非霍奇金淋巴瘤患者血清TAM 和β2微球蛋白检测及意义

恶性淋巴瘤是起源于淋巴网状系统的恶性肿瘤，多发生于淋巴结和(或)结外部位淋巴组织，是中国常见的十大恶性肿瘤之一。近年来发病率呈上升趋势。恶性淋巴瘤按病理和临床特点可分为两大类：霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其中NHL 约占90%。在最近的30 年里，NHL 在世界范围内的发病率几乎增长了1倍[1]。目前，肿瘤标志物已广泛应用于恶性肿瘤的辅助诊断、疗效观察、病情监测和预后判断[2]。肿瘤相关物质(TAM)为近年来发现的一种新型广谱恶性肿瘤标志。β2微球蛋白(β2MG)是临床上应用较多的NHL 肿瘤标志物，与NHL 的分期、组织学分型及预后等有直接关系。本研究通过检测NHL 患者血清TAM 和β2MG 水平，以探讨其在NHL 诊断、疗效和预后判断中的临床意义。

1　资料与方法

1.1　一般资料　2010年6月至2012年6月在本院就诊经病理组织学检查确诊为NHL 的患者161 例。其中男性87 例，女性74例，年龄11～82岁，中位年龄52 岁。患者临床、病理及实验室资料完整，并密切随访。患者病理类型和恶性程度按1997年WHO 制定的造血淋巴组织肿瘤分类标准[3]及《淋巴瘤》[4]进行分类;临床分期按Ann Arbor 进行分期。161 例NHL 中按恶性程度分为高侵袭性19 例、侵袭性112 例、惰性30例。161例NHL 患者临床分期为Ⅰ ～ Ⅱ 期39 例、Ⅲ ～ Ⅳ 期122例，其中9 例患者骨髓有浸润。161 例患者均接受化疗，患者进行2周期的化疗后根据《血液病诊断及疗效标准》[5]确定化疗疗效。37例健康对照组为本院2010 年9 月的健康体检者，平均年龄为54岁，男性21例、女性16例。

1.2　仪器与试剂　GFⅡ 半自动生化分析仪、可见分光光度计、Eppendorf微量移液器、数显恒温水箱HH420、LuminexFLEX MAP3D 液相芯片检测仪、临床TAM 检测试剂盒(青岛博新生物技术有限公司);MilliporeMilliplex MAP HKTX2试剂盒(上海密理博贸易有限公司)。

1.3　方法

1.3.1　标本收集　所有患者于化疗前和完成2个周期化疗后采集空腹静脉血4mL，混匀后按3000×g离心10min后分离血清，-80 ℃保存待测(避免反复冻融)。排除患者在观察期间存在感染、出血或组织创伤等情况。

1.3.2　检测方法

1.3.2.1　TAM 的测定　严格按血清TAM 检测试剂说明书要求进行，由专门技术人员操作。准确取100μL 血清加入含 2.0mLTAM 试剂的测试管中，置沸水浴中15min，取出测试管，置冷水中冷却5 min，在GFⅡ 半自动生化分析仪450nm波长处，以蒸馏水调零，测定其吸光度，根据标准曲线算出相应的TAM 值。按照青岛博新生物技术有限公司提供的判定标准：TAM<95U/mL 为阴性，≥95U/mL 为阳性。

1.3.2.2　血清β2MG 的测定　取200μL 血清放到96 孔板中，将试剂盒提供的塑料珠与缓冲液混合均匀，向标本检测板中加入塑料珠混悬液，25μL 每孔。在室温下避光振摇标本检测板16h。向标本检测板中加入检测抗体，50μL 每孔。在室温下振摇5min后将标本放入LuminexFLEX MAP3D 液相芯片检测仪中检测，将检测产生的数据，用软件Xponent4的五参数法进行分析。β2MG<1650ng/mL 为正常。

