乙肝相关性肝衰竭患者外周血中IL-32表达水平及意义

　　肝衰竭是在慢性肝炎、肝硬化基础上发生的肝细胞大块或亚大块状坏死，常伴有出血、肝性脑病、肝肾综合征、感染、电解质紊乱等并发症，死亡率很高，预后很差。在我国慢性肝炎、肝硬化的原因多为乙肝病毒感染引起，研究认为乙型病毒性肝炎、肝衰竭的发病都与机体免疫应答异常、细胞因子网络活化密切相关。IL-32是一种新发现的促炎症细胞因子，可以通过活化NF-K}3,AP-1,MAPK信号通路诱导TNF-a,IL-6,IL-8等细胞因子表达，与丙型肝炎,,等炎症性疾病的发病密切相关。目前IL-32在乙肝相关性肝衰竭病程中的作用尚无相关报道。　　本研究检测了乙肝相关性肝衰竭患者血清中IL-32的表达水平，并分析了IL-32表达水平与外周血中ALT,AST,TBiI水平及HBVDNA定量之间的相关。　　1材料与方法　　1.1研究对象55例乙肝相关性肝衰竭(重肝组)，无其他急慢性疾病，均为深圳市龙岗中心医院感染科2011年10月至2012年7月住院患者。其中男性40例，女性15例;年龄23一58(40.3士3.6)岁。乙肝相关性肝衰竭诊断标准参照亚太肝病学术会议标准。患者均为乙型病毒性肝炎且未行抗病毒治疗。正常对照组为20例在我院体检中心体检的健康人(对照组)，男性14例，女性6例，年龄20-60(40.216.8)岁。两组人员在性别、年龄上比较，差异无统计学意义(P>0.05)01.2标本收集患者和健康人均于晨起采空腹肘静脉血9m1,3ml放人非抗凝干燥无菌真空管中，室温静止60min自行凝固，然后以1200r/min离心10min，取上清液分装于EP管内，置一80℃冰箱低温冷冻保存。6ml放人含肝素的无菌抗凝管，Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。　　1.3RNA提取及Real-timePCR用Trizol试剂盒提取(Invitrogen)细胞总RNA，按说明书操作。然后用反转录试剂盒(Toyobo,Japan)将提取的细胞总RNA反转录为cDNA。接下来用Real-timePCRFaststartUniversalSYBRGreenMaster(Rox)试剂盒(Roche)扩增，按说明书操作。用来扩增IL-32的引物CGACTTCAAAGAGGGCTACC-3',reverse:5‘一GAGTGAGCTCTGGGTGCTG-3‘。　　1.4ELISA用美国BioLegend公司(SanDiego,CA)ELISA试剂盒检测血清中IL-32蛋白表达水平，按说明书操作。　　1.5统计学方法用SPSS16.0软件分析数据。相关性分析采用Pearson相关性分析。两组间均数比较采用t检验。P<0.05认为是有统计学差异。　　2结果　　2.1乙肝相关性肝衰竭患者外周血中IL-32mRNA的表达收集重肝组及对照组外周血，分离提取外周血淋巴细胞，提取细胞总RNA，反转录为cDNA,real-timePCR检测IL-32mRNA表达水平。结果显示重肝组IL-32mRNA表达高于正常对照组，其差异有统计学意义(P<0.05)(图1)。　　2.2乙肝相关性肝衰竭患者外周血中IL-32蛋白的表达收集重肝组及对照组外周血，离心获得血清，ELSIA检测IL-32蛋白表达水平。如图2所示，重肝组IL-32蛋白表达水平高于对照组，其差异有统计学意义(P<0.05)。　　2.3乙肝相关性肝衰竭患者血清中IL-32表达水平与外周血中ALT,AST,TBiI,HBVDNA定量的相关性分析重肝组患者血清中IL-32水平与ALT(r=0.49，P=0.038)、AST(r=0.56，P=0.010)、TBiI(r=0.50,P=0.013)呈正相关，与HBVDNA(r-0.18,P=0.270)无显著性相关性。　　3讨论　　本研究发现乙肝相关性肝衰竭患者外周血中IL-32表达水平增高，且IL-32表达水平与ALT,AST,TBIL水平呈正相关。HBV感染的发病机制尚未完全明确，目前的研究认为宿主的免疫功能在对HBV感染的免疫中发挥重要的作用，而细胞因子在免疫应答的调节中起关键作用。比如:慢性重型乙型肝炎患者外周血中IL-23表达增高，与炎症程度相关，参与慢性重型乙型肝炎的发病。因此，我们认为IL-32可能参与乙肝相关性肝衰竭的发病。　　IL-32是一种新发现的促炎症细胞因子，可以通过活化NF-K(3,AP-1,MAPK信号通路诱导单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞表达TNF-a,IL-氏IL-8}IL-I(3等细胞因子，而IL-1陈TNF-a,IFN-:等均可诱导肝细胞〔x〕等表达IL-32，如此相互影响导致肝内细胞因子网络活化，最终导致肝损伤。　　最新的研究证实HBV及HBV编码的蛋白HBx均可诱导肝细胞表达IL-32}9}，慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织及外周血中IL-32表达增高，且IL-32表达水平与肝组织炎症、纤维化程度呈正相关，认为IL-32与慢性乙型病毒性肝炎的发病密切相关。　　本研究发现乙肝相关性肝衰竭患者外周血中IL-32表达水平增高，且IL-32表达水平与ALT,AST,TBIL呈正相关，进一步证实了IL-32在HBV感染发病中可能起重要的作用，为HBV感染性疾病的治疗提供了可能的靶点。　　综上所述，本研究发现乙肝相关性肝衰竭患者外周血中IL-32表达水平增高，且与ALT,AS叭TBiI水平呈正相关，因此我们认为IL-32可能与乙肝相关性肝衰竭的发病密切相关。　　4参考文献　　Maini MK,Boni C,Lee CK. The role of virus-specific CD8 (+) cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection[J].{H}Journal of Experimental Medicine,2000.1269-1280.　　Dinarello CA,Kim SH. IL-32,a novel cytokine with a possible role in disease[J].{H}ANNALS OF THE RHEUMATIC DISEASES,2006,(Suppl 3):i61-i64.　　Kim SH,Han SY,Azam T. Interleukin-32:a cytokine and inducer of TNFalpha[J].{H}IMMUNITY,2005.131-142.　　Moschen AR,Fritz T,Clouston AD. Interleukin-32:a new proinflammatory cytokine involved in hepatitis C virus-related liver inflammation and fibrosis[J].{H}HEPATOLOGY,2011.1819-1829.　　Sarin SK,Kumar A,Almeida JA. Acute-on-chronic liver failure:consensus recommendations of the Asian Pacific Association for the study of the liver (APASL)[J].Hepatol Int,2009.269-282.　　Kobayashi H,Lin PC. Molecular characterization of IL-32 in human endothelial cells[J].{H}CYTOKINE,2009.351-358.　　许海霞,李学俊,潘兴飞. 慢性重型乙型肝炎患者血清IL-23水平检测及其意义[J].{H}中华实验和临床病毒学杂志,2012,(2):123-124.doi:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2012.02.015.