醛固酮合酶基因多态性与老年原发性高血压的关系

　　作者：彭慧 胡晓军 陈苏 李峰 晏凯利 陈娟 涂远超 作者单位：湖北省新华医院心内科，湖北 武汉 430015

　　【摘要】目的 探讨醛固酮合酶(CYP11B2)基因344C/T多态性与老年原发性高血压(EH)的相关性。方法 以人群为基础进行老年人EH病例对照研究，应用PCRRELP技术对289例武汉地区汉族老年人的CYP11B2基因344C/T多态性进行分析。结果 武汉地区汉族老年人群CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT为主要基因型，C等位基因较少见。CYP11B2基因344C/T多态性与老年人EH有相关性(P<0.05)。结论 武汉地区汉族老年人群CYP11B2基因344C/T多态性与EH存在相关性，老年高血压人群携带CC+CT基因型频率较高。

　　【关键词】 高血压;醛固酮;基因;老年人

　　原发性高血压(EH)是常见的心血管疾病。作为肾素血管紧张素醛固酮系统(RASS)的重要成分醛固酮在高血压的发生、发展中起着重要的作用。EH是一种多基因疾病，候选基因法是研究EH发病机制的重要方法之一。本研究旨在探讨武汉地区老年汉族人醛固酮合酶(CYP11B2)基因344C/T多态性的特点及其与EH的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象

　　2006年8月至2008年11月在我院体检者及部分住院患者。 EH组纳入标准：符合1999年世界卫生组织和国际高血压联盟(WHO/ISH)高血压诊断标准，汉族，年龄60～87岁。排除标准：肝肾疾患、心血管疾病(不包括EH)、继发性高血压。148例EH患者，其中男78例，女70例。对照组：经检查(临床体检、静息心电图、胸片以及血、尿常规正常)排除冠心病、脑血管病、糖尿病及肾脏疾患，收缩压<140 mmHg以及舒张压<90 mmHg，共141例，男76例，女65例，年龄60～84岁。两组中，除血总胆固醇有显著差异外，其余观察指标无显著差异。见表1。表1 两组一般资料及生化指标的比较(略)

　　1.2 方法

　　1.2.1 外周动脉血压的检测

　　被检者在安静环境下休息5～10 min，取坐位，使用汞柱式血压计测量右上肢肱动脉血压。以非同日3次测量值的均值为所得血压值。

　　1.2.2 基因组DNA的提取

　　采集空腹静脉血3 ml，加入2%乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，采用商用提取人外周血白细胞DNA试剂盒提取基因组DNA。

　　1.2.3 PCR扩增及其产物检测

　　参照Kupari等〔1〕使用的引物，上游序列5′CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC3′，下游序列5′CCT CCA CCC TGT TCA GCCC3′。PCR反应体系：10×PCR缓冲液(加Mg2+)2.5 μl,引物各1 μl,10 mmol/L dNTP 1 μl,1 U Taq酶,DNA模板1 μl，加灭菌去离子水至总体积25 μl。PCR扩增条件：94℃预变性5 min，继35个循环进行扩增(94℃变性1 min，68℃退火1 min，72℃延伸1 min)，最后72℃延伸5 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

　　1.2.4 DNA多态性分析

　　限制性酶切反应体系： PCR产物10 μl，HaeⅢ内切酶10 U，10倍缓冲液2 μl，加灭菌去离子水至20 μl。酶切条件37℃ 2～3 h，酶切产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察电泳带并照相。

　　1.3 统计学处理

　　应用SPSS13.0统计软件分析，计量资料采用x±s表示。基因型和等位基因频率用基因计数法，等位基因频率比较及检验基因型频率与HardyWeinberg平衡定律符合程度，均用χ2检验。组别间比较采用t检验或χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 两组CYP11B2基因

　　344C/T多态性频率分布特点 PCR产物长537 bp。CYP11B2基因344位点可发生胸腺嘧啶(T)与胞嘧啶(C)的互换,即T344C。344C等位基因有HaeⅢ酶切位点，而344T等位基因无该酶切位点，所以，TT型酶切片段为273 bp,CC型为202 bp，CT型酶切后产生273和202 bp片段，各基因型均含有多个小片段。见图1。结果表明，武汉地区汉族老年人CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT基因型占优势，经HardyWeinberg遗传定律检验，达到遗传平衡，具有群体代表性(χ2=0.003，P>0.05)。

　　2.2 两组CYP11B2基因

　　344C/T多态性分析 由于CC基因型在研究对象中频率较低，为了便于进行统计学分析，故在本研究中将携带C等位基因的基因型合并后进行分析(即CC+CT基因型与TT基因型进行比较)。结果显示：在病例分组的EH组中，CC+CT基因型分布频率明显高于对照组(χ2=4.52，P<0.05)。见表2。表2 两组CYP11B2基因各基因型及等位基因频率的比较(略)

