Bcl2与乳腺癌耐药蛋白基因在老年急性髓系白血病中表达的意义

　　作者：姜振宇,许颖,姚程　　作者单位：吉林大学第一医院血液肿瘤科，吉林 长春 130021

　　【摘要】目的探讨Bcl2和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因在老年急性髓系白血病(AML)中的表达及其相关性。方法 RTPCR法检测20例老年AML患者及20例老年非恶性血液病对照组的骨髓白细胞BCRP mRNA，同时流式细胞仪(FCM)检测其骨髓单个核细胞(BMMNC) Bcl2蛋白表达。结果 AML组Bcl2总阳性率较对照组显著增高，其中初治组阳性率与对照组无显著差异，而难治与复发组阳性率明显高于初治组和对照组(P<0.05);BCRP总阳性率明显高于对照组，其中初治组和难治与复发组阳性率均较对照组明显增高(P<0.05)，而初治组和难治与复发组间无显著差异(P>0.05)。Bcl2+组和BCRP+组完全缓解(CR)率明显低于Bcl2-组和BCRP-组，早期复发率明显高于Bcl2-组和BCRP-组(均P<0.05)。Bcl2和BCRP基因在初治组和难治/复发组表达不相关(P>0.05)。结论 Bcl2和BCRP基因均与临床耐药密切相关，二者高表达均提示预后不良，但二者无相关性，联合检测Bcl2和BCRP基因对评价AML预后有较大意义。

　　【关键词】 多药耐药;急性髓系白血病;Bcl2;BCRP基因;预后

　　The significance of Bcl2 and BCRP gene expression in elderly patients with acute myeloid leukemia

　　JIANG ZhenYu, XU Ying , YAO Cheng.

　　Department of Hematology and Oncology, First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, China

　　【Abstract】 Objective To explore the expression of Bcl2 and breast cancer drugresistant protein (BCRP) in elderly patients with acute myeloid leukemia (AML) and their correlation. Methods The level of BCRP mRNA in leukocytes of 20 elderly AML patients and 20 controls was detected by RTPCR, and the expression of Bcl2 in bone marrow mononuclear cells (BMMNCs) was measured by flow cytometry (FCM). Results The positive rate of Bcl2 was obviously higher in AML patients than that in controls, there was no significant difference in Bcl2 positive rate between newlytreated patients and controls, but that of refractory/relapsed group was significantly higher than that in newlytreated and control groups (P<0.05); the positive rate of BCRP was obviously higher in BMMNCs than that in controls, that of control group was evidently lower than that in newlytreated and refractory/relapsed group (P<0.05), but there was no significant difference between newlytreated group and refractory/relapsed group(P>0.05). Compared with patients with Bcl2-/BCRP-, the patients with Bcl2+/BCRP+ had the lower CR rate and early relapse rates (P<0.05). There was no significant correlation between Bcl2 and BCRP gene in relapsed/refractory group ( P>0.05). Conclusions Clinical resistance to chemotherapy in AML is closely associated with expression of Bcl2 and BCRP, high expressions of Bcl2 and BCRP indicate poor outcome, but there is no correlation between Bcl2 and BCRP. United detection of Bcl2 and BCRP gene play an important role in evaluating AML outcome.

　　【Key words】 Multidrug resistance; Acute myeloid leukemia (AML); Bcl2; BCRP gene; Prognosis

　　目前认为，肿瘤耐药机制中膜转运蛋白产生的耐药是重要的多药耐药机制之一，如Bcl2、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)。Bcl2抑凋亡基因编码Bcl2蛋白高表达可使细胞毒药物诱导的细胞凋亡明显延迟导致再生耐药〔1〕。BCRP存在ATP结合盒，具有ATP依赖性药物外排功能，能够将化疗药泵出肿瘤细胞外。Bcl2和BCRP在老年急性髓系白血病(AML)耐药的产生中是否具有相关性尚无相关报道，本研究拟通过检测老年AML患者的骨髓白细胞Bcl2和BCRP基因表达情况，探讨其耐药机制。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 2006年10月～2007年10月在本院住院的老年AML患者20例，均符合FAB 协作组的急性白血病诊断分型标准，按照FAB分型标准分为初治组6例，男2例，女4例，年龄60～75(中位67)岁，其中M1 1例，M2 1例， M4 1例，M5 2例，M6 1例;难治与复发组14例，男6例，女8例，年龄61～74(中位63)岁，其中M0 2例，M1 1例，M2 3例，M3 2例，M4 3例，M5 2例，M6 1例。选择20例老年良性血液病患者(缺铁性贫血、特发性血小板减少性紫癜)为对照组。AML采用HA或DA方案诱导化疗，急性早幼粒细胞白血病用三氧化二砷和/或全反式维甲酸(ATRA)诱导缓解;分别在1～2个疗程化疗后判断疗效〔2〕。达到完全缓解(CR)后予HA和DA方案巩固1～2个疗程后，以中剂量阿糖胞苷等方案强化3～4个疗程。难治与复发白血病的诊断标准为〔3〕：①标准的诱导化疗两个疗程不能完全缓解(NR);②首次CR后6个月内复发;③首次CR后12个月后复发再诱导无效;④2次及多次复发。早期复发的标准：缓解期≤6个月(即首次CR后6个月内复发)。

