高胆固醇血清对血管内皮细胞VEGF表达及辛伐他汀的抑制作用
发表时间：2009-12-21 浏览次数：581次
高胆固醇血清对血管内皮细胞VEGF表达及辛伐他汀的抑制作用作者：李卫权，边 昶 作者单位：1.平湖市第一人民医院，浙江嘉兴； 2.浙江大学医学院附属第二医院，浙江杭州 【摘要】 目的 研究高胆固醇血清对血管内皮细胞VEGF表达的影响以及辛伐他汀的抑制作用。方法 分别培养的血管内皮细胞予不同浓度的高胆固醇血清或合用100nmol/L的辛伐他汀共同培养，分别测定其培养上清液中VEGF水平。结果 当胆固醇浓度大于0.08mmol/L时，血管内皮细胞VEGF表达显著增加；且随胆固醇浓度的增加，VEGF的表达亦显著增强。但可被100nmol/L的辛伐他汀所抑制，不同高胆固醇血清合用辛伐他汀组其血管内皮细胞VEGF表达与正常对照组无差异。结论 高胆固醇血清可致血管内皮细胞VEGF表达增高，而高胆固醇的上述作用可被辛伐他汀显著抑制。 【关键词】 高胆固醇血症；血管内皮细胞生长因子；辛伐他汀；家兔 The Effect of Hypercholesterolemic serum on the Expression of VEGF in Endothelial Cells and the Suppressive Role of Simvastatin. LI Wei_quan, BIAN Chang. The First People's Hospital of Pinghu, Zhejiang 310009, China ［Abstract］ Objective To observe the effect of hypercholesterolemia on the expression of VEGF in endothelial cells and the role of simvastatin.Methods Cultured endothelial cells were treated with different concentration of hypercholesterolemic rabbit serum or combined with 100nmol/L simvastatin. Culture supernatant was collected for VEGF detection by ELISA. Results VEGF expression in endothelial cells treated with hypercholesterolemic serum (cholesterol concentration＞0.08 mmol/L) was significantly higher than that treated with control. 100nmol/L Simvastatin could significantly suppress the enhanced VEGF expression induced by hypercholesterolemic rabbit serum. Conclusions Hypercholesterolemic serum could significantly enhance VEGF expression in endothelial cells, which could be suppressed remarkably by simvastatin. ［Key words］ Hypercholesterolemic serum; VEGF; Simvastatin; Rabbit 高胆固醇血症是导致动脉粥样硬化的危险因素之一［1］。动物实验证明，饮食诱导的高胆固醇血症可形成早期动脉粥样硬化，而血管内皮细胞生长因子(VEGF)所介导的血管生成在动脉粥样硬化的斑块形成过程中是必须条件［2］。近来研究表明，他汀类药物具有降脂以外的抗动脉粥样硬化的作用［3］。本文通过建立高胆固醇血症的家兔模型，观察高胆固醇血清对血管内皮细胞VEGF表达的影响，并探讨他汀类药物辛伐他汀对其作用。1 材料与方法 1.1 材料：新西兰雄性家兔购自浙江中医药大学动物中心，共10只，每只体重约2. 5KG；高胆固醇饲料由浙江省医学科学院提供；RPMI1640培养基购自吉诺生物科技公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司；辛伐他汀购自美国SIGMA公司；VEGF ELISA试剂盒购自上海晶美公司。 1.2 方法： （1）高胆固醇血清制备：10只家兔随机分为两组，分别用含1％胆固醇的高脂饲料和普通饲料喂养四周，外周静脉采血，离心获得家兔血清，分别将各组家兔血清混匀，用于细胞培养。家兔血清中胆固醇浓度由医院检验科进行测定，每个样本重复测量3次，取平均值。 （2）人脐静脉血管内皮细胞培养：在37℃,含5% CO2的孵箱中，用含10%FBS的RPMI1640培养基进行内皮细胞传代培养。每3天，细胞基本长满培养瓶后进行1∶4传代培养。 （3）细胞学实验：对培养的血管内皮细胞进行干预。当细胞生长至70％后，分别添加无血清培养基对照组，加入不同浓度高胆固醇血清组（胆固醇浓度分别为0.04，0.08,0.16，0.32mmol/L）及不同浓度高胆固醇血清合用辛伐他汀组（100nmol/L）。分别干预12h,收取培养上清液，用于VEGF测定。 （4）VEGF测定：VEGF ELISA测定按试剂盒说明进行检测。分别在板上加入100μL不同浓度的标准品及检测样本，37℃孵育2h。PBS洗板4次。