一解合方对更年期抑郁症大鼠中枢单胺类神经递质及生殖内分泌的影响

一解合方对更年期抑郁症大鼠中枢单胺类神经递质及生殖内分泌的影响作者：刘艳玲，宋卓敏    作者单位：天津中医药大学，天津 300193    【摘要】  目的：研究一解合方对更年期抑郁症模型大鼠单胺类神经递质及生殖内分泌的干预作用，探讨其作用机制。方法：将Wistar雌性大鼠35只随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组，采用卵巢切除与长期慢性不可预见应激法相结合，建立更年期抑郁症动物模型。中药组予一解合方，西药组予苯甲酸雌二醇和百优解。测定行为学评分、糖水消耗量、24 h摄食量、神经递质(5HT、5HIAA)及生殖内分泌激素(GnRH、E2、FSH、LH)水平，比较4组的变化情况。结果：与模型组比较，中药组的行为学评分、糖水消耗量和24 h摄食量均显著增加，内分泌激素E2、FSH、LH、GnRH的紊乱显著改善，同时下丘脑5HT、5HIAA含量明显升高（P＜0.05）。结论：一解合方是通过有效调节更年期抑郁症大鼠内分泌激素水平，进而升高下丘脑单胺类神经递质5HT、5HIAA而达治疗目的。    【关键词】  更年期抑郁症;单胺类神经递质;生殖内分泌;一解合方;大鼠　　更年期抑郁症是指首次发病于更年期，以情绪抑郁、焦虑、紧张为主要症状的症候群，其发病率约占更年期人群的5.8%［1］,占更年期综合征的78%［2］。随着世界人口的逐步老龄化，女性知识文化水平的提高，社会活动的增多，其发病率呈逐年上升趋势［3］,因此寻找一种切实有效又能被患者接受的药物刻不容缓。一解合方是导师宋卓敏教授在临床长期用之有效的验方，本实验观察该方对更年期抑郁症模型大鼠单胺类神经递质及生殖内分泌的影响，探讨其作用机制。1  材料与方法　　1.1  材料　　1.1.1  动物与分组 　　健康3～5月龄Wistar雌性大鼠，体重(210±20) g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供。选取OpenField评分相近的大鼠35只，按随机数字表法分为:假手术组(A)8只，模型组(B)9只，中药组(C)9只，西药组(D)9只。　　1.1.2  药物 　　一解合方干浸膏由熟地黄、北沙参、麦门冬、厚朴、陈皮、半夏、茯神、石菖蒲、郁金等组成，由天津中医药大学研究中心制剂室提供，与生药比例为1∶2。百优解：20mg/粒(以氟西汀计),Eli Lilly and Company Limited生产，批号：A140885。苯甲酸雌二醇注射液，1 mg/mL，天津金耀氨基酸有限公司生产，批号：0505111。硫酸庆大霉素注射液,8万 u/2 mL。　　1.1.3  仪器与试剂 　　JJ2000型精密电子天平(常熟双杰测试仪器厂)，自制大鼠夹尾瓶、冷热水刺激箱、大鼠黑白颠倒箱、电刺激仪、敞箱，GC911γ放射免疫计数器(中国科技大学实业总公司)，Waters　600　E高效液相色谱仪(Water公司)，色谱柱(三维色谱公司)，E2、LH、FSH放射免疫分析药盒(北京北方生物技术研究所)，GnRH放免药盒(北京华英生物技术研究所)。　　1.2  方法　　1.2.1  造模 　　(1)卵巢摘除术：将B、C、D 3组大鼠，行卵巢摘除术，A组也予开腹，但仅摘取卵巢旁少许脂肪组织。术后连续5 d，每日1次腹腔注射庆大霉素(2 mL/kg)以防感染。　　(2)慢性不可预见性应激：依据文献报道［4］适当改良。除A组外，其余各组均孤养合并21 d各种不同的刺激，包括电击足底、冰水游泳、热应激、摇晃、夹尾、禁水、禁食和昼夜颠倒等，1种/d。　　(3)阴道上皮角化试验：卵巢摘除术后7 d行阴道上皮角化试验。左手背位固定大鼠，右手持吸管，其内预先吸有生理盐水0.1～0.2 mL。轻轻插入大鼠阴道内0.5～1.0 cm，抽吸2～3次，滴1滴吸液于载玻片上。