五苓系列制剂中挥发油的GC指纹图谱研究

　　五苓系列制剂均具有温阳化气、利湿行水的功效，适用于症见小便不利、水肿腹胀、呕逆泄泻、渴不思阴等症。五等胶囊由获菩、泽泻、猪等、肉桂、炒白术5味中药组成，工艺中规定肉桂提取挥发油，泽泻、白术用60%乙醇加热回流提取，减压回收溶剂;五菩片由获荃、泽泻、猪菩、桂枝、炒白术5味中药组成，工艺中规定，桂枝和白术蒸馏提取挥发油。　　五苓系列品种工艺均规定要对部分药材提取挥发油，再将挥发油进行喷洒后制成制剂。挥发油因其自身特点，在药材炮制、生产、储藏、运输过程中容易流失，特别是生产过程中挥发油不易控制。建立挥发油成分指纹图谱和科学的评价方法，可以充分了解制剂中挥发油成分的保留情况，考察生产工艺、样品贮存等环节的合理性，从挥发油的角度评价制剂的有效性。另外，根据特征峰的归属结果，起到定性鉴别作用，从而有针对性地进行调整和控制。　　1仪器、试药和样品　　6890N气相色谱仪(美国安捷伦公司)，FID检测器;BS224S电子分析天平(德国塞多利斯公司)。乙醇为色谱纯。桂皮醛对照品(批号111710一200513)、肉桂(批号121363一200401)、桂枝(批号121191-200402)、白术(批号120925一200708)、泽泻(批号121081-200603)对照药材均由中国食品药品检定研究院提供;肉桂、桂枝、白术、泽泻、获等、猪等药材从西安万寿路药材市场购买，部分生产企业提供了药材、饮片，经陕西省食品药品检验所中药室鉴定;五菩片、五等胶囊样品均购自市场。　　2色谱条件　　色谱柱:DB一1701(30mx320Nmx0.25mm);进样口温度:2200C;检测器温度:2500C;升温程序:45℃保持2min，以5℃·min升至200℃，保持10min;分流比:10:1;柱流速:0.6mL·min‘;进样体积:1N.,La3供试品溶液的制备取样品适量，研细，取约1g，精密称定，置2mL具塞烧瓶中，精密加入乙醇5mL，称定重量，超声处理(功率500W,频率40kHz)40min，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，离心(3000:·min10min，取上清液，即得。4对照品溶液的制备取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成0.6mg,mL溶液，摇匀，即得。　　5精密度试验　　将制得的供试品溶液连续进样5次，每次所得主要色谱峰数相同，各峰保留时间的RSD均小于0.05%o6重复性试验取同批次样品5份分别提取挥发油制成供试品溶液，每份进样后得到的主要色谱峰数相同，保留时间RSD均小于0.1%。　　7稳定性试验　　取同批次样品的供试品溶液分别在5,15,20h后进样，所得主要色谱峰数相同，各峰保留时间的RSD均小于0.2%。　　8峰归属　　分别取肉桂、桂枝、白术药材，桂枝加白术药材，按处方工艺要求进行提取后，按处方量加乙醇制成溶液;取模拟处方制备的样品及不含上述药材的阴性样品，按照“3”项下方法提取挥发油，制备成供试溶液。收集上述溶液和桂皮醛对照品溶液的色谱图，通过对比色谱图并查阅相关文献，对色谱图中的主要色谱峰进行归属。结果见表l.　　9指纹图谱及评价方法的建立　　将样品图谱全谱导人“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A”进行评价，各色谱图见图to经过软件计算，根据相似度值的大小对样品进行评价，共分为五类[6]，规定相似度,0.95为I类，0.90相似度<0.95为B类，0.80相似度<0.90为IQ类，0.60(相似度<0.80为N类，相似度<0.60为V类。　　10结果　　对18批五荃胶囊和10批五荃片样品的测定和分类结果见表2。　　11讨论　　11.1若利用生成的平均谱图为参照图谱进行评价，得到的相似度值大于0.95(I类)的，胶囊剂、片剂分别能达到55.6%和60.0%。但当选择利用色谱峰数量最多、峰面积最大的样品色谱图作为参照图谱进行评价(未选用模拟制剂的色谱图作为参考图谱，原因是因实验条件有限，对肉桂挥发油未进行日一环糊精包合)时，结果为相似度)0.95(I类)的，胶囊剂、片剂分别能达到11.11%和10.0%。分析原因，是因为所有样品中，出现特征峰较多、面积较大的的样品数量少，所占的权重低。为能客观反应样品内在质量的差异，根据色谱峰归属结果，认为以样品图谱中峰数多、面积较大的图谱为参照峰进行分析和评价较为合理。　　11.218批五菩胶囊均能明显检出肉桂挥发油的主要色谱峰，其中有4批中白术药材特征峰不能明显检出，占总样品量的22.2%，这4批五菩胶囊样品均属于W类，即按特征峰评价结果与相似度软件计算结果一致。　　11.310批五荃片分别来自2家生产企业，其中第1家9批样品，第2家1批样品。为使对比结果更加直观，比较2家企业生产工艺的一致性，令第2家样品色谱图作为对照图谱(即相似度为1.000)，对2家样品进行分析。结果表明，第1家生产的样品的色谱图相似度分布于0.208一0.409之间，显然，不同生产企业的样品挥发油差异较大。另外，按五菩片工艺要求，桂枝和白术均提取了挥发油，但根据峰归属结果，桂枝、白术挥发油的主要色谱峰均不明显。这与之前对其他制剂品种的研究结果;相符。究其原因，与药材的质量、贮藏时间及条件、制剂工艺等因素均有关。　　故中药制剂中挥发油的质量应引起足够的重视，质量标准的提升尤其重要。应从药材质量的源头开始，规范使用和生产过程，及时提高制剂工艺技术，如采用p一环糊精包合技术等，及时提高药品质量标准以确保中药制剂的疗效可靠。　　参考文献　　 XU Li-ping (许利平),ZHANG Qiang (张强),SHEN Ying-jun (沈映君).Quantitative analysis of cinnamaldehyde in distilled oil of Ramulus Cinnamomi by gas chromatography (桂枝挥发油中桂皮醛的气相色谱定量分析).J Beijing Univ Tradit Chin Med (北京中医药大学学报),2006,29(3):193 .　　LIU Hong-xing(刘红星),SUN Zhen-jun(孙振军),HUANG Chu-sheng(黄初升),et al. The comparison of chemical component analysis about volatile oil from Cinnamomum cassia bark,Cinnamomum cassia presl and Cinnamomum cassia leaf by gas chromatography-mass spectrometry(桂皮、桂枝、桂叶挥发油的化学成分比较分析).Food Res Dev (食品研究与开发),2010,31(12):144 .　　ZHANG Gui-zhi(张桂芝), ZHANG Shi-nan(张石楠),MENG Qing-hua(孟庆华),et al.GC-MS analysis of chemical components of Cortex Cinnamomi and Guipi (GC-MS分析肉桂与桂皮挥发油的化学成分).Chin J Pharm Anal(药物分析杂志),2009,29(8):1256.　　SHE Jin-ming(佘金明), ZHONG Ming(钟明), LIANG Yi-zeng(梁逸曾),et al.Comparative analysis of volatile constituents in herbal pair Ramulus Cinnamomi-Atractylodes macrocephala and its signal herb by GC-MS(药对桂枝-白术及其单味药中挥发油成分GC-MS的比较分析).J Cent South Univ (Nat Sci) (中南大学学报自然科学版),2011,42(1):22