干化学和湿化学方法对乳糜血标本总胆红素测定比较
发表时间：2010-05-24 浏览次数：426次
作者：孙曙华1 韩丽红2 作者单位：(1.包头医学院第二附属医院，内蒙古包头 014030; 2.包头医学院医学技术系)
【摘要】 目的：通过对干化学方法和湿化学方法测定乳糜血标本总胆红素的比较，寻找适合测定乳糜血标本总胆红素的方法。方法：12份乳糜血标本分别用干化学方法和湿化学方法测定血清总胆红素。结果：用干化学方法较湿化学方法测定乳糜血标本总胆红素含量低。结论：干化学方法较湿化学方法更适合对乳糜血标本总胆红素测定。
【关键词】 乳糜血;总胆红素;干化学;湿化学
临床生化检测中经常有乳糜血标本。乳糜血标本中乳糜微粒造成血浆颜色呈乳白色或混浊状。临床生化采用湿化学方法测定的总胆红素(TBIL)、白蛋白、肌酐等生化指标结果常受乳糜血干扰，常呈假性升高，导致检测结果失效，不能为临床提供真实可靠数据。本实验通过对干化学方法和湿化学方法测定乳糜血标本TBIL的比较，寻找较适合测定乳糜血标本TBIL的方法。
1 材料与方法
1.1 材料 12份临床急诊病人乳糜血标本。首先用干化学方法检测全部乳糜血标本中TBIL含量，然后在0.5 h内采用湿化学方法检测全部标本中TBIL含量。
1.2 仪器与试剂 干化学方法测定仪器是美国强生VIPROS-350，试剂由美国强生公司提供。湿化学方法采用的仪器是日东芝TBA-120FR，试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供。两种方法均严格按说明书进行操作。
1.3 统计方法 用配对设计资料的秩和检验比较两组数据的差异，取α=0.05，单侧T检验。
2 结果
用干化学方法较湿化学方法测定乳糜血标本TBIL含量低，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。采用干化学方法测定的12份乳糜血标本的血清TBIL值全部都在参考值范围内，而采用湿化学方法测定的值全部都假性升高，且高于参考值范围2～20倍。详见表1。
3 讨论
乳糜血血浆颜色呈乳白色或混浊状，表示血液中含有大量脂肪。乳糜血中乳糜微粒是由TG、CH、磷脂及载脂蛋白共同组成的载脂蛋白。正常人血浆中的表1 干化学和湿化学方法测定TBIL结果乳糜微粒空腹12 h后就被完全清除。乳糜可造成血浆浑浊，脂浊使血清分布呈现非均一性，严重影响常规采用可见光及紫外光光度法中湿化学方法测定TBIL、白蛋白、肌酐等生化指标结果的可靠性，导致结果常成假性升高,不能为临床提供真实可靠数据。本实验测定12份乳糜血标本TBIL含量，干化学方法较湿化学方法测定乳糜血标本TBIL含量低，差异有统计学意义。采用干化学方法测定的12份乳糜血标本的血清TBIL值全部都在参考值范围内，而采用湿化学方法测定的值全部都假性升高，且高于参考值范围2～20倍，因此认为干化学方法较湿化学方法更适合对乳糜血标本TBIL测定。
干化学方法和湿化学方法均采用可见光及紫外光光度法中的对比法[1]。干化学方法和湿化学方法测定血清TBIL反应原理一致，均为TBIL与重氮盐(N-羟甲基硫酰)六氮磷酸重氮苯反应，生成具有相似摩尔吸光特性的偶氮胆红素色基，其吸光峰值位于540 nm附近。干化学方法建立在一种修改的经典重氮反应的基础上。反应在干燥的载玻片上。载玻片由5层构成，分别为干片上层、扩散层、试剂层、支持层、干片底层。湿化学方法测定血清TBIL反应试剂和血清所有成份均在一起。采用干化学方法测定TBIL时，将一滴患者样本滴在干片上，并通过扩散层均匀分布到下面的试剂层，扩散层不仅可阻留细胞、结晶和其他小颗粒，也可以根据需要让大分子，如蛋白质等滞留，以提高分析的特异性。因此该层可以阻留乳糜微粒等物质，起到抗乳糜微粒干扰的作用。同时当待检样品通过扩散层后，可以消除溶液中影响检测反应的干扰物质。扩散层中的某些特殊物质一方面可用来掩盖待检样品中的有色物质，使反射光度计的测定结果不受影响。湿化学方法测定血清TBIL反应试剂与血清所有成份在一起，因此则该反应方法不能起到抗乳糜微粒干扰的作用，这是引起湿化学方法测定乳糜血标本TBIL值偏高的主要原因。同时该反应方法不能消除溶液中影响检测反应干扰物质以及不能掩盖待检样品中的有色物质，使反射光度计的测定结果受到影响。干化学方法测定TBIL时试剂层提供用于测定胆红素重氮反应的反射背景，其中含有用来测定胆红素所需的所有试剂，通过重氮盐反应，然后通过透明的支持层，在540 nm和460 nm两个波长下测定偶氮胆红素色基，以确定TBIL浓度。540 nm下的反射测定用于矫正光谱干涉。采用双波长测定可以通过副波长加以修正，减少甚至消除干扰因素，提高测定准确性。而湿化学方法测定血清TBIL采用单波长(540 nm)，单波长测定易受样品溶血、黄疸、脂浊等因素干扰，这也是干化学方法测定血清TBIL较湿化学方法准确的原因。干化学方法反应底物进入指示剂层，在这里发生显色反应。此层包含染料或相似的指示剂，使反应产物到达指示剂层后生成了有色化合物，其颜色变化与分析物浓度成比例，被反射光检测。由于光线不通过已经被阻留在扩散层上的潜在干扰物，从而避免了对检测结果的干扰。因此多层的设计，不同的项目加入了特殊的试剂层，增强反应的特异性，使干化学方法具有优异的抗干扰能力。
综上所述，干化学方法由于其独特的反应设计可以抗血清标本乳糜的干扰，使其较湿化学方法更适合对乳糜血标本TBIL测定，因此也适合测定乳糜血中白蛋白、肌酐等生化指标。至于干化学方法是否具有完全的抗乳糜血干扰的作用，还需进一步进行临床生化方法学的评价。
【参考文献】
[1] 鲍瀛，段樱，谭兵，等.化学法与湿化学法测定结果的比较[J].哈尔滨医药,2008,28(5):6-7.
