脂肪酸结合蛋白、载脂蛋白E基因多态性与2型糖尿病并发冠心病的关系

　　作者：石玉荣，周海艳，章 尧 作者单位：蚌埠医学院：1. 生化与分子生物学教研室;2. 临床检验诊断学实验中心;3. 第一附属医院老干科，安徽蚌埠 233000

　　【摘要】 目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者脂肪酸结合蛋白(FABP2)及载脂蛋白E(ApoE)与冠心病(CHD)的关系。方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRPFLP)技术分别检测T2DM并发CHD组及T2DM非CHD组FABP2、ApoE基因型，并检测T2DM并发CHD组不同等位基因携带者血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HLDC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)。结果 T2DM并发CHD组FABP2 A/T突变频率高于非冠心病组(P<0.05)，T等位基因携带者与A等位基因携带者相比TG、TC、LDLC浓度升高，血HDLC浓度降低，有显著性差异(P<0.05);T2DM并CHD组ε4等位基因频率明显高于对照组(P<0.01)，ε4等位基因携带者与ε3等位基因携带者相比TC、LDLC浓度升高，HDLC浓度降低，差异有统计学意义(P<0.05)，FABP与ApoE基因连锁分析，FABP2T基因和ApoEε4基因连锁时，T2DM并发CHD的几率增加(P<0.05)。结论 FABP2 T基因及ApoE/ε4等位基因增高T2DM并发CHD的遗传易感性。

　　【关键词】 糖尿病;冠心病;脂肪酸结合蛋白;基因多态性;载脂蛋白E

　　and apolipoprotein E with coronary heart disease

　　in type2 diabetic patientsSHI Yurong1,2, ZHOU Haiyan3, ZHANG Yao1

　　(1. Department of Biochemistry and Molecular Biology; 2. Research Center of

　　Clinical Laboratory Science; 3. Department of Agedness of the First Affiliated Hospital,

　　Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China)ABSTRACT: Objective To study the relationship of fatty acid binding protein2 (FABP2) and apolipoprotein E (ApoE) with coronary heart disease (CHD) in type2 diabetes mellitus (T2DM) patients. Methods FABP2 and ApoE gene polymorphisms were detected by PCRRFLP. At the same time all CHD in T2DM patients serum triglyceride (TG), total cholesterol (TC), highdensity lipoprotein cholesterol were (HDLC), lowdensity lipoprotein cholesterol (LDLC) were detected. Results The Tallele frequencies of FABP2 were higher (P<0.05), the levels of serum TC, TG and LDLC of Tallele carriers were higher while HDLC was lower than that of Aallele carriers (P<0.05). The ε3allele frequencies of ApoE were higher (P<0. 01), the levels of serum TC and LDLC of Tallele carriers were higher, but HDLC was lower than that of ε3allele carriers (P<0.05). Combined analysis of FABP2 and APOE genotype showed that the FABP2T+/APOEε4+genotype was a risk factor of CHD in T2DM patients (P<0.05). Conclusion FABP2T and ApoEε4 alleles increse the susceptibility to CHD in T2DM.

　　KEY WORDS: diabetes mellitus; coronary heart disease; fatty acid binding protein2; gene polymorphism; apolipoproteinE

　　糖尿病尤其是2 型糖尿病(T2DM)患者常伴发冠心病(coronary heart disease, CHD)，并成为糖尿病患者的主要死亡原因之一,目前认为与脂质代谢密切相关。在遗传因素中，脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding protein2, FABP2)及载脂蛋白E(ApoE)基因引起了医学界的极大关注。FABP2编码的小肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)，参与细胞内长链脂肪酸的吸收、转运及新陈代谢。FABP2基因编码区exon2 54位密码子的变异对于蛋白质的一级结构具有明确的影响，由此引起功能上的改变，从而可能导致脂质代谢异常、血管内皮的损伤[1]，为冠心病的危险因子[2]。载脂蛋白E有四种等位基因编码，但不同等位基因对脂质代谢的能力不同，与心脑血管疾病有关[2]。本研究探讨了脂肪酸结合蛋白(FABP2)及载脂蛋白E(ApoE)不同等位基因与T2DM并发CHD的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 2005年3月至2007年3月，蚌埠医学院附属医院内分泌科T2DM患者(1999年WHO糖尿病诊断标准)分T2DM并发冠心病组(T2DMCHD)98例，主要动脉(左主干，左前降支，左回旋支，右冠状动脉)中至少有一支内径狭窄>50%;T2DM非冠心病组(T2DMnCHD)110例，上述主要动脉中无一支内径明显狭窄或狭窄程度<50%。

