麻柴止咳颗粒质量标准研究

麻柴止咳颗粒是由麻黄、柴胡、苦杏仁、栀子、甘草等药材组成[1-2],功能为清肺止咳、化痰平喘、抗菌消炎,临床主要用于小儿外感及内伤咳嗽引起的发热恶寒、咳嗽痰黄、气促喘息、咽喉肿痛等症状。为了有效控制其质量,笔者采用高效液相色谱(HPLC)法对颗粒中君药麻黄进行含量测定研究,并对颗粒中各味药材进行薄层色谱(TLC)研究,最终确定了柴胡、栀子薄层色谱鉴别条件。

1仪器与试药

1.1仪器戴安P68O高效液相色谱仪(四元泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、MWD多波长检测器、DIONEX化学工作站);UltiateⅩB^C1:色谱柱(4.6mm×25o mm,5um);BP211D型电子分析天平(德国阮公司,0.01mg);LC-350A型超声波中药处理机(山东济宁超声设各有限公司)。

1.2试药盐酸麻黄碱对照品(供含量测定用,批号:171241刁00506,购自中国食品药品检定研究院)和栀子苷对照品(供含量测定用9批号;110749-200512,购自中国食品药品检定研究院);麻黄、柴胡、苦杏仁、栀子、甘草等药材(购自武汉强康药业有限公司,经武汉理工大学化工学院许沛虎教授鉴定符合⒛10版《中华人民共和国药典》相关规定);麻柴止咳颗粒(武汉健民中药工程有限责任公司自制中试产品,每袋6g);乙腈为色谱纯(美国%dia公司);水为双蒸水;其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1薄层鉴别

2.1.1柴胡薄层鉴别取本品3g,研细,加乙醚30mL9超声处理30min,滤过,弃去乙醚液,药渣挥干,加甲醇30mL回流提取30m血,放冷,滤过,滤液蒸干,残渣加水⒛mL溶解,再以水饱和的正丁醇溶液振摇提取两次,每次⒛mL,合并正丁醇液,加氨试液15mL洗涤,弃去氨试液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液[3]。另取柴胡对照药材粉末0.5g,加甲醇20mL,超声处理10min,滤过,滤液浓缩至2mL,即得柴胡对照药材溶液。分别吸取上述两种溶液8及5uL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃下放置的下层溶液为展开剂,展开9取出,晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛的婀%硫酸溶液,在60℃下加热至斑点显示清晰,置波长365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。按处方取不含柴胡的其他药材照本品制各工艺和供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液,结果阴性无干扰,薄层色谱结果见图1。

2.1.2栀子薄层鉴别取本品2g,研细,加无水乙醇⒛mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为供试品溶液[4]。另取栀子对照药材干燥粉末1g,加5O%甲醇10mL,超声处理+Cl mi11,滤过,滤液挥干,再加2mL甲醇溶解制成对照药材溶液。取栀子苷对照品,加乙醇制成每毫升含4mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各5,2,2uL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。供试品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的黄色斑点;再喷以10%硫酸乙醇溶液,在110℃加热至斑点显色清晰。在供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。按处方取不含栀子的其他药材照本品制备工艺和供试品溶液制各方法制成阴性对照溶液,结果阴性无干扰,薄层色谱结果见图2(栀子苷斑点Rf约0.55,波长:笏℃,相对湿度:65%)。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱:U1ti-mateⅩB-C1:色谱柱(4.6m1n×25Omm,5um);以乙腈-0.1%磷酸(含0.05%三乙胺）5∶95)为流动相;检测波长210nm;进样量:10uL。理论板数按麻黄碱峰计算应不得低于3OO0。65

2.2.2对照品溶液的制各取盐酸麻黄碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每毫升含0.O5mg的溶液。

2.2.3供试品溶液的制各取装量差异项下的本品,研细,取约5g,精密称定,置50mL量瓶,加人浓氨试液2mL,再加水至刻度下方少许,超声处理(功率250W,频率33kHz)30min,放冷,加水定容至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液乃mL,用乙醚振摇提取5次,每次⒛mL,合并乙醚液,加盐酸乙醇溶液(1→⒛)2mL,混匀,低温回收溶剂至干,用流动相转移至25 mL量瓶中,加0.1mol·L-l盐酸溶液至刻度,摇匀,即得[51。

