脂联素基因5′端调控区11391G/A核苷酸多态性与2型糖尿病发病的相关性

　　作者：赵海燕,孙崴,张霞,张萍,苏本利　　作者单位：1. 广东医学院附属南山医院内分泌科， 广东 深圳 2. 大连医科大学附属二院内分泌科， 辽宁 大连

　　【摘要】目的 探讨中国人脂朕素基因SNP11391G/A和11371C/G位点变异与2型糖尿病发病的关系。方法 运用PCRRFLP技术在258例(86例非糖尿病者和172例2型糖尿病患者)大连地区汉族人检测APN基因SNP11377C/G和11391G/A变异情况，分析其与2型糖尿病发病的相关性。结果 11377C/G多态性与糖尿病发病无关，11391G/A多态性与2型糖尿病发病相关(χ2=7.662，P<0.005)。结论 APN基因11391A基因变异可能与变异携带者胰岛细胞代偿功能相关。

　　【关键词】 糖尿病,非胰岛素依赖型,脂联素,遗传学;多态性，单核苷酸

　　To investigate whether the APN gene 11391G/A and 11377C/G polymorphism are associated with type 2 diabetes mellitus in Chinese people. Methods A total of 258 Dalian subjects in China were selected. 172 had type 2 diabetes and 86 did not have type 2 diabetes. Genotyping of APN was undertaken with the PCRRFLP method. Results The 11377C/G polymorphism was not associated with type 2 diabetes and 11391G/A was related to type 2 diabetes (χ2=7.662, P<0.005). Conclusion The presence of the11391A allele might lead to compromised beta cell function in type 2 diabetes.

　　Key words： Diabetesmellitus, noninsulindepenolent; Adiponectin; Genetics; polymorphism, single nucleoticle2型糖尿病发病的危险。本研究旨在研究大连地区汉族人脂联素基因此两个位点的变异情况，探讨其与2型糖尿病发病情况及代谢紊乱等方面的相关性。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象 选取中国大连地区无血缘关系汉族人258例，其中体检正常人86例，男57例，女29例，均无糖尿病病史及家族史，空腹血糖<6.0?mmol/L方可入选(ADA/1997)，平均年龄(62.0±10.4) 岁，来自门诊体检者;2型糖尿病患者172例，男90例，女82例，符合ADA (1997)糖尿病诊断标准，平均(60.00±12.3)岁，糖尿病患者为2002年6月到2003年6月大连医科大学附属第二医院住院的糖尿病患者。

　　1.2 方法

　　1.2.1 临床资料 受试者空腹测量体质量、身高，体质量指数(BMI)=体质量(kg)/身高2(m2)。用酶化学法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、脂蛋白胆固醇和空腹血糖(FPG)水平。用化学发光法测定空腹胰岛素(FIns)、C肽(FCP)。胰岛素敏感性评价指标采用稳态最小模型(HOMA)参数，胰岛素敏感性指数(HOMAIR) =FPG×FIns/22.5，细胞功能指数(HBCI)=20×FIns/(FPG3.5)。

　　1.2.2 脂联素基因SNP11377和11391变异分析 常规苯酚/氯仿法抽提外周血白细胞DNA，300?ng　DNA为模板在总体积25?μL内进行PCR。上游引物：5′ACTTGCCCTGCCTCTGTCTG3′，下游引物：5′GCCTGGAGAACTGGAAGCTG3′(由大连宝生物公司合成)。 PCR 反应条件： 94?℃预变性5?min;94?℃变性30?s，58?℃退火30?s，72?℃延伸30?s，共30个循环;72?℃延伸5?min。扩增产物长248?bp，经2%琼脂糖凝胶电泳确认后，于37?℃，以限制性内切酶HhaI(购自大连宝生物公司)消化24?h确定SNP11377 G/C基因型、以限制性内切酶MspI(购自大连宝生物公司)消化3?h确定SNP11391G/A基因型，产物用4%琼脂糖凝胶电泳分离：SNP11377 GG (135?bp、113?bp)，CC(248?bp)， CG(248?bp、135?bp、113?bp); SNP11391 AA (248?bp)，GG(127?bp、121?bp)， AG(248?bp、127?bp、121?bp)。

　　1.3 统计学处理 采用SPSS10.0软件处理，实验数据以

　　Fig.1 4% agarose gel electrophoresis of the PCR amplication product digested by HhaI or MspI