　　1.2 方法

　　1.2.1 PCRPFLP检测患者FABP2、ApoE基因型 取空腹静脉血3mL，EDTA抗凝，采用酚氯仿法提取DNA ，PCR扩增。FABP 引物1：5′ACAGGTGTTAATATAGTGAAAAG3′，引物2：5′TACCCTGAGTTCAGTTCCGTC3′。内切酶HhaⅠ酶切;ApoE：引物1：5′TCCAAGGGCTGCAGGCGGCGCA3′，引物2：5′GCCCCGGCCTGGTACACTGCCA3′。内切酶AflⅢ、HaeⅡ酶切。琼脂糖电泳。

　　1.2.2 血脂测定 所有检测对象禁食12h后次晨抽静脉血。新鲜血标本分离血清后经不同的处理，分别上机测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)(酶法)。

　　1.3 统计学分析 计量资料以±s表示，两组间比较用t检验，计数资料组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 FABP2和ApoE基因的PCRRFLP检测结果 FABP2扩增产物长度为180bp，用HhaⅡ酶切，FABP2Ala54存在HhaⅡ切点，PCR产物酶解后呈99bp及81bp两个片段，而FABP2Thr54上HhaⅡ切点消失，仅180bp一个片段, 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定基因型(图1)。

　　ApoE基因：ApoE扩增产物为218bp。ApoE基因型区别仅存在112及154位氨基酸残基的不同，ε2经限制性酶AflⅢ酶切后大片段核苷酸长度168bp，ε3经限制性酶AflⅢ和HaeⅡ双酶切，其酶切后大片段核苷酸长度为145bp，ε4经限制性酶HaeⅡ酶切后大片段核苷酸长度195bp。用40g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型(图2)。

　　2.2 T2DMCHD组和T2DMnCHD组FABP2 54位点基因型与等位基因的比较 FABP2野生型A/A和变异型A/T、T/T的基因型频率在T2DMCHD组分别为32.7%、50.1%和14.3%，T2DMnCHD组分别为55.4%、48.2%和5.4%，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。两组等位基因比较亦具有显著性差异(P<0.05，表1)。

　　2.3 T2DMCHD和T2DMnCHD组ApoE基因型与等位基因的比较 两组均以E3/3、E4/3基因型为主，T2DMCHD组E3/3、E4/3频率分别为44.9%和36.7%，明显低于T2DMnCHD组E3/3(64.5%)而高于T2DMnCHD组E4/3;24.5%(P<0.01);两组病例等位基因比较T2DMCHD组ε4等位基因频率为26.5%，显著高于T2DMnCHD(16.4%) (P=0.01)，而ε3等位基因频率病例组低于对照组，有统计学意义(P=0.004，表2)。

　　2.4 FABP2 T和ApoEε4基因的联合分析 以上结果表明FABP2 T和ApoEε4等位基因与T2DM并发CHD有关，联合分析FABP2 T和ApoEε4基因发现FABP2T+/ApoEε4+和FABP2T/ApoEε4联合基因型在两组之间有显著性差异(χ2=10.6，P=0.001;χ2=9.94，P=0.002)，而其他基因联合在两组间比较无统计学意义(表3)。表1 T2DMCHD与T2DMnCHD组FABP2基因型与突变基因的比较表2 T2DMCHD与T2DMnCHD组ApoE基因型与突变基因的比较表3 FABP2 T和ApoE基因与T2DM并发CHD的联合分析

　　2.5 T2DMCHD患者FABP2 54位点多态性与血脂水平的关系 T2DMCHD组中T等位基因携带者的空腹TG和TC水平与A等位基因携带者相比都有增加的趋势，差异有统计学意义(P<0.05)，T等位基因携带者HDLC浓度低于A等位基因携带者，而LDLC浓度高于A等位基因携带者，两者之间有显著性差异(P<0.05)。其他血脂数据之间均无显著性差异(表4)。表4 T2DMCHD患者FABP2各等位基因与血脂水平的比较

