谱现象无明显改变。最终确定以3.2mmol·碳酸钠和1.0mmol"L-1碳酸氢钠一丙酮(95:5)作为流动相。　　3.2欧洲药典7.0版与英国药典2012年版中采用HPLC法对奥沙拉嗓钠中的甲磺酸进行测定时，均需使用盐酸等试剂，样品处理步骤复杂且不环保。　　本实验摸索并建立的离子色谱法测定奥沙拉嗓钠中的甲磺酸，对比HPLC法具有更加简便、环保，灵敏度高，结果准确的特点，更适合用于有效地控制奥沙拉凑钠原料药的质量。　　3.3由于奥沙拉凑钠与甲磺酸在水中均具有良好的溶解性，且实验证明以高纯水作为溶剂时不会对离子色谱的分析引人干扰，故最终选择以高纯水作为溶剂。　　3.4本实验摸索并建立了离子色谱法测定奥沙拉嗓钠原料药中甲磺酸的条件，该方法快速、方便，重复性较好，误差较小，灵敏度高，不易受环境影响，甲磺酸峰形较好，且无干扰，多项试验证明稳定性和重复性好，可作为奥沙拉凑钠原料药中甲磺酸测定的参考方法。　　参考文献1 ZHAO Hua(赵华),JIA Gui-zhi(贾桂芝).The progress in clinical treatment of ulcerative colitis(溃疡性结肠炎临床治疗新进展).Chin J Conval Med(中国疗养医学),2012,21(7):3052 GAO Zhi-jing(高志静).The progress of studying the drug of 5-aminosalicylic acid in resistance of ulcerative colitis(抗溃疡性结肠炎5-氨基水杨酸类药物的研究进展).Chin J Changzhi Med Coll(长治医学院学报),2010,24(1):653 CI-REN Yang-zong(次仁央宗),XU Xiao-rong(徐晓蓉),LIU Zhan-ju(刘占举).The pharmacology and clinical applications of amino salicylic acid preparations(氨基水杨酸制剂的药理学与临床应用). Clin Med J(临床药物治疗杂志),2011,9(2):334 YU Ju-zhen(余菊贞).Curative effect compared observation of olsalazine and sulfasalazine on ulcerative colitis(奥沙拉嗪与柳氮磺吡啶治疗溃疡性结肠炎的临床对比研究). Guide China Med(中国医药指南),2011,9(36):279