糖肾宁对早期糖尿病肾病细胞因子的影响研究

　　作者：叶赏和,傅晓骏,郑海文,吴采忠 作者单位：1.金华职业技术学院医学院;2.浙江省金华市中医院，浙江 金华 321000;3.浙江省义乌市中医院，浙江 义乌 322000

　　【摘要】目的：探讨糖肾宁对早期糖尿病肾病(DN)细胞因子的影响。方法：对78例早期DN(Ⅲ期)患者采用中心分层、区组随机化方法分为治疗组(糖肾宁组)与对照组(西药常规组)。对照组38例患者采用替米沙坦80 mg，1次/d进行治疗。治疗组在对照组基础上每天加服中药糖肾宁1剂,分2次口服, 8周为一疗程。采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA法)检测78例早期DN患者治疗前、治疗4周、治疗8周后血清和尿液中白细胞介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)及转化生长因子β1(TGFβ1)水平的变化。结果：两组治疗前血、尿IL6、TNFa、TGFβ1水平明显高于健康组(P<0.01);随着治疗时间的延长两组血、尿中上述细胞因子水平逐步下降，但治疗组在治疗4周和8周后均下降明显(P<0.01);对照组4周时无明显变化;8周后也下降(P<0.05)。对照组TGFβ1治疗 4周、8周均无明显变化; 治疗组与对照组同期血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1水平比较，差异有统计学意义(P<0.01)。结论：细胞因子与DN的发病、发展有密切关系，糖肾宁对血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 有明显的下调作用 。

　　【关键词】 糖尿病肾病;早期;糖肾宁;中药;细胞因子

　　Effect of Traditional Chinese Medicine Tangshenning on cytokines in patients with early diabetic nephropathy

　　YE Shanghe, FU XiAOjun， ZHENG Haiwen, WU Cai zhong

　　(1.Medical School, Jinhua Colloge of Professional Technology Jinhua 321017; 2. Jinhua Hospital of Traditional Chinese Medicine Jinhua, 321000; 3. Yiwu Hospital of Traditional Chinese Medicine Yiwu 322000， China)

　　[ABSTRACT] Objective: To discuss the effects of Tangshenning on cytokines in patients with early diabetic nephropathy. Methods: 78 early diabetic nephropathy cases (stage Ⅲ) were divided into treatment group and control group according to blocked randomization method. 38 cases of the control group were treated by telmisartan, 80 mg, qd, the treatment group was given the same dosage of telmisartan and an additional dose of Tangshenning per day (oral, bid). One course was consisted of eight days. At three time points including 4 weeks before the treatment, the week when the treatment started, and 8 weeks after the treatment, IL6,TNFαand TGFβ1 in serum and urine in all cases were evaluated and compared using enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Results: Before treatment, IL6,TNFαand TGFβ1 of the two groups were obvious higher than that of normal levels (P<0.01). After the treatment, cytokines of both treatment group and the control group showed descent tendency. After 4 weeks and 8 weeks of treatment, cytokines in treatment group significantly decreased (P all <0.01), while for the control group, the decrease become significant only after 8 weeks of treatment. TGFβ1 level of the control group almost remained the same after 8 weeks of treatment. There was significant difference between the levels of IL6, TNFαand TGFβ1 in both serum and urine between the two groups (P<0.01). Conclusions: Cytokines is correlated to the development of diabetic nephropathy, and Tangshenning can obviously lower IL6,TNFα and TGFβ1 in serum and urine for early diabetic nephropathy patients.

