利拉鲁肽对2型糖尿病患者血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂水平的影响

　　作者：夏常杰 李 伶1 杨刚毅 李 钶 朱 伟 李隆辉 董 靖 吴丹冬　1 作者单位：重庆医科大学检验系临床生化教研室教育部实验诊断重点实验室　(重庆医科大学附属第二医院内分泌科,重庆 400010)

　　【摘要】 目的 探讨胰高糖素样肽1(GLP1)类似物利拉鲁肽(Liraglutide)对2型糖尿病(T2DM)患者血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)水平的影响。方法 采用酶联免疫法测定T2DM患者及正常人Vaspin水平，分析血浆Vaspin水平与体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、胰岛素抵抗指数(HOMAIR)、胰岛素分泌指数(HOMAIS)、游离脂肪酸(FFA)等的关系，观察利拉鲁肽治疗前后T2DM患者血浆Vaspin水平变化。结果 T2DM患者血浆Vaspin水平显著高于正常人(P<0.05)。血浆Vaspin水平与空腹血糖(FPG)及糖化血红蛋白(HbA1c)呈明显正相关(r=0.35,P<0.01和r=0.25,P<0.05)，而与DBP呈明显负相关(r=-0.25，P<0.05)，FPG、WHR分别是影响血浆Vaspin水平的独立相关因素。T2DM患者经利拉鲁肽治疗后，体重、BMI、WHR、FPG、餐后2小时血糖(2 h PG)、HbA1c均显著降低(P<0.01)，而HOMAIS则显著增高(P<0.01)，空腹血浆Vaspin也显著增高(P<0.05)。结论 利拉鲁肽能有效改善T2DM患者糖脂代谢和胰岛素敏感性，增强胰岛β细胞功能，同时升高血浆Vaspin水平。

　　【关键词】 丝氨酸蛋白酶抑制剂;2型糖尿病;利拉鲁肽

　　【Abstract】 Objective To investigate the effects of longacting human glucagonlike peptide1(GLP1) analog Liraglutide on plasma Vaspin level in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Methods Plasma Vaspin level was measured by ELISA in patients with T2DM and normal controls (NGT).The relationship between plasma Vaspin levels and BMI, WHR, HOMAIR, HOMAIS, FFA were also analyzed. After Liraglutide treatment, plasma Vaspin levels was observed in patients with T2DM.Results T2DM group had significantly higher plasma Vaspin levels than that of NGT group 〔(0.73±0.32) vs.(0.54±0.22) μg/L, P<0.05〕. Plasma Vaspin level was correlated positively with FPG,HbA1c (r=0.35, P<0.01 and r=0.25, P<0.05) and negatively with DBP(r=-0.25，P<0.05). FPG and WHR were independently associated with plasma Vaspin level. After Liraglutide treatment, body weight, WHR, BMI, 2 h PG, FPG and HbA1c were significantly decreased (all P<0.01), and HOMAIS level was significantly increased(P<0.01)in T2DM patients. Interestingly, fasting plasma Vaspin level was also significantly increased on posttreatment with Liraglutide 〔(0.73±0.32) vs. (0.92±0.38) μg/L, P<0.05〕.Conclusions Liraglutide can remarkably improve glucose and lipid metabolism, insulin resistance, as well as pancreatic βcell function and elevate plasma Vaspin level.

　　【Key words】 Vaspin; Type 2 diabetes mellitus; Liraglutide

　　近年研究表明，由脂肪细胞分泌的细胞因子如脂联素(adiponectin)、瘦素(leptin)、抵抗素(resistin)等在IR和糖脂代谢紊乱的发生和发展中具有重要的作用。内脏脂肪组织来源的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)是新近发现的一种脂肪细胞因子，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin家族〔1〕。有研究发现Vaspin与肥胖、IR和糖脂代谢有关〔2～4〕。但目前对它的认识并不一致，其确切的生理功能也不十分清楚。本研究观察胰高糖素样肽1(GLP1)类似物利拉鲁肽(Liraglutide)对T2DM患者血浆Vaspin水平的影响，为阐明Vaspin的生理功能提供重要的实验依据。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象