　　M: DNA marker; 1: SNP11377 GG; 2: SNP11377 CC; 3: SNP11377 CG;4: SNP11391 AA;5: SNP11391 GG; 6: SNP11391 AG

　　2 结 果

　　2.1 11377 C/G和11399 G/A基因型与糖尿病的相关性 11377位点的C/G基因型频率在非糖尿病患者群中的分布分别为CC 74.4%、CG 20.9%、GG 4.7%，等位基因频率C 0.848?5、G 0.151?5;糖尿病组分别为CC 75.6%、CG 17.4%、GG 7.0%，等位基因频率C 0.843?0、G 0.157?0。两组间位点C/G基因型频率及等位基因频率基本相似，无统计学差别(χ2=0.885，P>0.05)。

　　χ2=0.885, P=0.642。 11391位点GA和AA基因型频率在糖尿病组明显高于非糖尿病组;A等位基因频率糖尿病组高于非糖尿病组，而G等位基因频率则明显降低。

　　(χ2)0.139BMI24.60±3.1024.40±4.100.2190.827FPG(c/mmol•L-1)1.7770.079Fins(mU/L)10.08±4.470.8280.400HOMAIR0.5230.600HBCI126.10±69.9096.70±51.301.6690.100TC(c/mmol•L-1)4.24±1.283.62±1.341.9380.056TG(c/mmol•L-1)1.25±0.741.06±0.661.0390.302HDLC(c/mmol•L-1)1.21±0.230.92±0.132.4370.023 非糖尿病组11391携带A等位基因(A组)者的Fins、BMI、年龄、HOMAIR、 HBCI均有低于携带GG基因型者(GG组)的趋势(表4)，但同样未发现统计学差异。同样，在糖尿病患者两组之间未发现统计学差异。

　　3 讨 论

　　法国高加索人APN基因5′调控区11377C/G和11391G/A两位点的单核甘酸多态性与脂朕素浓度及2型糖尿病发病相关，11377CC和11391AA基因型的脂朕素浓度降低，2型糖尿病的发病风险增加[2]。本研究发现，大连地区汉族人也存在APN基因11377位点和SNP11391位点C→G和G→A变异。11377G等位基因频率在非糖尿病者为15.15%，在糖尿病患者为15.7%，低于法国高加索人该位点变异率(29.5%)[2]，本研究没有发现11377C/G多态性与糖尿病发病相关。11391位点A等位基因在非糖尿病者为2.3%，在糖尿病患者为11.9%，与法国人在该位点变异率相近(10.4%)，本研究得出了相同的结论，即11391G/A核苷酸多态性与糖尿病发病相关(P<0.005)。我国陕西汉族人的APN基因的11377C/G变异研究显示，11377C等位基因频率在非糖尿病者和糖尿病患者分别为28.7%和27.3%。虽然C等位基因频率高于本研究的结果，但也未发现与糖尿病发病相关[3]。

　　APN可增强小鼠的胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗[2]，人体内APN浓度降低与高胰岛素血症，胰岛素抵抗相关性较肥胖和糖尿病存在与否更为密切[45]。 但Freguel小组的研究没有发现其与胰岛素抵抗的相关性[3]。本研究对APN基因的11377和11391两位点核苷酸多态性与胰岛细胞功能与胰岛素的敏感性进行了分析。在非糖尿病者11377G等位基因组的FPG较高，HBCI、Fins和TC均有低于CC的趋势;在非糖尿病者11391 A组的年龄、BMI、HBCI、Fins、HOMAIR均有更低的趋势，而FPG有升高的趋势。这说明APN基因两位点核苷酸变异可能与胰岛细胞代偿能力减弱有关。在糖尿病组没有发现此两个核苷酸位点多态性与糖尿病患者代谢状态的相关性。

　　总之，本研究结果显示，脂联素基因调控区11377C/G核苷酸多态性与糖尿病发病无关，11391G/A核苷酸多态性与2型糖尿病发病相关。在非糖尿病者两处核苷酸多态性可能与发病年龄、体质量、胰岛细胞代偿功能和胰岛素抵抗相关，但由于本次研究人数相对较少，没有发现显著的统计学差异，现正在扩大对正常人群的研究。

　　【参考文献】

　　[1] 何岚，刘萍，叶枫，等. 脂联素基因启动子区11377C/G单核苷酸多态性与陕西汉族人血清脂联素水平和2型糖尿病的关系[J].第四军医大学学报， 2006，27(16)：14931495.

　　[4] Berg A H, Combs T P, Scherer P E. ACRP30/adiponectin: an adipokine regulating glucose and lipid metabolism[J]. Trends Endocrinol Metab, 2002， 13(2):8489.

　　[5] Weyer C, Funahashi T, Tanaka S, et al. Hypoadiponectinemia in obesity and type 2 diabetes: close association with insulin resistance and hyperinsulinemia[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2001， 86(5):19301935.