HLADR基因与广西地区汉族、壮族IgA肾病相关性的研究

　　作者：冯 炜 黄 莉 廖蕴华 作者单位：广西医科大学第一附属医院肾内科，广西 南宁 530021

　　【摘要】目的 探讨广西地区汉族、壮族IgA肾病与HLADR基因的相关性。方法 采用聚合酶链反应序列特异性引物法(PCRSSP)对87名IgA肾病患者及110名正常对照者的HLADR4、DR12基因频率进行检测。结果 壮族IgA肾病组HLADR4的基因频率高于对照组(P<0.05)，HLADR4基因阳性组持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于阴性组(P<0.05)。汉族IgA肾病组HLADR12的基因频率高于对照组(P<0.01)，HLADR12基因阳性组持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于阴性组(P<0.01)。结论 ①HLADR4基因可能是广西壮族IgA肾病的易感基因;HLADR12基因可能是广西汉族IgA肾病的易感基因。②HLADR4基因与临床表现为持续性镜下血尿伴蛋白尿的广西壮族IgA肾病相关，HLADR12基因与临床表现为持续性镜下血尿伴蛋白尿的广西汉族IgA肾病相关。③HLADR4、HLADR12基因与广西壮族、汉族IgA肾病的不良病理改变均无相关性。

　　【关键词】 IgA肾病 HLA DRB1基因 PCR SSP

　　Correlation between HLADR gene and IgA nephropathy of Han and Chuang nationality in Guangxi area

　　FENG Wei, HUANG Li, LIAO YunHua.

　　Urology Department, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi, China

　　【Abstract】 Objective To explore the correlation between HLADR gene and IgA nephropathy of Han and Chuang nationality in Guangxi area. Methods HLADR4 and HLADR12 gene frequency were detected in 87 patients with IgA nephropathy and 110 normal healthy controls by PCRSSP. Results HLADR4 gene frequency of Chuang nationality IgA nephropathy group was higher than that of control group(P<0.05)，the persistent microscopic hematuria accompanied with albuminuria rate of HLADR4 gene positive group was higher than that of negative group(P<0.05). HLADR12 gene frequency of Han nationality IgA nephropathy group was higher than that of control group(P<0.01)，the persistent microscopic hematuria accompanied with albuminuria rate of HLADR12 gene positive group was higher than that of negative group(P<0.01). Conclusions ①HLADR4 gene might be predisposing genes of IgA nephropathy of Guangxi Chuang nationality;HLADR12 gene might be predisposing genes of IgA nephropathy of Guangxi Han nationality. ②HLADR4 gene is related to IgA nephropathy accompanied with persistent microscopic hematuria and albuminuria of Guangxi Chuang nationality, HLADR12 gene is related to those of Guangxi Han nationality. ③HLADR4 and HLADR12 gene have no relation to bad pathological changes of Guangxi Chuang and Han nationalities IgA nephropathy.

　　【Key words】 IgA nephropathy;HLADRB1 gene;PCRSSP

　　IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球肾炎，也是导致终末期肾病的主要病因。IgA肾病的发生与遗传因素、环境因素和机体免疫功能异常密切相关，其中遗传因素在本病的发生、发展过程中起重要作用。本课题组的前期研究表明HLADR12基因与广西汉族IgA肾病的发生显著相关〔1，2〕。壮族是中国人口最多的少数民族，主要分布在广西地区，本研究旨在进一步探讨HLADR基因与广西壮族IgA肾病的发生及病情进展的关系，同时探讨汉族与壮族IgA肾病的临床和病理表现差异。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 ①IgA肾病组：病例选自2001年2月～2004年3月在我院肾内科住院并经临床及病理检查确诊为原发性IgA肾病患者，均为广西籍人。壮族25例，三代均为壮族，患者之间无血缘关系，男8例，女17例，年龄14～57(平均34.0±11.3)岁，病程0.5个月～17年。汉族62例，三代均为汉族，患者之间无血缘关系，男32例，女30例，年龄15～53(平均29.7±10.9)岁，病程0.5个月～11年。临床、病理检查(光镜、免疫组化)排除了紫癜性肾炎、肝脏疾病所致的肾脏病变、系统性红斑狼疮等继发性IgA肾病。②正常对照组：110例。50例来自广西都安县壮族健康献血者，三代均为壮族，献血者之间无血缘关系，男18例，女32例，年龄18～45(平均29.2±5.6)岁;60例来自广西医科大学健康献血者，均为汉族，无血缘关系，男31例，女29例，年龄18～28(平均26.3±3.6)岁。均无IgA肾病及自身免疫性疾病史和家族史。