　　根据1999年WHO的诊断标准〔空腹血糖(FPG)≥7.0 mmol/L，负荷后2 h血糖(2 h PG)≥11.1 mmol/L〕诊断T2DM患者(T2DM组)28例(男12例,女16例)，年龄(53±8)岁，体重指数(BMI,24.37± 3.31)kg/m2。入选标准：①接受了至少3个月的一种或者多种口服降糖药(OADs)治疗;②糖化血红蛋白(HbA1c)：7.0%≤HbA1c≤11.0%;③年龄：18～75岁;④BMI≤45.0 kg/m2。排除标准：①试验前3个月内接受了胰岛素治疗;②肝功能受损(ALT≥正常值上限2倍)、肾功能受损(血清肌酐男≥135 μmol/l，女≥110 μmol/L);③在过去6个月中出现过有临床意义的心血管疾病、已知的增生性视网膜病变或黄斑病变;④妊娠妇女。正常对照组(NGT组)为本院健康体检或志愿者38例(男17例，女21例)，年龄(52±10)岁，BMI (23.99±4.03) kg/m2，均经75 g OGTT证实为糖代谢正常。各组均排除心、肝、肾等脏器疾病和高血压及其他内分泌疾病。健康对照均无糖尿病家族史。

　　1.2 方法

　　1.2.1 试验设计

　　T2DM患者停用正在服用的降糖药，并开始为期6 w的二甲双胍导入期治疗。在3 w内将剂量增加到1 500～2 000 mg/d，然后维持该剂量3 w;已经接受二甲双胍治疗的患者，可直接进入2 000 mg/d，3 w的维持期。导入期结束后，继续应用二甲双胍，并同时给予患者利拉鲁肽皮下注射，0.6～1.8 mg，1次/d。剂量调整期为2 w，疗程共16 w。治疗前后采集静脉血测定血浆Vaspin水平及其他生化指标。

　　1.2.2 血浆生化指标和Vaspin测定

　　由专人测量身高、体重、腰围、臀围、血压，并计算体重指数(BMI)=体重(kg)/身高2(m2) 和腰臀比(WHR)=腰围/臀围。隔夜14 h采集空腹静脉血，测定FPG、空腹胰岛素(FINS)、HbA1c、血脂、血浆游离脂肪酸(FFA)和血浆Vaspin水平，口服75 g无水葡萄糖后2 h再次采集静脉血，测定2 h PG。 空腹血浆Vaspin浓度采用酶联免疫法测定(北京爱迪博生物科技有限公司药盒)，线性范围0.08～50 μg /L，批内变异系数(CV)< 4%，批间CV <8%;血浆葡萄糖测定采用葡萄糖氧化酶法;FINS测定采用放射免疫法(中国原子能科学研究院药盒); FFA测定采用酶法(英国RANDOX公司药盒);HbA1c测定采用高压液相法(美国BioRad药盒);血脂测定采用酶法(浙江东瓯生物工程有限公司药盒);体内脂肪百分比 (FAT%) 用TBF410体脂分析仪测定。胰岛素抵抗指数(HOMAIR)=(FPG×FINS)/22.5。胰岛素分泌指数(HOMAIS)=(20×FINS)/(FPG3.5)

　　1.3 统计学分析

　　计量资料以x±s表示，非正态分布数据采取自然对数转换。两组间各指标比较用两独立样本t检验，组内比较采用配对t检验，指标间的关系判定采用直线相关分析及多元线性逐步回归分析。所有数据由SPSS16.0软件处理。

　　2 结 果

　　2.1 两组生化指标及血浆Vaspin水平比较

　　两组间年龄、性别、BMI、FAT%、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、FFA、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、甘油三酯(TG)等均无明显差异。T2DM组FPG、2 h PG、HbA1c、FINS、HOMAIR显著高于NGT组(P<0.01)(见表1)。T2DM患者血浆Vaspin水平(0.73±0.32)μg/L，也显著高于NGT组(0.54±0.22)μg/L，P<0.05。

　　2.2 利拉鲁肽治疗后血浆Vaspin水平的变化

　　T2DM患者经利拉鲁肽治疗16 w后，体重、BMI、WHR、HbA1c、2 h PG、FPG均显著降低(P<0.01)，而HOMAIS显著增高(P<0.01)。HOMAIR虽有降低趋势，差异无统计学意义(见表1)。利拉鲁肽治疗后血浆Vaspin水平〔(0.92±0.38)μg/L〕较治疗前〔(0.73±0.32)μg/L〕明显升高(P<0.05)。

