丹芍化纤胶囊治疗糖尿病肾病的实验研究

　　作者：孙笛， 张晓林， 谢汝佳， 杨 婷， 韩 冰， 方 丽， 杨 勤 作者单位：(贵阳医学院 病理生理学教研室， 贵州 贵阳 550004)

　　【摘要】 目的： 观察丹芍化纤胶囊治疗对糖尿病肾病(DN)有无改善作用。方法： 用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠糖尿病模型，每日分别予以依那普利(10 mg/kg)及丹芍化纤胶囊(0.8 g/kg)灌胃治疗，共观察8周。测定各组大鼠血糖、血肌酐、尿肌酐水平及24 h尿蛋白量，光镜下观察大鼠肾组织结构变化。结果： 与正常对照组比较，糖尿病组及两治疗组的血糖、血肌酐、尿肌酐等指标明显改变(P<0.05或P<0.01)。丹芍化纤胶囊治疗组和依那普利治疗组大鼠24 h尿蛋白含量显著低于糖尿病模型组(P<0.05)。HE及PAS染色光镜观察显示糖尿病模型组与两治疗组肾脏组织均有不同程度的肾小球基底膜增厚及纤维化，肾小管上皮细胞水变性和坏死，肾间质纤维组织增生及淋巴细胞浸润等病理改变，但两治疗组肾脏组织的损伤程度明显轻于糖尿病肾病模型组。结论： 丹芍化纤胶囊治疗可减轻糖尿病肾病大鼠尿蛋白的排出量，并对糖尿病肾脏病变有一定的保护作用。

　　【关键词】 糖尿病; 糖尿病肾病; 蛋白尿; 丹芍化纤胶囊

　　An Experimental Study on the Curative Effects of　Danshaohuaxian Capsule on Diabetic Nephropathy of Rats

　　SUN Di， ZHANG Xiaolin， XIE Rujia， YANG Ting， HAN Bing， FANG Li， YANG Qin

　　(Department of Pathophysiology, Guiyang Medical College, Guiyang 550004,Guizhou, China)

　　[Abstract] Objective: To evaluate the effects of Chinese compound preparation, Danshaohuaxian (DSHX) capsule，on diabetic nephropathy (DN) of rats. Methods: Fifty SD male rats were randomly divided into control group (group C), DN group (group DN), Enalaprilt treated group (group E) and DSHX treated group (group DS). DN rat model was prepared by tail vena injection of STZ. Enalaprilt (10 mg·kg-1·d-1) and DSHX (0.8 mg·kg-1·d-1) were given respectively to groups E and DS orally for eight weeks. The level changes of blood glucose (BG), serum and urine creatinine (Scr and Ucr), 24hour urine protein (24h UP) were measured and the kidney pathological changes were observed on HE and PAS stained tissue sections with microscope at the end of experiment. Results: BG, Scr, and Ucr levels in groups DN, E and DS were distinctively different from those in group C(P<0.05 or P<0.01). The excretive quantities of 24 h UP were significantly lower in groups DS and E than that in group DN(P<0.05). But no significant difference of 24 h UP was found between groups DS and E(P>0.05). Different degrees of glomerular basement membrane thickening and fibration, nephric tubule epithelium cell hydrdegeneration and necrosis, renal interstitium fibroplasias, and lymphocyte infiltration were found in kidney tissues of groups DN, E and DS. But renal tissue damage in DN group was severer than those in other two treated groups. Conclusion: DSHX capsule can relieve proteinuria and protect renal tissue of DN rats from lesion.