　　1.2 方法

　　1.2.1 DNA模板制备 取受检者外周静脉血2 ml(EDTA抗凝)，应用经典饱和酚/氯仿法提取。抽提后的DNA溶于TE溶液中测OD值及1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质与量，A260 nm/A280 nm均在1.75～2.0范围。

　　1.2.2 PCR扩增引物 参照Olerup〔3〕等方法设计等位基因序列特异性引物(SSP)：DRB1*04基因的上游序列为5′GTTTCTTGGAGCAGGTTAAAC3′，下游序列为5′CTGCACTGTGAAGCTCTCAC3′、5′CTGCACTGTGAAGCTCTCCA3′，扩增产物为260 bp 。DRB1*12基因的上游序列为5′AGTACTCTACGGGTGAGTGTT3′,下游序列为5′CACTGTGAAGCTCTCCACAG3′，扩增产物为248 bp。内对照引物:上游序列为5′TGCCAAGTGGAGCACCCAA3′,下游序列5′GCATCTTGCTCTGTGCAGAT3′，扩增产物为796 bp，均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

　　1.2.3 PCR扩增体系及参数 每25 μl PCR反应体系加入4 μl DNA溶解液(含60 ng基因组DNA)，PCR缓冲液〔50 mmol/L KCl，1.5 mmol/L MgCl2，10 mmol/L TrisHCl(pH 8.3)，0.01% (W/V) 明胶〕，200 μmol/L的dATP、dTTP、dCTP、dGTP，1 μmol/L特异性引物，0.2 μmol/L内对照引物，1 U Taq DNA多聚酶，扩增进行30个循环。IgA肾病组：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，DRB1*04和DRB1*12的退火条件分别为61℃ 30 s、62℃ 30 s，72℃延伸20 s，最后，72℃再延伸5 min。对照组：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，64℃退火30 s，72℃延伸20 s，最后，72℃再延伸5 min。

　　1.2.4 PCR产物的检测 扩增产物经含有溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶电泳，电泳缓冲液为1×TBE，电压120 V，电泳时间30 min，于紫外灯下观察扩增结果并拍照留记录。

　　1.2.5 临床资料 主要临床指标包括：血压、尿常规、24 h尿蛋白定量、血清肌酐、血浆总蛋白、白蛋白、血清免疫球蛋白(Ig)、血脂全套等。高血压定义为收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg。

　　1.2.6 肾组织病理检查 常规行光镜、免疫组化检查。按文献〔4〕分级。

　　1.3 统计学处理 采用SPSS11.0软件进行χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 IgA肾病组HLADR等位基因频率分布变化 汉族IgA肾病HLADR12基因频率高于汉族对照组(P<0.01)，壮族IgA肾病组的HLADR4的基因频率高于壮族对照组(P<0.05)，见表1。 表1 汉族、壮族IgA肾病组与 对照组HLADR等位基因频率分布与汉族对照组比较：1)P<0.01;与壮族对照组比较：2)P<0.05

　　2.2 IgA肾病组临床表现与HLADR等位基因的关系 壮族HLADR4基因阳性组持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于阴性组(P<0.05)，HLADR4基因阴性组中汉族IgA肾病患者持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于壮族IgA肾病患者(P<0.05)，见表2。HLADR12基因阳性组持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于阴性组(P<0.01)，HLADR12基因阴性组汉族IgA肾病患者发作性肉眼血尿的发生率高于壮族IgA肾病患者(P<0.05)，见表3。表2 汉族、壮族IgA肾病临床表现与 HLADR4基因的关系表3 汉族、壮族IgA肾病临床表现与HLADR12基因的关与汉族阴性组比较：1)P<0.01;与壮族阴性组比较：2)P<0.05

　　2.3 IgA肾病组病理表现与HLADR等位基因的关系 HLADR4基因、HLADR12基因与汉族、壮族IgA肾病患者的肾损害分级，以及肾小管萎缩、肾间质纤维化、IgM沉积、新月体形成等病理改变差异不显著，以及汉族、壮族IgA肾病患者之间病理改变差异不显著。