1.4　统计学处理　采用SPSS13.0 统计分析软件对数据进行统计学处理，所有计量资料以狓±狊表示，组间比较采用狋检验，以p<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1　NHL 组与健康对照组血清中TAM 和β2MG 水平比较　NHL 组TAM 和β2MG 水平分别为(103.91±17.68)U/mL、(5259.2±40.27)ng/mL，均高于健康对照组的(79.83± 10.24)U/mL、(1017.9±22.73)ng/mL，两组间TAM 和β2MG 差异均有统计学意义(犘<0.05)。

2.2　合并骨髓浸润的NHL 患者血清TAM、β2MG 水平与骨髓未浸润组的比较　合并骨髓浸润的NHL 患者共有9例，其血清TAM 浓度为(112.24±7.94)U/mL，比骨髓未浸润组[TAM 浓度为(102.92±15.27)U/mL]高，差异有统计学意义(p<0.05);其血清β2MG 平均浓度为6521.5ng/mL 比骨髓未浸润组(β2MG 平均浓度5031.7ng/mL)高，差异有统计学意义(犘<0.05)。

2.3　不同年龄、性别、恶性程度及临床分期的患者血清TAM、β2MG 水平比较　TAM 及β2MG 表达水平在患者年龄和性别组间差异均无统计学意义(犘>0.05);惰性淋巴瘤患者与侵袭性淋巴瘤患者的TAM、β2MG 比较，差异有统计学意义(p<0.05);Ⅰ ～ Ⅱ 期与Ⅲ ～ Ⅳ 期NHL 患者TAM、β2MG 表达水平比较，差异有统计学意义(p<0.05)，见表1。

表1　　NHL 患者治疗前血清TAM 和β2MG 水平

年龄(岁)　

>60 62 104.69±16.81 5507.2±50.65　

≤60 99 102.51±21.70 5071.0±36.25

性别　

男性87 102.46±13.24 5736.2±53.13　

女性74 103.81±10.62 5221.1±39.77

恶性程度　

惰性30 97.86±9.85 4396.5±29.78　

侵袭性131 108.65±20.19 5916.0±36.53

临床分期　

Ⅰ～Ⅱ期39 96.82±6.45 4052.2±19.44　

Ⅲ～Ⅳ期122 106.47±13.84# 5771.7±64.26#　　 ：p<0.05，与NHL 惰性患者比较;# ：p<0.05，与Ⅰ ～ Ⅱ 期患者比较。

2.4　　临床疗效评价　161例NHL 患者接受2 个周期化疗后，47.83%完全缓解(CR)，19.88%部分缓解(PR)，18.63%病情稳定(SD)，13.66% 病情进展(PD)。SD 组加上PD 组为无效组。

2.5　NHL 患者化疗前后血清TAM、β2MG 表达水平的比较　分别取NHL 患者治疗前后的血清标本，自身对照比较治疗前后的TAM 及β2MG 水平。CR 组和PR 组化疗后与化疗前患者TAM 及β2MG 水平比较，后者均明显低于前者(p<0.05)。无效组患者化疗前后TAM 及β2MG 水平无明显变化(犘>0.05)，见表2。

表2　　NHL 患者化疗前后血清TAM 和β2-MG

CR 组(n-77)　化疗前105.44±18.75 6663.1±51.00　化疗后89.54±15.63 2921.9±25.41

PR 组(n-32)　化疗前106.44±22.66 5741.3±47.94　化疗后92.78±12.84# 3495.1±22.69#

无效组(n-52)　化疗前105.60±14.66 5995.8±43.05　化疗后108.50±20.74 6340.4±64.28　　 ：p<0.01，与CR 组化疗前比较;# ：p<0.01，与PR 组化疗前比较。

