原发性高血压患者外周血白介素-6基因表达及意义

　　作者：张玲玲, 刘兴德 作者单位：贵阳医学院附院 心血管内科， 贵州 贵阳 550004

　　【摘要】 目的： 观察原发性高血压患者外周血白介素-6(IL-6)基因表达，初步探讨其与原发性高血压的关系及其意义。方法: 用放射免疫法测定62例原发性高血压患者和30例正常对照者外周血IL-6蛋白含量，用逆转录聚合酶链反应法检测外周血单个核细胞中IL-6 mRNA表达。结果： 与对照组比较，原发性高血压组患者外周血IL-6蛋白水平及外周血单个核细胞中IL-6 mRNA表达均显著增高(P<0.01)。结论： IL-6可能参与了原发性高血压的病理生理过程，外周血单个核细胞的IL-6 mRNA表达上调可能是原发性高血压患者外周血IL-6蛋白水平升高的机制之一。

　　【关键词】 白细胞介素6; 基因表达; 高血压; 血液

　　The Expression of Interleukin-6 Gene in Peripheral Blood of Patients with Essential Hypertension and Its Significance

　　ZHANG Lingling, LIU Xingde

　　Department of cardiology, The Affiliated Hospital of Guiyang Medical College, Guiyang 550004, Guizhou, China

　　[Abstract] Objective: To observe the expression changs of interleukin-6 (IL-6) in peripherial blood of patients with essential hypertension (EH), and to probe the relationgship between IL-6 mRNA level and EH. Methods: The concentrations of circulating IL-6 of 62 EH patients (group EH) and 30 normal people (group CN) were measured by using radioimmunoassay, and the expression of mRNA of IL-6 in mononuclear cells was measured with reverse transcription polymerase chain reaction. Results: The concentration of protein IL-6 in peripherial blood and IL-6 mRNA in mononuclear cell of group EH were significantly higher than those of group CN (P<0.01). Conclusions: IL-6 might participate the patho-physiology process of EH.; Up-regulating expression of IL-6 mRNA may be one of the mechanisms increasing protein IL-6 in peripherial blood of EH patient.

　　[Key words] interleukin-6;gene expression; hypertension;blood

　　原发性高血压(essential hypertension,EH)是以体循环动脉压升高为主要表现的临床综合征，严重危害人类健康，但其发病机制及某些病理过程仍未完全阐明。近年来研究提示，炎症介质在EH发生发展的不同阶段发挥了重要作用，但目前针对炎症介质基因表达方面的检测与分析尚少见。2007年2月~12月检测62例EH患者外周血白介素-6(interleukin-6,IL-6)蛋白水平及单个核细胞IL-6 mRNA的表达，探讨外周血IL-6的变化与EH的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象及分组

　　按《中国高血压防治指南(2005年修订版)》制定的标准，选取心血管科住院和门诊新诊断或未经正规降压治疗的EH患者62例，同时选取正常的健康体检者30例作为对照组。排除继发性高血压、经冠状动脉造影确诊合并冠心病者、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血症、感染、严重肝肾疾病、自身免疫性疾病及肿瘤性疾病、近期有手术或外伤史等影响IL-6水平的患者。

　　1.2 方法

　　1.2.1 主要试剂和仪器

　　人淋巴细胞分离液(上海捷瑞)，Trizol试剂(美国Invitrogen)，焦炭酸二乙酯(瑞兴)，逆转录试剂盒(Promega)，PCR试剂盒(Promega)，100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker(天根生化)，人IL-6放射免疫分析药盒(天津九鼎);ULT-1386-3三洋-80 ℃低温冰箱(日本)，5745台式冷冻离心机(德国)，Eppendorff centrifuge 5810R 高速离心机，Amersham核酸蛋白分析仪，PCR仪(PE geneAmp PCR System 2400)(Perkin Elmer)，DNA成像分析仪(Gel Doc EQ)(Bio-Rad)，酶标仪(ELx800)(Bio-Tek公司)。引物设计由上海生物工程公司合成：IL-6上游引物5' -GAGGAGACTTGCCTGGTGAA -3'，下游引物5' -ATCTGAGGTGCCCATGCTAC -3';β-action上游引物5'-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT -3'，下游引物5'-GGGCACGAAGGCTCATCATT -3'。

　　1.2.2 标本采集

　　受检者空腹12 h，次日清晨采集肘正中静脉血8 ml，其中4 ml置普通生化管中，室温静置2 h，自然凝固后，1 000 r/min，离心10 min，收集上清液置于-80 ℃冰箱保存待测;另4 ml置于EDTA抗凝试管中摇匀后即刻置4 ℃冰箱冷存，6 h内提取RNA。