　　2.6 T2DMCHD患者ApoE等位基因与血脂水平的关系 T2DMCHD组中ε2等位基因携带者的空腹TC和LDLC与其他等位基因携带者相比都有增加的趋势，其差异有统计学意义(P<0.05);而HDLC低于其他等位基因型，且有显著性差异(P<0.05)。其他血脂数据之间均无显著性差异(表5)。 表5 T2DMCHD患者不同ApoE等位基因型组间血脂水平的比较

　　3 讨 论

　　FABP2基因位于4q2 8231，大约3.4kb，包括4个外显子和3个内含子。迄今为止，共发现5个FABP2基因多态性位点，其中研究最为广泛的是外显子2的密码子54位的多态性。其发生腺嘌呤置换鸟嘌呤的错义突变，导致苏氨酸置换成丙氨酸，改变了FABP2的结构与功能。体外研究发现，野生型(A/A)比突变型(A/T、T/T)结合脂肪酸的能力高2倍[4]，突变型比野生型具有更高的甘油三酯和胆固醇水平[5]。本研究中T2DMCHD组T等位基因携带者的血浆TG和TC浓度和A等位基因携带者相比都有增加的趋势，T等位基因携带者HDLC浓度低于A等位基因携带者，而LDLC浓度高于A等位基因携带者，两者之间有显著性差异(P<0.05)。T等位基因携带者TG水平升高、HDLC水平降低，这可部分地解释FABP2 T等位基因与T2DM并发冠心病的相对危险性，表明FABP2基因54位突变与T2DM并发CHD有一定的关联性。

　　ApoE是一种富含甘油三酯的脂蛋白，通过其与LDL受体结合，在脂质代谢中起重要作用。有报道ε4等位基因与冠心病的发病相关[6]。本实验研究ε4等位基因与T2DM并发CHD的相关性，结果表明ε4等位基因能增加T2DM患者并发CHD的危险性，这可能与ε4等位基因携带者TC、LDLC水平增加有关。

　　在FABP2和ApoE基因联合分析对T2DM并发CHD的关联性的研究中，发现FABP2 T+基因和ApoEε4+基因连锁时，T2DM患者并发CHD的几率增加，而FABP2 T-基因和ApoEε4-基因连锁时降低T2DM患者并发CHD的几率，故建议可将FABP2 T+基因和ApoEε4+作为T2DM患者并发CHD的生物标记，用于预测T2DM并发冠心病的几率。

　　【参考文献】

　　[1]ALBALA C, SANTOS JL, CIFUENTES M, et al. Intestinal FABP2 A54T polymorphism: association with insulin resistance and obesity in women [J]. Obes Res, 2004, 12(2):340345.

　　[2]DE LUIS DA, SAGRADO MG, ALLER R, et al. Influence of ALA54THR polymorphism of fatty acidbinding protein 2 on obesity and cardiovascular risk factors [J]. Horm Metab Res, 2007, 39(11):830834.

　　[3]钱书虹，钱庆文，王诗瑨. 2型糖尿病合并冠心病患者血清芳香脂酶、黄嘌呤氧化酶及脂蛋白检测 [J]. 郑州大学学报(医学版), 2007, 42(1):5355.

　　[4]LARA CC, HUNTER GR, LOVEJOY JC, et al. Association of the intestinal fatty acidbinding protein Ala54Thr polymorphism and abdominal adipose tissue in AfricanAmerican and Caucasian women [J]. Clin Endocrinol Metab, 2005, 90(2):11961201.

　　[5]NAKANISHI S, YAMANE K, KAMEI N, et al. The effect of polymorphism in the intestinal fatty acidbinding protein 2 gene on fat metabolism I associated with gender and obesity amongst nondiabetic JapaneseAmericans [J]. Diabetes Obes Metab, 2004, 6(1):4549.

　　[6]汪春红，周新，周党娣，等. 载脂蛋白E/CI基因簇与冠心病关系的研究 [J]. 中华流行病学杂志, 2004, 25(11):982985.