3　讨　　论

目前国际上淋巴瘤诊断的金标准是病理组织学诊断，NHL的预后指标多采用国际预后指标(IPI)，但国际上尚无可用于淋巴瘤预后判断的金指标[6]。TAM 是新型的以糖蛋白等糖胺类物质和L羟脯氨酸等氨基酸类物质为主要检测对象的试剂。TAM 通过检测末端唾液酸含量来检测肿瘤信号。其次，末端聚糖抗原决定簇过表达经常出现，已发现有sLex、sTn、GloboH、Ley和抗原聚唾液酸等。TAM 通过特殊的高分子载体识别特定的寡糖序列从而识别特定末端聚糖抗原决定簇，并与之发生反应[7]。肿瘤发生时羟脯氨酸含量升高，羟脯氨酸为体内骨和胶原的基本结构;肿瘤发生骨转移的时候，大量骨和胶原分解，释放出羟脯氨酸，故羟脯氨酸含量对肿瘤骨转移敏感。刘泽民[8]做了血清游离脯氨酸、游离羟脯氨酸和肽结合羟脯氨酸测定及其在骨肿瘤的评价，其研究发现，游离羟脯氨酸在恶性肿瘤患者中显著增高，肽结合羟脯氨酸在鉴别骨肿瘤恶性和良性中有显著意义。目前发现的肿瘤标志物大部分都是包含特定的寡糖序列的糖蛋白、糖脂;TAM 通过高分子载体识别这些寡糖序列从而与多种肿瘤标志物进行反应。 β2MG 在许多恶性肿瘤患者中均有不同程度的升高，尤以代谢活跃的恶性肿瘤细胞为著。由于大部分肿瘤的β2MG阳性率都低于50%，与其他肿瘤标志物联合应用就十分重要。陈芳等[9]研究显示β2MG 对NHL 患者有无骨髓浸润、疗效判断有重要意义。近年来有学者认为血清β2MG 在NHL 患者中有不同程度升高[10]。梁进等[11]研究显示NHL 患者的β2MG 浓度常高于正常值，且Ⅲ～Ⅳ期患者明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(p<0.05)，伴有全身症状者明显高于无全身症状者;CR、PR、SD 组患者治疗后β2MG 水平明显下降(p<0.05)。以上结果说明，β2MG 表达水平与临床分期、全身症状、骨髓浸润情况及临床疗效有相关性。Federico等[12]测定了236 例滤泡性淋巴瘤患者β2MG 浓度并探讨其预后作用，结果显示β2MG 是一项独立、稳定的预后指标;多因素分析显示β2MG 对生存期的影响独立于IPI评分。β2MG 可以作为IPI评分以外的一项独立的预后指标。当发生骨髓浸润时，NHL 细胞自身合成β2MG 的速度加快、代谢旺盛，破坏增加导致大量β2MG 释放入血，同时机体参与肿瘤免疫的细胞增生也导致β2MG 合成量的增加。多数学者认为，β2MG 持续增高提示肿瘤的恶性度增加，预后欠佳。本研究分别对患者年龄、性别、病理恶性程度和临床分期进行统计学分析。结果显示161 例NHL 患者中，侵袭性、高侵袭性的NHL 患者的TAM 及β2MG 浓度比惰性淋巴瘤患者的高，差异有统计学意义(p<0.05)。Ⅰ ～ Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期NHL 患者TAM 及β2MG 表达水平差异有统计学意义(p<0.05);说明临床分期晚，肿瘤负荷大，其TAM 及β2MG 会有显著变化。CR、PR 组治疗后TAM 及 β2MG 表达水平较治疗前明显下降(p<0.05)，而无效组患者治疗前后TAM 及β2MG 水平无明显变化(p>0.05)，提示血清TAM 及β2MG 表达水平与NHL 预后及疗效有关。同一种肿瘤可表达多种肿瘤标志物，而一种肿瘤标志物可出现在多种肿瘤中。选择特异性肿瘤标志物有利于提高肿瘤诊断的阳性率;动态观测有利于良性和恶性肿瘤的鉴别以及对复发、转移和预后的判断。本研究检测NHL 患者肿瘤标志物，TAM 反映肿瘤生长速度，β2MG 反映肿瘤负荷，两者联合作为NHL 患者临床分期、骨髓浸润、预后及疗效判断的辅助指标，有助于化疗方案的调整，对NHL 临床诊断和治疗有重要的参考意义。

参考文献

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[12]Federico M，GuglielmiC，LuminariS，etal.Prognosticrelevanceofserumbeta2microglobulininpatientswithfollicularlymphomatreated with anthracyclinecontaining regimens.A GISL study[J].Haematologica，2007，92(11)：14821488.

(收稿日期：20120603)