　　3 讨 论

　　CYP11B2是体内生物合成醛固酮过程中最后一步生化反应的催化酶，属于线粒体细胞色素P450酶超家族〔2〕。CYP11B2基因定位于8号染色体上(8q22)，总长约7 kb，含8个内含子和9个外显子〔3〕。该基因有两种常见变异：CYP11B2基因的第2个内含子中大部分碱基可被CYP11B1基因的相应部分取代;另一种变异位于启动子区域344处，该处是类固醇转录因子(steroidogenic factor1，SF1)的结合位点，该位点可发生C与T交换。醛固酮作为体内重要的盐皮质激素，在高血压的形成和发展过程中具有重要作用。

　　本研究发现，武汉地区老年汉族人群CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT基因型占优势，C和T等位基因频率分别为0.25和0.75，与早先报道的一个没有年龄限制的样本研究结果一致〔4〕。但与国外报道结果存在明显差异〔1，5〕。种族差异可导致CYP11B2基因344C/T多态性频率分布的不同。

　　国外有关CYP11B2基因344C/T多态性与EH关系的研究结果不尽相同。

　　Hautanena等〔6〕的研究发现344C与芬兰人的EH相关，Komiya等〔7〕在对日本人的研究也发现344C与EH有关;Paillard等〔8〕在法国人群中研究结果是344T而非344C与EH相关;但Delles等〔9〕以及Schunkert等〔10〕在德国人群却未发现CYP11B2基因344C/T多态性与EH具有相关性;国内陈爱华等〔11〕也未发现344C/T多态性与EH相关。上述研究结果的差异可能与种族、区域的差异以及研究对象纳入标准的不同有关〔10〕。与过去研究的结果比较〔4〕，本研究的结果显示，在2个来自同一地区、同一人群而仅仅是年龄结构不同的样本研究，得出的结论却完全不同。如果今后相似的研究结果得以重复，那么其中的原因值得进一步探讨：众所周知，高血压的发生受遗传因素与环境因素交互作用的影响，那么，是否可以认为C等位基因作为导致高血压的危险因子是以年龄作为背景的?或者说，TT基因型对个体的保护作用(不易患高血压)随着年龄的增大，而逐渐显现?虽然在一般汉族人群中，CYP11B2基因344C/T多态性与EH没有明显的相关性，但若以年龄分层，可以发现武汉地区老年汉族人群CYP11B2基因344C/T多态性分布与EH存在明显的相关性。CYP11B2基因344C等位基因可能是老年高血压患者的高度危险因子。该结论需更多样本研究的证实。

　　【参考文献】

　　1 Kupari M，Hautanen A，Lankinen L,et al.Associations between human aldosterone synthase (CYP11B2) gene polymorphisms and left ventricular size，mass，and function〔J〕.Circulation,1998;97(6):56975.

　　2 Curnow KM，TusieLuna MT，Pascoe L,et al.The product of the CYP11B2 gene is required for aldosterone biosynthesis in the human adrenal cortex〔J〕.Mol Endocrinol，1991;5(10):151322.

　　3 Kawamoto T，Mitsuuchi Y，Toda K,et al.Role of steroid 11 betahydroxylase and steroid 18hydroxylase in the biosynthesis of glucocorticoids and mineralocoticoids in humans〔J〕.Proc Natl Acad Sci USA,1992;89(4):145862.

　　4 胡晓军,王 芳，王晋明，等.武汉地区汉族人群醛固酮合酶基因多态性与原发性高血压的关系〔J〕.临床心血管病杂志，2003;19(8):4568.

　　5 Tamaki S，Iwai N，Tsujita Y,et al.Genetic polymorphism of CYP11B2 gene and hypertension in Japanese〔J〕.Hypertension,1999;33(12):26670.

　　6 Hautanena A，Lankinen L，Kupari M,et al. Associations between aldosterone synthase gene polymorphism and the adrenocortical function in males〔J〕.J Intern Med，1998;244(1):118.

　　7 Komiya I，Yamada T，Takara M,et al.Lys(173)Arg and 344T/C variants of CYP11B2 in Japanese patients with lowrenin hypertension〔J〕. Hypertension，2000;35(3):699703.

　　8 Paillard F，Chansel D，Brand E,et al.Genotypephenotype relationships for the reninangiotensinaldosterone system in a normal population〔J〕. Hypertension,1999;34(3):4239.

　　9 Delles C，Erdmann J，Jacobi J,et al.Aldosterone synthase (CYP11B2) 344C/T polymorphism is associated with left ventricular structure in human arterial hypertension〔J〕.J Am Coll Cardiol,2001;37(3):87884.

　　10 Schunkert H，Hengstenberg C，Holmer SR,et al.Lack of association between a polymorphism of the aldosterone synthase gene and left ventricular structure〔J〕.Circulation,1999;99(17):225560.

　　11 陈爱华，张文秀，唐晓明，等.醛固酮合成酶基因多态性与高血压及左室肥厚的关系〔J〕.中华内科杂志，2002，41(5)：298301.