　　3 讨 论

　　IgA肾病是以IgA沉积于肾小球系膜区为主要病理特征的原发性肾小球肾炎，约1/3患者在发病10～20年后进展为终末期肾衰竭〔5〕。近20多年来，国内外学者研究表明IgA肾病与HLA有关联。1976年MacDonald等首先报道了IgA肾病患者HLABw35抗原频率明显增加〔6〕。Kashiwabara等研究显示IgA肾病HLADR4的频率高于对照组〔7〕。法国的Fauchet等研究也发现IgA肾病患者的HLADR4抗原频率增高〔8〕。陈香美等报道北京地区汉族IgA肾病患者HLADR12基因频率明显增高〔9〕。陈楠等报道上海地区汉族IgA肾病患者HLADR4抗原频率明显增高〔10〕。廖蕴华等报道广西地区汉族IgA肾病患者HLADR12基因频率高于对照组〔1，2〕。

　　本研究证实汉族IgA肾病的HLADR12的基因频率高于对照组(P<0.01)，与陈香美等的报道相似，提示HLADR12基因可能是广西地区汉族IgA肾病的易感基因。壮族IgA肾病的HLADR4的基因频率高于对照组(P<0.05)，提示HLADR4基因可能是广西地区壮族IgA肾病的易感基因。

　　将壮族IgA肾病的HLADR4基因阳性组与阴性组比较，发现HLADR4基因阳性组持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于阴性组(P<0.05)，提示HLADR4基因可能是广西地区壮族IgA肾病持续性镜下血尿伴蛋白尿的易感基因。对壮族、汉族IgA肾病的HLADR4基因阳性组之间、阴性组之间进行比较：阴性组中汉族IgA肾病患者持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于壮族IgA肾病患者(P<0.05)。

　　本研究还表明汉族IgA肾病的HLADR12基因阳性组持续性镜下血尿伴蛋白尿的发生率高于阴性组(P<0.01)，提示HLADR12基因可能是广西地区汉族IgA肾病持续性镜下血尿伴蛋白尿的易感基因。对壮族、汉族IgA肾病的HLADR12基因阴性组之间进行比较：汉族IgA肾病患者发作性肉眼血尿的发生率高于壮族IgA肾病患者(P<0.05)。

　　IgA肾病主要累及肾小球，多数以弥漫性系膜增生病变为典型改变。本研究对壮族、汉族IgA肾病患者的病理表现进行分析，结果表明HLADR4基因、HLADR12基因与汉族、壮族IgA肾病患者的肾损害分级，以及肾小管萎缩、肾间质纤维化、IgM沉积、新月体形成等病理改变差异不显著，以及汉族、壮族IgA肾病患者之间病理改变的比较差异不显著，有待于增加病例数以进一步研究。

　　【参考文献】

　　1 廖蕴华，黄 莉，孙安远，等.HLADR12基因与广西地区汉族IgA肾病关系的研究〔J〕.中华肾脏病杂志，2003;19(3)：1889.

　　2 黄 莉，廖蕴华，孙安远.HLADR12基因与广西地区汉族IgA肾病的关联性研究〔J〕.临床内科杂志，2005;22(2)：8991.

　　3 Olerup O，Zetterquist H.HLADR tying by PCR amplication with sequencespecificprimers(PCRSSP) in 2 hours:an alternative to serological DR typing in clinical practiceincluding donorrecipient matching in cadaveric transplantation〔J〕.Tissue Antigens,1992;39(5):22535.

　　4 Schena FP.IgA nephropathies.In：Cameron JS，Davision AM.Oxford Textbook of Clinical Nephrology〔M〕.Oxford:Oxford University Press,1992;33969.

　　5 陈伟强，古宏标，李幼姬，等.中国南方汉族IgA肾病患者FcαR1基因T56C多态性与肾脏病理损害的关系〔J〕.中国老年学杂志，2008;28(10)：9634.

　　6 Macdonald IM，Dumble LJ,KincaidSmith P.HLA and glomerulonephritis,in HLA and disease〔M〕.INSERM，1976：203.

　　7 Kashiwabara H,Shishido H.HLA in IgA glomerulonephritis〔J〕.Tissue Antigen，1980;16(5):4112.

　　8 Fauchet R,Le pogamp P,Genetet B,et al.HLADR4 antigen and IgA nephropathy〔J〕.Tissue Antigens,1980;16(4):405.

　　9 陈香美，柏立群.利用特异性寡核苷酸探针检测IgA肾病HLADR基因频率及临床意义〔J〕.中华医学杂志，1992;72(4)：207.

　　10 陈 楠，陈晓农.用PCRSSO检测IgA肾炎HLADRB1、DQA1、DQB1等位基因及其临床意义〔J〕.上海免疫学杂志，1997;17(6)：344.