非小细胞肺癌神经内分泌分化的检测及意义
发表时间：2009-12-22 浏览次数：627次
非小细胞肺癌神经内分泌分化的检测及意义作者：余少平,熊永炎,田素芳,张 伟 作者单位：430071武汉大学中南医院病理科 【摘要】 目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）的神经内分泌（NE）分化状况、免疫组化检测指标及其意义。方法 采用SP免疫组化法检测113例NSCLC中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素（SYN）和嗜铬素A（CgA）的表达。结果 NSCLC中NSE、SYN、CgA的阳性率分别为53.10%、26.55%、6.19%，NSE与SYN联合检测，其阳性率为21.24%。3种NE标记物在不同组织学类型NSCLC中的表达无显著性差异。SYN阳性率随肿瘤分化程度降低而增高。NSE与SYN、SYN与CgA表达之间显著相关。结论 NSCLC的NE分化与组织学类型无关，与分化程度有关。NSE和SYN联用是判断NE分化的较好指标。 【关键词】 肺肿瘤；神经内分泌；免疫组织化学 Detection and its significance of the neuroendcrine differentiation in non|small cell lung carcinoma YU SHao|ping, XIONG Yong|yan, TIAN Su|fang,et al Department of Pathology, Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan 430071,China Abstract: Objective To study differentiation of neuroendocrine（NE）in non|small cell lung carcinoma （NSCLC）and its immunohistochemical markers and their significance.Methods NSCLC from 113 patients were analyzed immunohistochemically with antibodies to neuro|specific enolase（NSE），synaptophysin（SYN）and chromogranin，（CgA）.Results The following percentages of cases were positive for each marker: NSE, 53.10%; SYN, 26.55%; CgA, 6.19%; NSE and SYN, 21.24%. There was no relationship between the expression of three markers and the type of lung carcinoma. SYN's expression significantly increased with decrease of the differentiated degree of carcinoma. The expressions were significantly related between NSE and SYN, SYN and CgA. Conclusion There is no significant relationship between the express of NE markers and the type of NSCLC but the differentiated degree of carcinoma. The combined use of NSE and SYN may be recommended to detect NE differentiation of NSCLC. Key wards:Lung carcinoma；Neuroendocrine；Immunohistochemistry 多数研究证实部分非小细胞肺癌（NSCLC）伴有神经内分泌（neuroendocrine，NE）分化。过去人们将此类肺癌称为“肺不典型内分泌肿瘤”等[1]。1999年WHO将这种类型的肺癌归于II类肺NE肿瘤。人们发现，这类肺癌的生物学行为介于NSCLC与小细胞肺癌（SCLC）之间，较易转移，对放化疗敏感，预后差[2]。因而检测NSCLC是否具有NE分化对其治疗及预后判断有重要意义。本实验采用SP免疫组化法，对113例NSCLC中不同NE标记物的表达进行了检测，旨在探讨NE分化与NSCLC临床病理因素的关系，寻找检测NSCLC中NE分化免疫组化标记物的最佳组合。1 资料与方法 1.1 资料来源 收集武汉大学中南医院病理科1996～2000年间手术切除并经病理确诊的NSCLC共113例。男性91例，女性22例。年龄34～77岁，均龄为55.81岁。其中鳞癌39例（高、中、低分化分别为10、15、14例），腺癌45例（高、中、低分化分别为17、19、9例），细支气管肺泡癌16例，腺鳞癌13例。 1.2 方法 即用型鼠抗人神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素（synaptophysin，SYN）和嗜铬素A（chromogranin，CgA）单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒均购于福州迈新生物技术公司。SP免疫组化染色按试剂盒说明书操作，SYN采用柠檬酸微波抗原修复，NSE和CgA未作特殊预处理。用正常胰腺组织作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。结果判断：肿瘤细胞胞浆内有明确的棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞≤5%者为阴性，>5%者为阳性。 1.3 统计学处理 SPSS统计软件分析数据，结果采用χ2检验及四格表精确概率法。P<0.05为显著性检验水准。2 结果 2.1 NSCLC中NE标记的表达特征 113例NSCLC中NSE阳性60例（53.10％），SYN为30例（26.55%），CgA为7例（6.19%）。NSE呈弥散性着色，且部分间质及正常支气管粘膜有非特异性染色。SYN多呈弥散性着色，背景干净。CgA多为灶性着色，棕黄色颗粒常聚集于核膜周围胞浆。 2.2 不同临床病理类型NSCLC中NE标记的表达 不同组织学类型NSCLC中NE标记表达的情况见表1。NSE和SYN的阳性率在腺鳞癌中最高，CgA在细支气管肺泡癌中最高，但3种NE标记物在不同组织学类型间的表达均无显著性差异。不同分化程度的鳞癌及腺癌中NE标记物表达的状况见表2。NSE在中等分化程度的NSCLC中阳性率最高，CgA则在高分化NSCLC中阳性率最高，但两者在各组间的表达无显著性差异。SYN随分化程度的降低阳性率逐渐增高，且差异具有显著性（χ2＝9.127，P<0.05）。