　　[KEY WORDS]Diabetic Nephropathy; Early; Tangshenning; Traditional Chinese Medicine; Cytokines

　　糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)最重要和最常见的并发症之一。DN的发生率占DM的33.6%,又是导致终末期肾病(ESRD)的重要原因,其发病机制迄今尚未完全阐明。细胞因子在糖尿病肾病(DN)发生、发展中的作用近年来备受关注。但细胞因子与2型糖尿病肾病关系报道尚少。本研究采用中药糖肾宁治疗早期2型糖尿病肾病患者，同时检测血清及尿液中白细胞介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)及转化生长因子β1 (TGFβ1)变化，探讨糖肾宁在治疗DN中的作用机制。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料

　　选择2007年10月～2009年10月期间,在金华市中医院、义乌市中医院肾内科及金华职业技术学院医学院专科门诊住院或非住院并符合1997年美国糖尿病学会制定的2型糖尿病诊断标准，根据国际通用Mogenson糖尿病肾病的分期标准确诊为早期DN(Ⅲ期) [1]患者78例为研究对象。78例患者平均(58.8±17.3)岁，平均病程(7.8±5.6)年;均排除心衰、尿路感染及其他引起尿白蛋白增高疾病, 无其他肝、肾和内分泌疾病引起的蛋白尿者。对78例患者采用中心分层、区组随机化方法分为治疗组(糖肾宁组)和对照组(西药常规组)。治疗组(糖肾宁组)41例，其中男性21例，女性20例，平均(58.3±12.9)岁，平均病程(7.57±5.2)年。对照组 (西药常规组)38例，其中男性22例，女性16例，平均(58.6±13.3)岁，平均病程(7.21±5.8)年。两组患者在年龄、性别、病程及治疗前血压，尿素氮(BUN)，肌酐(SCr)，24 h尿蛋白等指标经统计学分析差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。另外选择健康体检者37例，其中男性20例,女性17例，平均(57.2±13.2)岁，并均签署知情同意书。

　　1.2 方法

　　试验前2周，所有患者均口服降糖药或联用胰岛素将血糖稳定在12 mmol/L以下。对照组(西药常规组)：替米沙坦((国药准字H20041746，河南天方药业股份有限公司生产)80 mg，1次/d。治疗组(糖肾宁组)在西药基础上加服中药煎剂糖肾宁：黄芪50 g、党参30 g、大黄10 g(后下)、黄连12 g， 黄芩20 g、丹参30 g等，加水700 mL,煎至200～250 mL,每天分2次口服,连续服用8周。全部受试者早晨空腹静脉采血,离心分离血清,30 ℃贮存待测。采用ELISA法检测血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 质量浓度。

　　1.3 观察项目

　　除常规检验指标外,观察两组治疗前、治疗4周，治疗8周后血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 的变化。IL6、TNFα、TGFβ1 试剂盒由深圳晶美公司提供，严格按说明书操作。

　　1.4 统计学处理

　　统计学分析使用SPSS 12.0统计软件，显著性标准为P<0.05，数据用均数±标准差(±s)表示，采用完全随机的两样本均数比较的U检验。

　　2 结果

　　两组治疗前血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1水平均明显高于健康组(P<0.01);随着治疗时间的延长两组血、尿中上述细胞因子水平逐步下降，但治疗组在4周就明显下降，8周后更进一步下降(P<0.01);对照组4周时无明显变化;8周后也下降(P<0.05)，但TGFβ1治疗 4周、8周均无明显变化; 治疗组与对照组同期血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1水平比较，差异有统计学意义(P<0.01)(表1)。表1 各组血、尿IL6、TNFα、TGFβ1水平比较(略)注:与健康组比较,*P<0.01;与本组治疗前比较,**P<0.05，△P<0.01;与对照组同期比较,▲P<0.01。

　　3 讨论

　　叶赏和等.糖肾宁对早期糖尿病肾病细胞因子的影响研究 DN是多种因素综合作用的结果，其病因和发病机制尚未完全阐明，但细胞因子在其中的作用越来越受到重视。大量的体内外研究和人类肾脏疾病研究均证实，TGFβ1 在肾脏组织的表达水平较高，在肾小球硬化和肾小管间质纤维化发生发展中起重要的促进作用[2]。抑制TGFβ1 生成并干扰其作用过程是DN的根本性治疗方法。

