参桂活血汤对急性心肌梗死大鼠神经内分泌因子的影响

参桂活血汤对急性心肌梗死大鼠神经内分泌因子的影响作者：任炜 崔峰 王欣叶 雷慧    作者单位：075000 河北省张家口市，张家口教育学院(任炜、雷慧);河北北方学院附属第一医院(崔峰、王欣叶)     【摘要】  目的 探讨参桂活血汤对急性心肌梗死(AMI)大鼠神经内分泌因子的影响。方法 通过结扎冠状动脉前降支建立AMI模型大鼠，AMI后24 h存活的36只大鼠随机分为：对照组、模型组和治疗组，每组12只。治疗组每日用参桂活血汤灌胃1次，治疗2周，对照组和模型组灌胃等量的0.9%氯化钠溶液。测量各组神经内分泌因子：去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肿瘤坏死因子α(TNTα)、白介素6(IL6)、细胞可溶性凋亡因子(sFas)。结果 与对照组比较，模型组NE、AngⅡ、TNTα、IL6、sFas含量明显增高(P<0.01);与模型组比较，治疗组NE、AngⅡ、TNTα、IL6、sFas含量降低(P<0.01)。结论 心肌梗死后，NE、AngⅡ、TNTα、IL6、sFas含量明显增高;参桂活血汤有降低NE、AngⅡ、TNTα、TNTα、IL6、sFas含量，增强心肌收缩力、改善心血管生理的作用。     【关键词】  参桂活血汤;急性心肌梗死;神经内分泌因子     Effects of Shenguihuoxue decoction on neuroendocrine factor in the acute myocardial infarction in rats REN Wei*，CUI Feng，WANG Xinye，et al.*Zhangjiakou Education Chllage,Hebei, Zhangjiakou 075000, China　　【Abstract】 Objective To evaluate the effects of Shenguihuoxue decoction on neuroendocrine factor in the acute myocardial infarction (AMI) in rats. Methods AMI models were established by ligation of the anterior descending coronary artery in male SD rats. 24 hours after the procedure,the 36 surviving rats were randomly divided into control group，model group and experiment group. The neuroendocrine factor was detected. Results As compared with that of control group,the neuroendocrine factor was significantly increased in AMI group after two weeks(P<0.05);as compared with that in model group,the neuroendocrine factor was decreased significantly in AMI group after two weeks(P<0.01). Conclusion After AMI，the contents of NE，AngⅡ，TNTα，IL6 and sFas areobviously increase，while Shenguihuoxuedecoction can reduce the contents of NE，AngⅡ，TNTα，TNTα，IL6 and sFas，and can enhance myocardial contractive power and improve cardiovascular physiological effects.　　【Key words】 Shenguihuoxue decoction; acute myocardial infarction; neuroendocrine factor　　参桂活血汤由桂枝、人参、制附子、荜茇、川芎、细辛等组成，具有温补温通功效[1]。但关于参桂活血汤在急性心肌梗死后对神经内分泌系统影响的研究较少，尤其对心肌梗死后早期神经分泌因子含量的影响。因此本实验着重研究参桂活血汤心肌梗死后早期去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肿瘤坏死子因α(TNTα)、白介素6(IL6)、细胞可溶性凋亡因子(sFas)含量的影响特点，探讨参桂活血汤改善心肌梗死的机制，为其更广泛深入的临床应用提供科学的实验依据。1 材料与方法　　1.1 实验动物 健康雄性10～12周龄SD大鼠50只，体重250～280 g，由中国科学院动物研究所维通利华实验动物中心提供。　　1.2 方法　　1.2.1 动物模型建立：按照Olivetti等[2-4]方法稍加改良，结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)建立AMI模型：SD大鼠用0.07 ml/kg氨基甲酸乙酯溶液麻醉后，固定于鼠板。手术部位脱毛，碘酒、乙醇消毒，沿左侧胸骨旁斜行切口，上界为两前肢后缘连线，下界为第5肋间，依次切开皮肤、浅筋膜和深筋膜，并用止血钳钝性分离胸大肌和前锯肌交界处，在靠胸骨缘处用止血钳钝性分离第3、4肋间进胸，打开胸腔，剪开心包膜，挤压出心脏，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到冠状动脉，在动脉起始点下方2～3 mm处，用60号丝线结扎冠状动脉，迅速将心脏放回胸腔，逐层缝合肌肉和皮肤，局部消毒抗菌。术中肉眼观察，结扎冠状动脉左前支后，其血液供应区心脏表面颜色由红变为灰白，青紫。手术前后均记录体表心电图，以Ⅱ导联ST段弓背向上抬高0.2 mV以上为结扎成功的标志。参照AMIlavetz方法[5]，选择符合标准者进入实验。另设对照组，不结扎冠状动脉，其余操作同AMI模型组动物。术后给予青霉素4万U，肌内注射，1次/d，共3 d。动物醒后按常规饲养。　　1.2.2 分组及给药方案：术后24 h存活的36只心肌梗死大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，每组12只。