2型糖尿病患者尿血管内皮生长因子的检测及临床意义

作者            作者单位

史庆元　　辽宁省抚顺市中医院

Detection of urinary vascular endothelial growth factor and its clinical significance in type 2 diabetes mellitus

SHI Qing-yuan

Fushun Hospital of Traditional Chinese Medicine，Fushun 113000，China

Abstract: ObjectiveTo study the changes of urinary vascular endothelial growth factor (UVEGF) excretion and its clinical significance in type 2 diabetes mellitus (T2DM)patients with different urinary albumin excretion rate.MethodFor 22 normal controls and 65 of type 2 diabetics were recruited into this study.The 65 type 2 diabetics were divided into 3 groups according to urinary albumin excretion rate (UAER): normal albuminuria group (n=23)，microalbuminuria group (n=22)，clinical albuminuria group (n=20).Urinary VEGF levels were measured by using ELISA method.Results①UVEGF excretion rate in normal albuminuria group was obviously higher than that in controls (P<0.05).In T2DM group，UVEGF excretion rate in microalbuminuria and clinical albuminuria groups were significantly higher than that in normal albuminuria group (P<0.05 or P<0.01).UVEGF excretion rate in clinical albuminuria group was obviously higher than that in microalbuminuria group (P<0.05).There was significant differences among each group.②UVEGF excretion rate was positively related to UAER，plasma creatinine and course of diseases.③Multiple regression analysis displayed that UAER and plasma creatinine were affecting factors of UVEGF excretion rate.ConclusionIncreases of UVEGF in type 2 diabetes are ahead of changes of UAER and are related with the degree of pathological changes of kidney.UVEGF might be a sensitive factor of the early stage of diabetic nephropathy.It might predict the evolvement of diabetic nephropathy.

Key Words:Type 2 diabetes mellitus;Diabetic nephropathy;Vascular endothelial growth factor

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN )是糖尿病(diabetes mellitus,DM)严重的微血管并发症。DM因高糖及组织缺氧导致多种血管源性生长因子表达增加，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是内皮细胞特异性的有丝分裂原，主要作用于内皮细胞，具有强大的增加血管通透性及促血管内皮增生的作用。有研究表明，VEGF在DN的发生、发展中可能起重要作用，本实验通过检测不同尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate，UAER)的2型DM患者尿VEGF含量，以探讨VEGF与DN的关系及其临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料：实验组：2型DM患者64例，系我院内分泌科住院患者，均符合1999年WHO诊断标准，其中男33例,女31例,平均年龄(54.0±13.6)岁，并排除DM急性并发症、肿瘤、急慢性感染、肝脏疾病、非DM肾脏疾病及应用转换酶抑制剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂的患者。根据UAER分为三组：正常白蛋白尿组(UAER<20 μg/min)23例，男12，女11，年龄(53.7±12.2)岁;微量白蛋白尿组(UAER20～200 μg/min)21例，男10，女11，年龄(53.0±13.9)岁;临床蛋白尿组(UAER>200 μg/min)20例，男11，女9，年龄(54.6±14.1)岁。

正常对照组：体检健康者22例，男11，女11，年龄(55.1±13.3)岁。糖耐量正常，无心肝肾等疾病。各组间年龄、性别、体重指数具有可比性(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 受试者一般临床资料：所有受试者均测量体重、身高、血压，计算体重指数，询问并记录年龄、病程。采晨起空腹肘静脉血，HbA1c采用高压液相层析法测定，血糖、血脂、血肌酐由日立7600型生化分析仪测定。

1.2.2 标本采集：收集受试者24 h尿液，混匀，准确记录尿总量，留取8 ml，置于―40℃冰箱保存待测。

1.2.3 UAER测定：尿白蛋白测定采用放射免疫法，并计算UAER，连续测定二次取平均值。试剂盒购自中国医学科学院核医学中心。

1.2.4 尿VEGF测定：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法，并根据24 h尿量计算排泄率，试剂盒购自深圳晶美生物工程公司。

1.3 统计学处理：数据以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS12.0统计软件包，进行t检验、方差分析及相关分析、多元回归分析。