　　2.3 血浆Vaspin与其他指标相关性分析

　　线性相关分析表明，血浆Vaspin水平与FPG、HbA1c呈明显正相关(r=0.35,P<0.01和r=0.25,P<0.05)，与DBP呈明显负相关(r=-0.25，P<0.05)。以血浆Vaspin水平为因变量，性别、年龄、BMI、WHR、BP、TC、LDLC、HDLC、FINS、HbA1c、HOMAIR等为自变量进行多元逐步回归分析表明，FPG及WHR是影响血浆Vaspin水平的独立相关因素(YVaspin=1.203+0.040XFPG-1.012 XWHR)。表1 T2DM组和对照组临床生化特征比较

　　3 讨 论

　　动物实验发现Vaspin在OLETF大鼠6 w龄时就可测到，30周龄时在内脏脂肪组织大量表达，它随着糖尿病加重和体重下降而降低〔5〕。它使肥胖小鼠葡萄糖清除率增加，并改善其胰岛素敏感性;可使肥胖动物脂肪组织中胰岛素敏感性相关基因如脂联素和瘦素的表达下调。但Vaspin在人类的研究结果却不尽相同，Klting等〔3〕对高加索人的研究发现Vaspin mRNA在超重和肥胖者的皮下和内脏脂肪组织中均有表达，在糖尿病患者表达增加，而在非肥胖 (BMI<25 kg/m2) 的正常人脂肪组织未检测到其表达。一些研究表明T2DM患者和正常糖耐量人群血中Vaspin水平无明显差异〔4，6，7〕。最近两项针对不同人种的研究显示T2DM患者循环Vaspin水平升高，且胰岛素增敏剂能使Vaspin水平降低〔6，8，9〕。因此，目前对Vaspin与胰岛素抵抗和T2DM关系的认识并不统一。

　　本研究测定了T2DM患者血浆Vaspin水平，结果发现T2DM患者血浆Vaspin水平明显高于正常对照组。这与国外有些相关研究结果类似〔9〕。相关性分析发现，血浆Vaspin水平与FPG和HbA1c呈明显正相关，与DBP呈明显负相关。多元线性逐步回归分析也提示FPG、WHR分别是影响血浆Vaspin水平的独立相关因素。这些结果表明糖脂代谢紊乱对血浆Vaspin水平改变有重要影响，血浆Vaspin可能是一种与胰岛素敏感性有关的脂肪细胞因子，其水平升高可能是一种对胰岛素敏感性降低和糖代谢受损的内部代偿性机制，进一步提示Vaspin可能IR与和T2DM的发生、发展具有密切关系。

　　利拉鲁肽是诺和诺德公司新近开发的GLP1类似物，目前尚未上市，它可耐受DPPIV的降解效应，半衰期较长，具有比GLP1更持久的降血糖效应〔10〕。然而，其确切作用机制目前并不十分清楚，尤其是它与一些脂肪细胞因子的关系尚属未知。为此，本文对口服降糖药治疗后血糖仍控制不佳的T2DM患者用利拉鲁肽进行了为期16 w的干预治疗,并观察了血生化指标和血浆Vaspin水平的变化。结果表明利拉鲁肽治疗后，T2DM患者体重、BMI、WHR、FPG、2 h PG和HbA1c均显著降低，而HOMAIS显著增高，HOMAIR也呈降低趋势，提示患者在利拉鲁肽治疗后糖脂代谢及胰岛β细胞功能改善，胰岛素敏感性增加。同时，发现经利拉鲁肽治疗16 w后，随着体重下降、糖脂代谢控制和IR的改善，患者血浆Vaspin水平明显升高,进一步提示血浆Vaspin在IR和T2DM的发生、发展中具有重要作用,但其具体作用机制并不清楚，推测T2DM患者利拉鲁肽治疗后血浆Vaspin进一步水平升高也许代表了一种短暂的适应机制，介导了由利拉鲁肽治疗所致的糖脂代谢改善和胰岛素敏感性增加。然而，这需要进一步的研究加以证实。

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