干后以5%美蓝溶液染色，置显微镜下进行细胞学检查。连续5 d阴道监测未见动情周期为去势成功。　　1.2.2  给药方法 　　应激开始同步给药21 d。A组、B组:给予蒸馏水(按体重计10 mL/kg)，灌胃，1次/d；C组:给予一解合方浸膏，灌胃(8 g/kg相当于生药16 g/kg),1次/d；D组:给予百优解混悬液，灌胃(4 mg/kg)，1次/d，同时苯甲酸雌二醇注射液，肌注(0.2 mg/kg)，隔日1次。　　1.3  指标检测和方法　　1.3.1  行为学测定(OpenField法) 　　本实验采用敞箱为立柱体，高为40 cm，长宽各为80 cm，周壁为黑色，底面由面积相等的25块组成。以动物穿越地面块数为水平活动得分(crossing)，动物穿越1格为1次，如动物沿线行走，以每10 cm为1次。以直立次数为垂直活动得分(rearing)，动物双足离开底面为标志，无论动物站立多久直至放下双足为1次活动。在实验的第1、7、14、21 d分别进行测定。每只动物进行1次，3 min/次。　　1.3.2  糖水消耗实验 　　刺激第19 d，所有动物均单笼饲养，每只动物给予1％蔗糖溶液150 mL，同时禁食24 h，记录24 h饮用1％蔗糖溶液的量。　　1.3.3  摄食量测定 　　刺激第20 d，所有动物均单笼饲养，供应量(g)减去24 h后剩余量(g)即为摄食量。　　1.3.4  5HT、5HIAA测定 　　应激结束后24 h内，将各组大鼠腹主动脉取血后，迅速断头，开颅取脑，置冰盘上操作，竹刀分离出下丘脑，电子天平称重，锡纸包裹，储存于低温冰箱(-80℃)保存，采用高效液相色谱-电化学检测法测定，严格按照要求操作。　　1.3.5  GnRH、E2、FSH、LH测定 　　末次给药24 h内，取各组大鼠动脉血2 mL，置普通试管内，于4℃静置凝固后，低温离心，分离血清、血浆，-20℃保存，采用放射免疫分析法(RIA)，按照试剂盒要求操作。　　1.4  数据处理 　　实验数据采用(±s)表示，用SPSS 11.5统计软件处理，多组均数比较采用方差分析。2  结果　　2.1  各组大鼠OpenField评分结果比较 　　见表1。表1  各组大鼠OpenField评分结果比较（略）注：与B组比较▲P＜0.05，▲▲P＜0.01（下同）　　2.2  各组大鼠糖水消耗量、24 h摄取量比较 　　见表2。表2  各组大鼠糖水消耗量、24 h摄食量比较(略)　　2.3  各组大鼠下丘脑5HT、5HIAA含量比较 　　见表3。表3  各组大鼠下丘脑5HT、5HIAA含量比较(略)　　2.4  各组大鼠内分泌激素含量比较 　　见表4。表4  各组大鼠内分泌激素含量比较(略)3  小结　　本研究显示，一解合方能够明显上调更年期抑郁症模型大鼠的E2水平，下调FSH、LH、GnRH水平，进而升高下丘脑5HT、5HIAA含量，显著增加更年期抑郁症模型大鼠的行为学评分、糖水消耗量和24 h摄食量。初步证明一解合方治疗本病是通过有效调节更年期抑郁症患者内分泌激素水平而达治疗目的。至于期间的信号转导通路以及一解合方中各组成中药的有效成分及其作用靶点是我们今后研究的方向。【参考文献】　　［1］何敏慧,冯永林,王政科.城市社区更年期居民抑郁、焦虑状况及影响因素［J］.中华精神科杂志,1999,4(32):2223.　　［2］卫生部继续医学教育委员会编.女性生殖内分泌性激素补充疗法［M］.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1999:36.　　［3］Meston　CM,Frohlich　PF［J］.Arch　Gen　Psychiatry,2000,57:1 0121 030.　　［4］董 莉,归绥琪,孟 炜.实验性更年期抑郁症动物模型的建立和评价［J］.中国临床康复,2004,8(27):5 8715 872.