2 结果

2.1 各组间临床资料的比较：实验组及对照组个体年龄、性别分布、体重指数比较，差异无统计学意义(P>0.05);实验组三组间病程比较，差异有统计学意义(P<0.05);收缩压、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)在微量白蛋白尿组较对照组显著升高(P<0.05或P<0.01)，在临床蛋白尿组较正常白蛋白尿组、对照组显著升高(P<0.05);实验组三组DM患者空腹血糖较对照组均显著升高(P<0.05)，但实验组之间差异无统计学意义;临床蛋白尿组的血浆肌酐较对照组、正常及微量白蛋白组均显著升高(P<0.01)。糖化血红蛋白在糖尿病各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。临床蛋白尿组的舒张压、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较对照组均有显著差异(P<0.05);临床蛋白尿组血肌酐、尿素氮与正常对照组、正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组比较差异均有显著性(P<0.01)。见表1。表1 对照组与2型DM各组尿VEGF排泄率及临床特征的比较(略)注：与对照组比较，①P<0.05，②P<0.01;与正常白蛋白尿组比较，③P<0.05，④P<0.01;与微量白蛋白尿组比较，⑤P<0.05，⑥P<0.01。

2.2 各组间VEGF的比较：与正常对照组相比，正常白蛋白尿组尿VEGF排泄率即可见显著升高(P<0.05)。T2DM组内，微量白蛋白尿组和临床蛋白尿组尿VEGF较正常白蛋白尿组显著升高(P<0.05或P<0.01)，临床蛋白尿组较微量白蛋白尿组尿VEGF显著升高(P<0.05)，各组间比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.3 相关分析：尿VEGF排泄率与UAER、病程、血浆肌酐呈正相关，相关系数分别为0.503、0.414、0.362。

2.4 多元回归分析：以年龄、体重指数、病程、UAER、空腹血糖、HbA1c、收缩压、舒张压、TC、LDL-C、HDL-C、TG、血浆肌酐为自变量，以尿VEGF排泄率为因变量，进行多元回归分析，影响尿VEGF排泄率的因素为UAER、血浆肌酐，标准化回归系数分别为0.425、0.301(P<0.01)。

3 讨论

VEGF是一种主要作用于血管内皮细胞的有丝分裂原，是由两条相同多肽链通过二硫键构成的同源二聚体糖蛋白,分子量为36～46 KD。人VEGF基因位于6号染色体短臂1区2带(6p12),不同的外显子剪切编码产生5种形式同分异构体。其作用为促进内皮细胞增殖和迁徙，增加血管通透性，改变细胞外基质，血管生成和维持作用[1]。VEGF在肾脏主要定位于肾小球脏层上皮细胞(足细胞)，远端小管细胞也可少量表达[2],与DN发病密切相关的因素如高血糖、血管紧张素Ⅱ、蛋白激酶C激活、转化生长因子-β、血小板源性生长因子、纤维母细胞生长因子、晚期糖基化终末产物、氧化应激等均能诱导VEGF分泌增加[3],缺血/缺氧是诱导VEGF及其受体产生的最有效因素。

本实验中,64例2型DM患者尿VEGF排泄率较正常对照组明显升高，正常白蛋白尿组尿VEGF排泄率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),提示尿VEGF排泄升高先于尿白蛋白排泄的变化,早期参与了DN的病理生理过程。同时，2型DM 组内,与正常白蛋白尿组相比,微量白蛋白尿组尿VEGF排泄率显著升高(P<0.05),临床蛋白尿组进一步升高(P<0.01),且尿VEGF的排泄与UAER、病程、血浆肌酐呈正相关，并受UAER、血浆肌酐的影响。对于2型DM患者，以往研究表明[4]，白蛋白尿不仅预示了DN的发展，它的出现也反映机体发生了广泛的血管损伤和功能失调，血浆肌酐预示了DN的发展、预后，病程是DN发病显著的危险因素。提示2型DM患者肾脏组织中VEGF表达、分泌增加并与肾脏病变的程度有关，与国外的报道基本一致[5]。高糖环境下，通过蛋白激酶C、细胞外信号调节激酶介导，足细胞VEGF及mRNA表达水平均增高，促进肾小球毛细血管内皮细胞分裂，新生血管生成，释放纤溶酶原、胶原酶等血管活性物质，肾小球基膜结构改变，增加了滤过屏障的通透性[6]，导致尿蛋白形成，VEGF并增加内皮细胞通透性，促进细胞外基质的形成和堆积，使系膜病变加重[7];另一方面,导致肾小球内单核巨噬细胞迁移/活性增加,系膜活化,转化生长因子-β产生增加,促进肾小球硬化[8]。动物实验表明，应用VEGF抗体或糖化终末产物抑制剂等中和或抑制VEGF的作用可明显减轻DM大鼠肾组织的病理改变。

总之，VEGF作为DM微血管内皮功能紊乱的一个重要介导因子,可能在DN的发生发展中发挥一定的作用;2型DM患者尿VEGF排泄增加与肾脏病变的程度有关,并且尿VEGF排泄增加先于UAER的变化，提示尿VEGF可作为糖尿病肾病的敏感指标。抑制或阻断VEGF在肾组织中的作用可能成为糖尿病肾病防治的靶点之一。

【参考文献】

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