　　1.2.3 外周血IL-6蛋白含量测定

　　用保存待测的血清，严格依照IL-6放射免疫分析药盒说明书的步骤操作。

　　1.2.4 人血单个核细胞中RNA提取和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)

　　淋巴细胞分离液提取外周血中单个核细胞后，按照说明书的步骤提取总RNA，再按逆转录试剂盒说明书步骤合成cDNA，并用PCR技术扩增目的片段。PCR产物用1.5% 琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭显色。测定各条带灰度值，以β-actin为内参，用IL-6与β-actin的灰度比值定量IL-6。

　　1.3 统计学处理采用SPSS11.5统计软件进行数据分析处理，数据以(x±s)表示，组间比较采用t检验。以P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。贵阳医学院学报 33卷 6期张玲玲等 原发性高血压患者外周血白介素-6基因表达及意义2 结果　　EH组和正常对照组间的年龄、性别、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、空腹血糖和外周血白细胞比较，无统计学差异(见表1)。 EH患者外周血IL-6水平及单个核细胞IL-6 mRNA表达的变化见表2，与对照组比较，EH组外周血IL-6蛋白水平及单个核细胞IL-6 mRNA表达均显著增高(P<0.01)。表1 EH组及对照组的基本资料(略)表2 EH患者及对照组外周血IL-6水平(略)注：与对照组比较,(1)P<0.01。

　　3 讨论

　　原发性高血压的发病机制及某些病理过程至今尚未完全阐明，有学者研究发现高血压与炎症有关，提示炎症可能在高血压的发病机制中起重要作用[1]。IL-6是一种参与免疫和炎症反应的多功能促炎细胞因子，体内单核细胞或巨噬细胞、内皮细胞等均可分泌IL-6。IL-6作为重要的炎性细胞因子之一，在心血管系统中的作用越来越受到重视。本研究显示，原发性高血压组患者外周血IL-6蛋白水平明显高于对照组，提示IL-6可能参与了原发性高血压的病理生理过程。因此，积极探索控制炎症的方法可能是原发性高血压病治疗的前景策略之一。

　　原发性高血压患者外周血IL-6升高的机制尚不十分明了。近年来虽已有研究发现原发性高血压患者外周血AngⅡ、IL-6、内皮素-1等细胞因子水平增高，并认为细胞因子可能与原发性高血压的发生发展相关[2~6]，但针对原发性高血压患者在外周血单个核细胞中的IL-6 mRNA表达水平方面的检测与分析少见报道。本研究显示，与对照组比较，原发性高血压组外周血单个核细胞中IL-6 mRNA表达显著增高，提示外周血单个核细胞的IL-6 mRNA表达上调可能是导致原发性高血压患者外周血IL-6蛋白含量升高的一个因素。IL-6可能通过以下机制影响原发性高血压的发生发展：(1)升高血管平滑肌细胞内Ca2+浓度，引起血管收缩;(2)使白细胞流变学特性发生改变，易黏附于血管内皮细胞，增加血管阻力;(3)从多种途径促进血管平滑肌细胞增生、增殖，导致血管重构;(4)损伤血管内皮;(5)IL-6还可能与多种高血压危险因素协同促进高血压的发生和发展[7]。

　　【参考文献】

　　[1]Sesso HD,Buring JE,Rifai N, et al.C-reactive protein and the risk of developing hypertension[J]. JAMA,2003(290):2945-2951.

　　[2]Chae CU,Lee RT,Rifai N,et al. Blood pressure and inflammation in apparently healthy men[J]. Hypertension,2001(38):399-403.

　　[3]Parissisj T,Korovesis S,Giazitzogloue E,et al .Plasma profiles of peripheral monocyte related inflammatory markers in patients with arterial hypertension : correlations withplasma endothelin-1[J].Int J Cardiol , 2002(1) :13221.

　　[4]Luft FC. Angiotensin, inflammation, hypertension, and cardiovascular disease[J]. Curr Hypertens Rep,2001(3):61-67.

　　[5]Oshchepkova EV,Dmitriev VA,Titiov VN,et al.The activity of nonspecific inflammation in hypertensive patients[J].Ter Arkh,2007(2):157-158.

　　[6]王艳军,何冰,李晓东.TNF-α、IL-6、NO在高血压胰岛素抵抗患者血浆中的变化及意义[J]. 中国医科大学学报,2006(5):525-526,529.

　　[7]Hirano T.Interleukin 6 and its receptor. ten years later[J]. Int Rev Immunol, 1998(324):249-284.