　　1.2 检测指标及方法 骨髓单个核细胞(BMMNC)制备后，用直接免疫荧光标记法，300目筛网过滤后用流式细胞仪测定Bcl2(试剂盒购自大连宝生物公司)。抽提RNA，运用RTPCR技术(PCR试剂盒购自Invitrogen公司)检测BCRP mRNA的表达，并对PCR产物进行图像分析。

　　1.3 统计学方法 数据以率或百分比表示，使用SPSS10.0软件进行组间χ2检验;相关性用相关分析。

　　2 结 果

　　2.1 各组Bcl2和BCRP表达比较 老年AML组Bcl2总阳性率〔40.0%(8/20)〕较对照组〔15.0%(3/20)〕显著增高(P<0.01)，其中初治组阳性率〔16.7%(1/6)〕与对照组无显著差异，而难治与复发组阳性率〔50.0%(7/14)〕明显高于初治组和对照组(均P<0.05);老年AML组BCRP总阳性率〔65.0%(13/20)〕明显高于对照组〔20.0%(4/20)〕，其中初治组〔66.7%(4/6)〕和难治与复发组阳性率〔64.3%(9/14)〕均较对照组明显增高(P<0.05)，而初治组和难治与复发组间无显著差异(P>0.05)。

　　2.2 Bcl2和BCRP基因表达与老年AML临床疗效的关系 Bcl2+组和BCRP+组完全缓解率(CR)和早期复发率分别明显低于和高于Bcl2-组和BCRP-组(均P<0.05)。与Bcl2-/BCRP-组比较，Bcl2+/BCRP+组CR明显降低，而早期复发率明显升高 (均P<0.05)。见表1。

　　2.3 Bcl2和BCRP基因表达的相关性 相关分析发现老年AML中Bcl2和BCRP基因在初治组和难治与复发组表达无相关性(分别为r=0.03，P>0.05;r=0.04，P>0.05)。表1 Bcl2和BCRP基因表达与AML临床疗效的关系与阴性表达组比较：1)P<0.05

　　3 讨 论

　　Bcl2过度表达是公认经典的多药耐药(MDR)，其耐药机制与临床疗效、预后的关系已较明确。大多数研究表明，MDR1基因过度表达是成人AML 治疗成败的重要指标。Guerci等〔4〕检测 87例AML Bcl2总阳性表达率为41%, Bcl2+组病人CR显著低于Bcl2-组。本实验中AML初治组Bcl2阳性率虽高于对照组，但两者差异不显著，难治与复发组明显高于对照组和初治组。Bcl2+组CR明显低于Bcl2-组，Bcl2+组早期复发率明显高于Bcl2-组。本结果与相关结果一致〔5〕，说明Bcl2的阳性表达与临床耐药密切相关，易复发且预后不好。

　　Ross等〔6〕报道测定20例AML患者细胞的BCRP mRNA表达水平，其中14例有异常不良预后的染色体，有33%的患者BCRP mRNA高表达;van den HeuvelEibrink等〔7〕比较研究了20例AML患者在疾病复发与难治时的BCRP mRNA表达明显高于初治组，40%未达二次CR。国内研究〔8〕显示BCRP基因在AML中的阳性表达率也较高。本研究结果显示，BCRP基因在老年AML及其中初治组和难治与复发组阳性表达率均高于对照组，这与有关文献〔6〕结果相似，表明BCRP基因过度表达与临床耐药密切相关。

　　白血病细胞Bcl2和 BCRP基因共同表达相关性的研究〔6〕表明BCRP表达与MDR1基因表达间无显著相关性。van den HeuvelEibrink等〔7〕研究显示初治时BCRP与MDR1 的表达有关，但疾病复发和(或)难治时，这种共同表达的关联不存在，仅表现为BCRP mRNA高表达，因此考虑BCRP高表达与临床耐药有关。本研究相关分析发现老年AML中Bcl2和BCRP基因在初治组和难治和(或)复发组表达并不相关，不排除与本研究样本例数较少有关。Bcl2+/BCRP+组CR率明显低于Bcl2-/BCRP-组，早期复发率明显高于后者，说明：①两个耐药基因二者介导耐药机制不全相同;②耐药谱不同，两个耐药基因的同时表达比单基因的表达临床耐药率更高，预后更差，而且Bcl2和BCRP基因在检测上无相关性。因此，单一指标检测难以准确反映患者对联合化疗的敏感性，而选用多参数同时检测更能准确预测白血病的疗效和预后，有利于指导临床治疗。

　　【参考文献】

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　　6 Ross DD, Karp JE, Chen TT, et al. Expression of breast cancer resistance protein in blast cells from patients with acute leukemia〔J〕. Blood, 2000;96(1):3658.

　　7 van den HeuvelEibrink MM, Wiemer EA, Prins A, et al. Increased expression of the breast cancer resistance protein (BCRP) in relapsed or refractory acute myeloid leukemia (AML)〔J〕. Leukemia, 2002;16 (5)：8339.

　　8 管 俊, 盛瑞兰, 顾 健. 急性非淋巴细胞白血病患者乳腺癌耐药蛋白基因表达及其临床意义〔J〕. 白血病•淋巴瘤, 2002;11 (3)：13942.