　　[Key words] diabetes mellitus; diabetic nephropathies; proteinuria; Danshaohuaxian proteinuria

　　糖尿病可由多种途径损害肾脏, 以进行性肾小球硬化和肾小管间质纤维化为特征，称为糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)。其主要临床表现为初期间歇性蛋白尿，以后转为大量持续性蛋白尿，病人常有严重的肾功能损害，最后发展成为肾功能衰竭[1]。由于DN的发病机制尚不清楚，肾小球和肾小管细胞外基质的堆积是DN肾小球硬化和肾间质纤维化发生的中心环节。丹芍化纤胶囊是根据中医活血化淤、通络软坚的理论及多年的临床探索研制而成的中药复方制剂，应用丹芍化纤胶囊治疗DN大鼠，观察丹芍化纤胶囊对大鼠DN有无改善作用。

　　1 材料和方法

　　1.1 试剂

　　复方丹芍化纤胶囊(由丹参、赤芍、黄芪、银杏叶等组成)，贵阳制药厂生产，临用前取胶囊内容物研磨成粉末，用蒸馏水制成所需浓度混悬液;马来酸依那普利片(依苏)，扬子江药业集团生产;链脲佐菌素(STZ)购自Sigma 公司;葡萄糖试剂盒购自上海复星长征医学科学有限公司;肌酐试剂盒购自北京迈克公司和上海科华东菱诊断用品有限公司;尿蛋白检测试剂盒和考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒购自南京建成公司。

　　1.2 动物分组及动物模型复制

　　将雄性SD大鼠50只随机分为4组: 正常对照组、糖尿病肾病组、依那普利药物治疗组、丹芍化纤药物治疗组。除正常对照组外，其余各组大鼠按55 mg/kg的剂量单次尾静脉注射STZ,正常对照组大鼠则给等量柠檬酸缓冲液尾静脉注射。48 h后尾静脉采血测血糖值，血糖连续3 d≥16.7 mmol/L者确定为糖尿病模型大鼠。 4周后治疗组分别给予依那普利(10 mg·kg-1·d-1)和丹芍化纤(0.8 mg·kg-1·d-1) 灌胃，糖尿病肾病组则每天给予等量生理盐水灌胃，继续观察8周。

　　1.3 观察指标及方法

　　1.3.1 尿、血采集及生化检测 于治疗后第8周末称各组大鼠体重，代谢笼收集记录24 h尿量，以考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白含量。股动脉穿刺取血,分离血清，用雅培2000型全自动生化仪检测血尿肌酐含量。血糖以葡萄糖氧化酶法检测。

　　1.3.2 肾脏病理组织学检查 杀鼠取肾,称肾重，用4%中性甲醛固定,常规石蜡包埋，组织切片，行HE和PAS染色，在光镜下观察肾小球、肾小管和肾间质的病理变化。

　　1.4 统计学处理

　　实验数据以x±s 表示,用SPSS 统计软件(11.0版) 进行组间方差分析,P<0.05表示有显著性差异。

　　2 结果

　　2.1 各组大鼠血糖、血肌酐、尿肌酐、24 h尿蛋白水平比较

　　在造模及治疗过程中有部分动物血糖不稳定或由于灌胃意外死亡，实验结束后检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿肌酐、24 h尿蛋白水平，结果见表1。由表1可见，糖尿病肾病组和两治疗组大鼠的血糖均明显高于正常对照组，差异有显著性(P<0.05);血肌酐较正常对照组明显升高(P<0.01)，尿肌酐较正常对照组明显降低(P<0.05)，但治疗组与糖尿病肾病组间上述指标差异无显著性(P>0.05)。糖尿病肾病组和两治疗组大鼠24 h尿蛋白排出量均显著高于正常对照组(P<0.01)，经丹芍化纤及依那普利治疗8周后，24 h尿蛋白排出量与糖尿病肾病组比较明显下降(P<0.05)。24 h尿蛋白水平在丹芍化纤治疗组与依那普利治疗组之间差异无显著性。贵阳医学院学报 34卷 4期孙 笛等 丹芍化纤胶囊治疗糖尿病肾病的实验研究表1 治疗8周后各组大鼠的血糖浓度、血肌酐、尿肌酐、尿蛋白水平(1)与正常对照组比较,P<0.01;(2)与正常对照组比较,P<0.05;(3)与糖尿病肾病组比较,P<0.05