2.2.4阴性样品溶液的制各按处方工艺制法制备不含麻黄的阴性样品,再按“2.2.3”项下方法制得阴性样品溶液。

2.2.5专属性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10uL,注人液相色谱仪,结果色谱图显示阴性无干扰,表明方法专属性较好。

2.2.6线性关系考察取盐酸麻黄碱对照品5mg,精密称定,加甲醇制成每毫升含0.097mg的对照品贮各液。精密量取对照品溶液1.0,2.O,3.094.O,5.0,6.0nlL,置10mL量瓶,加甲醇稀释至刻度,摇匀9制成不同浓度的对照爵丨溶液,按上述色谱条件进行测定。以峰面积(l为纵坐标,对照品浓度(x)为横坐标,得回归方程为y=1.1027X+21.159O4,r=0.9999,表明盐酸麻黄碱进样量在0.097~0.582ug范围内与峰面积呈良好线性关系。

2,2.7稳定性考察取供试品溶液(批号:20120521),在室温条件下,每隔4h测定一次峰面积,结果表明室温放置时供试品溶液在吲h内稳定,RSD=102%。

2.2.8重复性实验精密称取同一批(批号:201⒛521)样品6份,按“2.2.3”项下方法制各供试品溶液,按上述色谱条件测定盐酸麻黄碱含量,结果其含量RSD=0.99%。

2.2.9加样回收实验精密称取本品2,5g(批号:20120521),置50mL量瓶中,精密加人盐酸麻黄碱对照品贮各液1mL(按“2.2.2”项下方法制各对照品储各液,浓度C=0.3621mg.mLI),按“2.2.3”项下方法制各供试品溶液。按上述色谱条件测定供试品中盐酸麻黄碱的含量,计算回收率,结果见表1。结果表明:本方法的准确度较好,平均加样回收率为98.26%,RSD=1.72%。

2.2.10样品测定取各批麻柴止咳颗粒,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液。依法测定麻黄碱含量,按外标法计算,结果见表2。

3讨论

制剂中其他成分对盐酸麻黄碱的含量测定影响较大[6-7],需进行预处理,提取过程中用浓氨溶液使盐酸麻黄碱成游离态后,再用乙醚振摇提取,最后使用0.1mol·L1盐酸溶液定容。对流动相及其比例、流速、柱温进行考察,结果显示采用乙腈-0.1%磷酸(含0.05%三乙胺)(5:g~s)作为流动相9流速为1.0mL·n1in l柱温30℃效果较好,方法稳定,重复性好c对处方中其余药材进行薄层色谱鉴别。苦杏仁的鉴别[8]条件:采用甲醇超声处理,再用D101型大孔吸附树脂处理制备供试品溶液,点于硅胶G板,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:10)5~10℃放置12h的下层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以含0.8%磷钼酸的15%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色,结果斑点无法分离;甘草鉴别[9]条件:甲醇超声,再用水饱和正丁醇振摇提取制备供试品溶液,点于硅胶板,以正丁醇-冰醋酸-水(6:1∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(波长4nm)下检视,结果无法证明阴性无干扰。因此没有将苦杏仁及甘草收入质量标准中。加样回收实验中,一般对照品加人量与药品中麻黄碱含量之比应控制在约1∶1[10]。由于加人对照品的量较少,为减少称量误差,故将盐酸麻黄碱对照品配成贮各液加人。

参考文献：

[1]王本祥.现代中药药理与临床[M].天津:天津科技翻译出版公司,2004.1448-1460.

[2]汪受传.中医儿科学[M].北京:中国中医药出版社,2004.80-120.

[3]李红卫,焦海胜,高莉.复方柴胡口服液的薄层鉴别研究[J].中医药学刊,2005,(09):1706-1707.

[4]吕武清,龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社,1997.383-389.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.484-500.

[6]李进.小儿止咳合剂中盐酸麻黄碱含量的测定[J].医药导报,2007,(10):1224-1225.

[7]荔霞,刘永明.中药新药质量标准研究进展[J].安徽农业科学,2010,(08):4361-4363.

[8]陈文芳.苦杏仁鉴别方法的改进[J].药物分析杂志,2007,(02):381-382.

[9]惠白,李永亮.复方甘草片薄层鉴别方法的改进初探[J].中国药品标准,2009,(05):382-384.

[10]伍云卿.加标回收实验方案探讨[J].福建分析测试,2010,(03):67-70.