SLE活动期患者CD 62p、PMA的表达

　　作者：马莉 作者单位：江苏省苏北人民医院血液病研究室 ，扬州 225001

　　关键字：SLE活动期患者CD 62p、PMA的表达

　　Expression of CD 62p and PMA in Patients with Active Systemic Lupus Erythematosus(SLE)

　　MA Li，GU Jian，Wang Zhongxiang，WU Wei , SHI Jianxia

　　(The Subei People’s Hospital of Jiangsu Province,Yangzhou 225001,China)Abstract: Objective To measure the expressions of platelet membrane protein CD 62p and plateletmonocyte aggregate(PMA) in patients with active systemic lupus erythematosus(SLE) and explore its significance in the thrombotic state of SLE. Methods The levels of platelet membrane protein CD 62p and PMA in 26 patients with active SLE and 30 normal persons were measured by flow cytometry and thereafter the results measured were compared in this study. Results The levels of CD 62p and PMA in the group of patients with active SLE were 9.60±1.14% and 15.32±1.24%. The levels of CD 62p and PMA in the group of normal persons were 2.11±0.56% and 5.90±1.5%.There were significant differences about CD 62p and PMA between the group of patients with active SLE and the normal control group (P<0.05).Conclusion The levels of CD 62p and PMA in the group of patients with active SLE were increased and can be used to explain thrombotic state of SLE and therapeutic significances.Key words: Systemic lupus erythematosus; CD 62p; Plateletmonocyte aggregation

　　系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematousus , SLE)是一种自身免疫性疾病，累及多个系统，临床表现复杂，病程迁延反复。SLE活动期患者常有凝血功能紊乱，故易并发出血与血栓形成。为了探讨SLE活动期患者血小板活化状态并诱发微血管血栓形成的病理过程，本文采用流式细胞仪(FCM)检测了本院26例SLE活动期患者及30例正常对照者全血中CD 62p及PMA情况。

　　1 资材料与方法

　　1.1 研究对象 SLE活动期患者26例，女23例，男3例，年龄17～57岁，平均年龄33.3岁，均为我院2004年6月～2006年1月住院及门诊患者，符合美国风湿病协会(ARA)1982年修订SLE诊断标准[1]。其活动期根据临床表现及实验室检查结果判断。对照组：在校大学生、本院职工30例，其中男15例，女15例，平均年龄32.1岁(21岁~52岁)，均无肿瘤和避孕药应用史及血栓性疾病史。

　　1.2 仪器与试剂 美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪，CellQuest软件，试剂 CD 62pPE、CD 61PerCP、IgMPE、CD 14PE均为BD公司产品。

　　1.3 实验方法

　　1.3.1 CD 62p测定 取静脉血2 ml置于含EDTA的专用抗凝管中，采血后2 h内完成直接免疫荧光染色。于FALCON管底部加入CD 62pPE、CD 61PerCP各5 μl，并设同型对照管。于上述管内分别加抗凝血5 μl，充分混匀，室温避光孵育15 min。加PBS 1ml悬浮，轻轻手动混匀，上机检测。

　　1.3.2 PMA测定 取静脉血1 ml置于含EDTA的抗凝管中，采血后0.5 h内完成直接免疫荧光染色。于FALCON管底部分别加入CD 61PerCP、CD 14PE各20 μl，加抗凝全血100 μl，并设同型对照管。两管充分混匀，室温避光孵育15 min。每管中加入红细胞裂解液2 ml，充分混匀，室温避光反应10 min。800 r/min 离心5 min，弃上清。加PBS 2 ml，洗涤1次。加300 μl PBS悬浮细胞，混匀，上机检测。

　　1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0软件统计结果，组间比较用t检验。

　　2 结 果S

　　LE活动期患者与正常对照组CD 62p、PMA表达结果见表1。表1 不同组别CD 62p、PMA的表达

　　3 讨 论

　　CD 62p即P选择素是存在于血小板α颗粒膜中的一种膜糖蛋白，在正常情况下为低水平表达。当血小板被激活时, CD 62p迅速从胞内翻转至细胞表面表达，并且介导白细胞、活化血小板与内皮细胞的相互作用[2]。CD 62p能介导中性粒细胞与活化的血小板和内皮细胞黏附，从而引发急性炎症、组织损伤和血栓形成。血小板单核细胞聚合体PMA (plateletmonocyte aggregation) 是活化后的单核细胞与血小板结合形成的聚合体，促进血小板活化，增加白细胞与内皮细胞的黏附，引发血液的高凝反应[3]。近年来发现循环中的单核细胞血小板聚合物可作为血小板活化的指标[4]，在研究炎症与血栓的关系中具有重要的作用。当血小板、单核细胞和中性粒细胞活化，释放P选择素，形成血小板与单核细胞的聚合体及炎症细胞表达CD 11b，从而介导白细胞与内皮细胞黏附，损伤血管壁内皮细胞，促进凝血过程。本研究发现SLE活动期患者CD 62p、PMA明显高于对照组，可能是SLE活动期患者体内的免疫复合物沉积于关节、小血管内膜或肾小球基底膜等部位，激活补体引起炎症网络的启动之故。本文证实了SLE活动期患者体内血小板的活化是其组织局部微血栓形成的病理基础。同时本文利用流式细胞仪检测活化血小板CD 62p时要求专用CTAD双层管壁抗凝管，并且在抽血时使用大号针头一针见血，前2 ml弃去，最大程度避免了体外血小板活化。同时使用CD 14和CD 61单抗标记单核细胞和血小板使PMA的检测更具特异性。总之，利用流式细胞仪检测活化血小板CD 62p、PMA的表达对于SLE活动期患者高凝状态的判断，抗血栓的治疗提供了可靠的实验依据。

　　【参考文献】

　　[1] TAM EM, COHEN AS, Fries JF, et al. The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus (SLE) [J].Arthritis Rheum,1982,25:1271.

　　[2] GENG JG，CHEN M，CHOU KCPselectin cell adhesion molecule in inflammation, thrombosis, cancer growth and metastasis[J]. Curr Med Chem， 2004， 11(16): 21532160.

　　[3] FREEDMAN JE, LOSCALZO J. Platelet–Monocyte Aggregates: bridging thrombosis and inflammation[J]. Circulation， 2002， 105(18): 21302132.

　　[4] MICHELSON Al, BARNARD MR, KRUEGER LA, et al. Circulating monocyteplatelet aggregates are a more sensitive marker of in vivo platelet activation than platelet surface Pselectin: studies in baboons, human coronary intervention, and human acute myocardial infarction[J]. Circulation, 2001, 104(13):15331537.