经两两比较，发现其在高分化与低分化之间的表达有显著性差异（χ2＝8.847，P<0.05）。NSE与SYN共阳性的病例也存在上述类似的差异（χ2＝7.873，P<0.05；χ2＝7.996，P<0.05）。 2.3 不同NE标记表达之间的相关性 113例NSCLC中至少有1种NE标记表达为67例，至少有2种标记表达有24例，三种标记物均为阳性仅有6例。从三种标记表达的关系上看，NSE与SYN共表达占24例（21.24%），NSE与CgA共表达6例(5.31%)，SYN与CgA共阳性亦为6例(5.31%)。经统计学处理，NSE与SYN（χ2＝11.870，P<0.05）、SYN与CgA（P＝0.001）的表达有相关性，NSE与CgA无显著相关性（P＝0.118）；NSE与SYN（χ2＝21.429，P<0.05）、SYN与CgA（χ2＝19.360，P<0.05）、NSE与CgA（χ2＝51.073，P<0.05）的表达之间有显著差异。表1 不同组织学类型NSCLC中NE标记物阳性数表2 不同分化程度的鳞癌、腺癌中NE标记物阳性数3 讨论 NSCLC具有明显的异质性，不仅具有鳞状分化、腺样分化，还可出现与SCLC及类癌相似的NE分化。从肺癌的NE分化特征来看，各型肺癌可能均起源于具有多向分化潜能的支气管上皮干细胞。因而，它们的生物学行为也可出现明显的重叠。这些伴NE分化的肺癌在多种生物学行为上与其它NSCLC有很大的差别，具有类似SCLC的生物学特性，即病程进展快、转移早、对化疗敏感、预后差等特点[2,3]。因此，在病理诊断上有必要将这部分NSCLC独立出来。 国内外学者多用免疫组化和/或电镜技术检测NSCLC的NE分化，阳性率大约为10%～35％[2|8]。NE分化的标志物有2种：免疫组化标记物和电子致密核芯颗粒（NE颗粒）。前者可经免疫组化方法检测，已在日常病检工作中广泛应用；后者需在电镜下观察，但在NE分化的判断上更为可靠。根据WHO1999年制订的肺癌分类标准，在电镜下发现NE颗粒或者NSE及另一种或多种NE标记物阳性，均可视为具有NE分化。关于NSCLC伴NE分化的检出率文献报道中差异较大，其诊断标准也存在争议。NE免疫组化标记物较多，目前常用的有NSE、SYN、神经细胞粘附分子（NCAM）、leu|7、S|100、CgA等，但各自的敏感性及特异性均不相同。根据文献报道，NSE、S|100、leu|7的敏感性较好，而SYN、NCAM、CgA的特异性较强[2|5]。所以，寻找检测NE分化的免疫组化标记物最佳组合是目前肺癌研究的热点之一。本实验选用最常用的3种NE标记物，得出NSE、SYN、CgA的阳性率分别为52.21%、26.55%、7.08%，与多数研究的结果相似。在我们的实验中，有67例至少有一种NE标记阳性，至少有2种标记物为阳性的只有24例，而3种标记物均为阳性者仅有6例。而且NSE与SYN、SYN与CgA表达之间既存在相关性，亦有显著的差别。表明任何一种NE标记都不是诊断NE分化的完美指标。由本实验可看出CgA的阳性率过低，且在CgA阳性表达的7例中有6例SYN亦为阳性，可见CgA能识别的NE分化，SYN几乎也可识别，而SYN的敏感性却较CgA高。因此，我们认为在二者中选择SYN是比较适宜的。NSE敏感性较高，WHO已将其作为判断NE分化的一种必要标记物。我们认为，在此基础上选择特异性较强的SYN与之搭配，是检测NE分化的较佳组合。本实验发现，将NSE与SYN共阳性作为诊断NE分化的标准时，得出的阳性率为21.24％，同至少有2种标记物为阳性者完全符合，其表达与NSCLC的组织学类型无关，且随肿瘤分化程度的降低而增高。上述结果与大部分文献报道一致[2|8]。综上所述，我们认为NSE与SYN的联合应用是判定NSCLC具有NE分化的较可靠指标。【参考文献】 [1] Dunnill MS, Gatter KC. Cellular Heteregeneity in Lung Cancer [J]. Histopathol, 1986,10(5): 461|475. [2] Schleusener JT, Tazelaar HD, Jung SH, et al. Neuroendocrine Differentiation is an Independent Prognostic Factor in Chemotherapy|treated Non|Small Cell Lung Carcinoma [J]. Cancer, 1996,77(7):1284|1291. [3] 欧阳能太，陈国勤，丁静,等.非小细胞肺癌神经内分泌表达的检测及其临床意义[J].中华结核与呼吸杂志，2001，24（2）：90|92. [4] Sundaresan V, Reeve JG, Stenning S, et al. Neuroendocrine Differentiation and Clinical Behaviour in Non|Small Cell Lung Tumours [J]. Br J Cancer, 1991, 64(2):333|338. [5] Graziano SL , Tatum AH, Newman NB, et al. The Prognistic Significance of Neuroendocrine Markers and Carcinoembryonic Antigen in Patients with Resected Stage I and II Non|Small Cell Lung Carcinoma [J]. Cancer Res, 1994, 54(11): 2908|2913. [6] Abbona G, Papotti M ,Viberti L, et al. Chromogranin A Gene Expression in Non|Small Cell Lung Carcinomas [J]. J Pathol, 1998,186(2): 151|156. [7] Loy TS, Darkow GVD, Quesenberry JT. Immunostaining in the Diagnosis of Palmonary NeuroendocrineCarcinomas. An Immunohistochemical Study with Ultrastructural correlations [J]. Am J Surg Pathol, 1995, 19(2): 173|182. [8] Travis WD, Linnoila RI, Tsokos MG, et al. Neuroendocrine Tumors of the Lung with Proposed Criteria for Large|cell Neuroendocrine Carcinoma. An Ultrastructural, Immunohistochemical and Flow Cytometric Study of 35 Case [J]. Am J Surg Pathol, 1991, 15(6): 529|553.