　　2.2 各组大鼠肾脏的病理形态改变

　　HE及PAS染色光镜下观察可见正常对照组大鼠肾脏组织学结构正常，肾小球、肾小管和肾间质未见明显异常的病理形态学改变。糖尿病模型组大鼠肾小球基底膜明显增厚，大多数肾小球出现纤维化;肾小管上皮细胞出现明显水变性，甚至坏死脱落;肾间质可见较多炎性细胞浸润，纤维组织增生，肾脏血管未见显著病变。经丹芍化纤和依那普利药物治疗的大鼠的肾脏仍有上述病理形态学改变，但病变程度较糖尿病肾病组明显减轻，在局部可见肾小球基底膜增厚，个别肾小球纤维化;肾小管上皮细胞仍有轻度水变性，肾间质炎症细胞浸润也较模型组明显减少，肾脏血管未见异常。但在依那普利治疗组与丹芍化纤胶囊治疗组之间肾脏病理改变相似，差异无显著性。各组大鼠肾脏的病理形态改变见图1。

　　3 讨论

　　糖尿病(diabetes mellitus,DM)的患病率逐年增加，已成为威胁人类健康的重要疾病。DN是糖尿病严重的微血管并发症，以其发病率高、病情重、进展快而成为DM致死、致残的重要原因。DN在病理上主要表现为早期肾小球体积增大、系膜细胞肥大、肾小球和肾小管间质的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)进行性聚积，晚期以弥漫性或结节性肾小球硬化和肾间质纤维化为特征[2，3]。如何有效的减少细胞外基质的聚积，将成为DN防治的一条有效的途径[4]。

　　目前国内已有丹参注射液、黄芪注射液、川芎嗪注射液等中成药改善DN尿蛋白、保护肾脏组织和延缓糖尿病肾病发展的报道[5，6]。丹芍化纤胶囊是根据中医理论及多年的临床探索研制而成的中药复方制剂，主要由丹参、赤芍、黄芪、银杏叶等药材组成。以往的基础及临床研究表明该药对肝纤维化有明显的防治作用[7] 。在本实验中发现，应用丹芍化纤治疗DN大鼠8周后，大鼠血糖、血肌酐、尿肌酐与DN组大鼠比较没有明显改善，但尿蛋白排泄量明显降低，且降低程度与依那普利治疗组接近。病理学观察进一步发现丹芍化纤胶囊治疗组大鼠肾脏组织的病变程度较糖尿病肾病组有明显减轻，表现在仅少数肾小球出现轻度纤维化，肾小管上皮细胞水变性、肾间质纤维组织增生及炎性细胞浸润，且这些病变的范围及程度都较糖尿病肾病组轻，这一结果提示丹芍化纤复方中药可能通过某种机制对DN肾脏组织损伤有一定的保护作用，从而减少了大鼠的尿蛋白的排泄。但对其它方面功能，如血糖、血肌酐水平等并未发现有明显改善作用。关于丹芍化纤胶囊减少尿蛋白的排泄、保护肾组织结构损伤的作用机制尚待进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1]史轶蘩.糖尿病慢性并发症[M].北京:科学出版社,1999:1349-1351.

　　[2]李慎军,张忠辉.糖尿病肾病基底膜成分的改变[J].国外医学内分泌学分册,2000 (3)：132-135.

　　[3]杨丽.尿蛋白成分与肾脏纤维化关系研究[J].国际泌尿系统杂志,2006(4)：526-529.

　　[4]成意伟.糖尿病肾病的中医研究进展[J].中华实用中西医杂志,2005(20)：1330-1331.

　　[5]孙艳萍,陈金和,陈贤钧,等.丹参对大鼠肾脏近曲小管超微结构保护机制的研究[J].中国中西医结合肾病杂志,2003(3)：145-147.

　　[6]徐英影,马志红,刘建华,等.黄芪注射液对糖尿病肾病微量蛋白尿的影响[J].医学临床研究,2005(1)：118-120.

　　[7]杨勤，耿小霞，谢汝佳,等.丹芍化纤胶囊治疗大鼠肝纤维化后肝星状细胞凋亡及细胞周期的变化[J].中国病理生理杂志,2005(5)：975-979.