　　近年来，国内外学者认为肿瘤坏死因子a(TNFa)是 DN发病机制较为重要的因素之一。提示IL6与TNFα在破坏胰岛素β细胞方面可能存在协同作用。IL6与TNFα都是肾小球系膜细胞分泌的细胞因子,通过自分泌或旁分泌作用,促进系膜细胞和血管内皮细胞增生,细胞外基质(ECM)合成增加,降解减少,导致肾小球硬化。

　　本研究结果表明，两组血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1在治疗前水平明显高于健康组(P<0.01);说明早期DN就存在IL6、TNFα、TGFβ1 的增高，随着治疗时间的延长两组血、尿中上述细胞因子水平逐步下降，但治疗组在4周就明显下降，8周后进一步下降(P<0.01);对照组4周时无明显变化;8周后也下降(P<0.05)，但对照组治疗 4周、8周后TGFβ1均无明显变化;治疗组与对照组同期血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1水平比较，差异有统计学意义(P<0.01)。表明糖肾宁煎剂对血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 有明显的下调作用。我们认为细胞因子浓度的测定对早期DN发病与诊断起一定作用，且对于研究糖尿病的病理，生理及发病机制以及研究细胞因子的临床应用均有重要的参考价值。

　　中医学认为，DN属于中医“消渴”“劳淋”“水肿”等范畴。病机关键为肾元亏虚，毒损肾络，病性为本虚标实。气阴亏虚为本，病位在肾，连及于脾;痰湿、浊毒、淤血等为标实之证[3]。糖肾宁具有扶正化瘀、清热解毒、燥湿祛浊之功。现代药理学认为黄芪多糖(APS)对细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫功能及细胞因子的活性均有调节作用[4]。实验研究表明[57]，黄芪、党参、大黄能显著降低DN大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白及24 h尿微量白蛋白,减轻肾脏组织病理学改变;可抑制肾小球系膜细胞的增殖,降低转化生长因子β1 、葡萄糖转运蛋白1、转化生长因子βⅡ型受体的表达,与直接和间接抑制ECM的积聚有关。

　　丹参等活血化瘀药物能有效地消除肾小球基膜上的免疫复合物,改善微循环,增加肾血流量,降低肾小球毛细血管通透性,并有改善高凝高黏状态,阻止肾小球毛细血管内纤维蛋白或微血栓形成。显著下降24 h尿微量白蛋白排泄率，以达到防治DN的作用。同时具有免疫调节作用、激素样作用、抗氧化等多方面的作用[8,9]。

　　黄连主要成分为小檗碱，有实验表明[10,11]对2型糖尿病大鼠高糖、高脂血症有明显的抑制作用，其在治疗2型糖尿病降血糖的作用机制中除了改善胰岛素抵抗外，还可能兼具促进胰岛素分泌的作用,减轻DM大鼠肾皮质内终末期糖化终产物 (advanced glycation end products, AGEs, AGEs)的积聚及下调糖化终产物特异性受体(AGEspecific cellular receptor, RAGE)mRNA的表达以达到肾保护作用。

　　糖肾宁煎剂对血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 的调节机制尚不十分清楚,可能与多种因素有关:(1)扩张血管，增加肾血流量，降低血小板黏附率，改善微循环，对肾小球基底膜电荷屏障和机械屏障均有保护作用;(2)抑制ECM成分过度表达,防治DN发生及延缓肾小球硬化进展;(3)抑制DN患者IL6、TNFα、TGFβ1 细胞 因子的过度表达，改善肾脏细胞外基质蛋白代谢异常，发挥抗纤维化的作用，有效地保护肾脏;(4)抑制TGFβ1 所引起的系膜细胞葡萄糖摄入的异常增高,延缓肾损伤。本研究中糖肾宁煎剂未能使DN患者血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 水平恢复正常,这可能与DN病程较长以及致病因素复杂有关,还可能与糖肾宁煎剂治疗时间较短有关。糖肾宁煎剂使血、尿中IL6、TNFα、TGFβ1 的下调作用是治疗DN的机制之一。能为临床提供治疗DN建立科学的理论依据。本研究上述指标的检测样本量明显偏小，故中药糖肾宁煎剂的临床作用机制尚待今后进一步大样本的研究。

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