治疗组每日用参桂活血汤灌胃1次，给药量是依据人正常用量的5倍量[6]，治疗2周，对照组和模型组灌胃等量的0.9%氯化钠溶液。　　1.2.3 标本采集与测定：①采集标本，实验前禁食>12 h，腹主动脉取血2 ml，迅速注入低温抗凝的试管中(含0.30 mol/L的EDTA·Na2、0.34 mol/L的8羟基喹啉和0.32 mol/L的二巯基丙醇各20 μl)，摇匀，3 000 r/min离心5 min，分离血浆，-20 ℃保存待测。②参数测定,采用荧光法测定血浆NE、放射免疫分析法测定AngⅡ及酶联免疫分析法(试剂盒购自北京北方生物制品公司)测定TNTα、IL6、sFas浓度。　　1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果　　2.1 实验动物一般情况 AMI模型组大鼠均出现进食量减少，精神状况差，活动减少，口鼻及肢体远端发绀，1周时一般情况稍有好转，但仍不及对照组和治疗组，取材时体重均明显降低。实验过程中，所有因手术、麻醉意外等原因死亡的，以及术后存活时间未达取材时间要求的动物，均不列入实验观察项目内。最终获得完整实验资料的大鼠23只，其中对照组8只，模型组6只，治疗组9只。　　2.2 参桂活血汤对心肌梗死后大鼠神经内分泌因子的影响 心肌梗死后，模型组血浆中NE、AngⅡ、TNTα、IL6、sFas的含量明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01);参桂活血汤能降低血浆中NE、AngⅡ、TNTα、IL6、sFas的含量，与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01)见表1。表1 3组大鼠神经内分泌因子比较3 讨论　　心肌梗死后血流动力学和神经内分泌发生了变化，循环和局部肾素-血管紧张素系统(RAS)的激活在左心室重塑的发生发展中起重要作用已为人们所共识[3]。局部RAS的激活，产生大量的RA、AngⅡ，在急性期可能对血流动力学的稳定和心脏功能的改善起到代偿作用。病理情况下AngⅡ的增加使交感神经活性增高，副交感神经活性降低，血管张力升高，心肌氧耗增加，醛固酮分泌增多，导致水钠潴留，循环血量增加，增加心肌间质，改变Ⅰ、Ⅲ型胶原成分，诱导心肌细胞、血管平滑肌细胞凋亡、心脏重塑，使心脏收缩及舒张功能减退[5]。NE过度升高导致心脏负荷增加，心肌耗氧增加，心律失常阈值降低。AMI时血液NE水平升高，最初是代偿机制，能增加心肌收缩力，加快心率，收缩外周血管，增加心排量。随着疾病发展，有益的代偿机制渐成损害心肌、降低心肌收缩力的因素，并促进心肌细胞凋亡，心肌重塑[6]，导致预后不良[7]。AngⅡ增强TNTα的作用，并诱导IL6生成，IL6在慢性心衰患者血液循环及心肌中表达均增加，血液循环中IL6水平与AMI严重程度密切相关。IL6还能通过其受体耦联蛋白gp130导致心肌肥厚，并降低心肌收缩力。TNTα促进心肌细胞凋亡，心肌成纤维细胞增殖，损伤血管内皮细胞，引起广泛的凝血机制异常，及心肌收缩功能下降，降低外周血管弹性，加重心肌重塑[8，9]，心功能恶化[10]，故抑制TNTα可改善心功能。心肌细胞凋亡导致的心肌细胞减少可能是心功能恶化的重要机制之一。sFas和可溶性细胞凋亡天然配体(sFasL)分别作为细胞凋亡抑制因子和诱导因子，在AMI血浆中的水平较之正常人均明显升高，并且随着心功能的恶化更明显增加，细胞凋亡可能是抑制因子和诱导因子在高水平上失衡所致[11]。　　本研究提示，神经内分泌因子能够很好地反应心脏的功能状态，循环血液中NE、AngⅡ、TNTα、IL6、sFasL水平升高既是疾病的表现，也是疾病发生、发展及决定预后的重要因素。　　本实验显示，在AMI后AngⅡ明显升高，表明循环中的RAS被激活，从而引起TNTα、IL6、sFasL水平升高，参桂活血汤可明显降低这些神经因子的含量。研究发现中药可显著降低AngⅡ的表达。平肝益气、活血祛痰(牛膝、北芪、丹参、瓜蒌)能降低高血压大鼠心肌局部AngⅡ含量[12]。中药影响心肌局部AngⅡ的水平为中药影响重塑提供了强有力的理论支持。【参考文献】　1 王莎萍.参桂活血汤.新中医，2006，38:24.　2 Neri Serneri GG,Boddi M,Poggesi L,et al.Activation of cardiac renin angiotensinsystem in unstable angina.J Am Coll Cardiol,2001,38:4955.　3 刘剑刚,史大卓,汪晓芳,等.愈心梗液对大鼠急性心肌梗死后早期心室重构的影响.中国中西医结合急救杂志,2001,8:7678.　4 Wollert KC,Drexler H.The reninangiotensin system and experimental heart failure.Cardiovasc Res,1999,43:838849.　5 王会艳,王潞潞,王爽.神经内分泌因子在扩张型心肌病心室重构及心力衰竭中的表达.心血管康复医学杂志,2008,17:2325.　6 Cohn JN,Levine TB,Olivari MT,et al.Plasma norepinephineas a guide to prognosis in patients with chronic congestive heartfailure.N Eng J Med,1984,311:819823.　7 Singh K,Communal C,Sawyer DB,et al.Adrenergic regulation of myocardial apoptosis.Cardiovasc Res,2000,45:713719.　8 龚兰生,施仲伟,于金德主编.充血性心力衰竭.第1版.上海:上海科学技术出版社,2002.4647.　9 侯振江.细胞因子在充血性心力衰竭诊疗中的应用.心血管康复医学杂志,2004,13:193195.  10 张家明,王朝晖,李大强,等.心力衰竭患者氧化低密度脂蛋白和细胞因子的变化及其相关性.心血管康复医学杂志,2004,13:207209.　11 Kawakami H,Shigemmatsu Y,Ohtsuka T,et al.Increased circulating soluble form of Fas in patients with dilated cardiomyopathy.J pn Cire,1998,62:873876.　12 邓中炎,严灿,潘毅,等.平肝益气·活血祛痰法逆转自发性高血压大鼠左心室重构的实验研究.中国中医药科技,2001,8:106107.