加入100μL生物素化抗体工作液，37℃孵育1h。PBS洗板4次。再加入100μL酶结合工作液，37℃孵育30min。PBS洗板4次。加入显色剂100μL，避光37℃静置10min。加入100μL终止液。450nm测定吸光度。绘制标准曲线，得到样本中VEGF含量。各样本重复测定3次。 1.3 统计学分析：以SPSS11.0为统计学分析软件。各实验结果以均数±标准差表示，实验结果以One_Way ANOVA进行统计学分析。普通家兔和高胆固醇饲料喂养家兔其血清中胆固醇含量以Student's t_test分析。P＜0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 家兔血清胆固醇水平：用1％胆固醇饲料喂养家兔四周后，其血清胆固醇水平较普通饲料家兔明显增高（33.9±9.4 vs 1.3±0.6mmol／L，P＜0.05）。 2.2 高胆固醇血清对血管内皮细胞VEGF的表达：当胆固醇浓度大于0.08mmol/L时，培养上清液中VEGF较对照组明显增加。随胆固醇水平的进一步增高，VEGF的表达进行性升高，具有统计学显著意义，见表1。表1 各组VEGF水平比较注：与无血清对照比较P＜0.05；与前一实验组比较△P＜0.05 2.3 辛伐他汀的抑制作用：不同浓度高胆固醇血清所致的VEGF表达增加，经辛伐他汀作用后，其作用被显著抑制，各组间无明显统计学差异(P＞0.05)，见表2。表2 辛伐他汀作用后各组间VEFG水平比较3 讨论 高胆固醇血症与血管内皮细胞的功能密切相关，可通过影响NO的表达，氧化应激损伤，增加血管的通透性导致血管炎症，从而最终导致动脉粥样硬化的发生［４］。有研究认为，VEGF在高胆固醇血症所致的动脉粥样硬化中具有重要的地位，在人体内，VEGF通过对血管内皮细胞的趋化作用、促生长作用，从而成为最主要的生理性或是病理性的血管生成因子［5］；VEGF的这些作用使其在缺血性疾病的治疗中具有广泛的应用前景［6］，就血管炎症或是动脉粥样硬化而言，这些作用已使VEGF成为一个重要的干预靶点［7］。本文结果表明，高胆固醇血清可有效的增加血管内皮细胞VEGF的表达，提示高胆固醇血清可能通过VEGF发挥其致动脉粥样硬化的作用。 本文还发现辛伐他汀可显著抑制由高胆固醇血清所致的VEGF表达增加。他汀类药物一般当作降胆固醇类药物进行使用。近来的研究，他汀类药物还具有十分显著的降脂外的非特异性抗炎、抗动脉粥样硬化的作用［3］，本文结果也证实了这一点，辛伐他汀对VEGF表达的抑制作用，提示了他汀类药物可能通过抑制炎症因子的表达从而发挥其临床作用。 总之，本文结果表明，高胆固醇血清可使血管内皮细胞VEGF的表达显著增高，而这种作用可被辛伐他汀所抑制。【参考文献】 ［1］Rodriguez JA, Nespereira B, Perez_Ilzarbe M, et al. Vitamins C and E prevent endothelial VEGF and VEGFR_2 overexpression induced by porcine hypercholesterolemic LDL［J］. Cardiovasc Res, 2005,65:665-673． ［2］Celletti FL, Hilfiker PR, Ghafouri P, et al. Effect of human recombinant vascular endothelial growth factor165 on progression of atherosclerotic plaque［J］. J Am Coll Cardiol， 2001,37:2126-2130. ［3］Puccetti L, Acampa M, Auteri A. Pharmacogenetics of statins therapy［J］. Recent Patents Cardiovasc Drug Discov， 2007，2:228-236. ［4］Stokes KY, Cooper D, Tailor A, et al．Hypercholesterolemia promotes inflammation and microvascular dysfunction: role of nitric oxide and superoxide［J］. Free Radic Biol Med， 2002，33：1026-1036. ［5］Vernon RB, Sage EH. A novel, quantitative model for study of endothelial cell migration and sprout formation within three_dimensional collagen matrices［J］. Microvasc Res， 1999，57:118-33． ［6］Dudley AC, Thomas D, Best J, et al. A VEGF/JAK2/STATS axis may partially mediate endothelial cell tolerance to hypoxia［J］. Biochem J， 2005，390:427-436. ［7］Celletti FL, Waugh JM, Amabile PG, et al. Vascular endothelial growth factor enhances atherosclerotic plaque progression［J］. Nat Med， 2001，7:425-429.
