正常妊娠妇女血浆蛋白Z水平的变化与意义

作者：郝艳华， 陈文萍，程明刚，刘香萍    作者单位：南方医科大学附属宝安医院，深圳市宝安区人民医院，深圳 518101     【摘要】  目的 探讨不同孕周的正常妊娠妇女血浆蛋白Z（PZ）水平的变化及其临床意义。方法 选择正常未孕和早期、中期、晚期妊娠、分娩和产后妇女各30例，用ELISA法测定其血浆PZ水平并进行比较分析。结果 正常妊娠妇女血浆PZ水平随着孕期的增加有升高的趋势。正常妊娠妇女从早期妊娠到分娩，血浆PZ水平较早期值升高22.6%（P<0.05），在分娩后6～8周下降至正常未孕或早期妊娠时的水平；分娩组孕妇血浆PZ水平（2.32±0.66 mg/L）显著高于早期妊娠组（1.90±0.60 mg/L,P<0.02）、未孕妇女(1.96±0.54 mg/L,P<0.05）和产后组（1.88±0.51 mg/L,P<0.01）。结论 正常妊娠妇女血浆PZ水平随着孕期的增加有升高的趋势，正常妊娠妇女PZ水平的增加可能是机体通过调节凝血因子的水平而降低胎盘血栓形成的一种保护机制。

    【关键词】  正常妊娠； 蛋白Z

     Dynamic Changes of Plasma Protein Z in Normal Pregnancy Women

    HAO Yanhua , CHEN Wenping,，CHENG Minggang, LIU Xiangping.

    (The Affiliated Shenzhen Baoan Hospital of the South Medical University ，the Baoan People’s Hospital, Shenzhen, 518101, China)

    Abstract： Objective  To investigate the clinical significance of the dynamic changes of plasma protein Z (PZ) in normal pregnancy women at different gestational weeks.Methods  The levels of plasma PZ were measured by ELISA method for 30 unpregnancy women, 150 normal pregnant women (30 of early and 30 of middle and 30 of late pregnancy and 30 at delivery and 30 of 6 to 8 weeks after delivery).Results  The mean concentrations of plasma PZ in the first trimester of normal pregnant women were 1.90±0.60 mg/L, increased to 2.10±0.55 mg/L in the second trimester, and increased again to 2.17±0.64 mg/L in the third trimester, and increased significantly to 2.32±0.66 mg/L at delivery. The mean levels of PZ in normal pregnant women at delivery was significantly higher than those in normal controls and early pregnancy women and those around 6 to 8 weeks postpartum (P<0.05).Conclusion  The levels of plasma PZ during pregnancy were increased with gestational weeks, and the normal increase of PZ during pregnancy may exert a protective effect, which may reduce thrombotic events in the placenta by means of balance the increase of clotting factors.

    Key words：  Normal pregnancy； Protein Z

    正常的妊娠过程中凝血因子（如纤维蛋白原、因子Ⅶ、Ⅷ、X等）水平增高，抗凝血因子（如蛋白C）水平下降，而且随着孕期的进展，纤溶因子的能力也逐渐减弱，如纤溶酶原激活物抑制物（PAI1、PAI2）以及凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）水平增高，这些变化可增加血栓栓塞的危险性。而成功的妊娠需要防止胎盘绒毛间隙和绒毛内动静脉分支发生血栓，以保证母体和胎儿胎盘间充足的血液供应。因此妊娠过程中凝血、抗凝和纤溶系统功能紊乱而引致血栓形成可导致不良妊娠结局的发生[1]。

    蛋白质Z(protein Z, PZ)是近年来发现的一种新的抗凝血辅因子，它是Prowse等1977 年首次从牛血浆中分离出一种新的维生素K依赖性糖蛋白，属于丝氨酸蛋白酶抑制物超家族成员。近年来国外有关PZ缺乏与不良妊娠结局（如不明原因的早产、先兆子痫、胎膜早破等）的研究报道[25]较多。本研究旨在探讨PZ缺乏在不良妊娠结局中的意义，回顾性分析了不同孕周的正常妊娠妇女血浆PZ水平。

    1  资料与方法

    1.1  研究对象  回顾性分析2006年1月至2006年12月间150例正常妊娠的妇女，妊娠早期（8～12周）、中期（20～24周）、晚期（28～32周）、分娩（37～41周）和产后6～8周孕妇各30例；同时随机选取30例正常未孕妇女为对照组。各组的年龄无显著性差异且均无糖尿病、高血压、肿瘤或遗传性易栓症等病史，亦未用影响出凝血功能的药物。

    1.2  样本采集与保存  各组均采集空腹肘前静脉血，枸橼酸钠抗凝，于3 000 r/min离心20 min，收集血浆置于-70℃冰箱保存备用，使用前室温溶化。

    1.3  试剂  PZ检测用ELISA试剂盒购自法国Diagnostica Stago公司。

    1.4  方法  PZ检测试验前按说明书稀释缓冲液和洗液，用配制好的稀释缓冲液稀释血浆标本和标准品，加待测稀释血浆、标准品(浓度分别为0、10、25、50、100、200 μg/ L) 200 μl于已包被抗PZ抗体的微孔板，室温孵育2 h后用配制好的洗液洗板5 次，然后每孔加200 μl酶结合物，室温孵育2 h后洗板5 次，再每孔加200 μl底物(OPD)，室温孵育5 min 后，加50 μl 硫酸（3 mol/L）终止反应，室温静置10 min后，于波长492 nm 测定吸光度(A)值。以标准品浓度为自变量X，A 值为应变量Y，用Logistic 曲线拟合修匀标准曲线，根据标准曲线可求出标本中PZ浓度。

    1.5   统计学方法  所有数据以x±s表示。两组间均数比较采用独立样本t检验。相关分析采用Pearson相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

    2  结    果

    不同孕周的正常妊娠妇女与未孕妇女血浆PZ水平测定结果见表1。由表1可见正常妊娠妇女从早期妊娠到分娩，血浆PZ水平较基础值升高22.6%（P<0.05），在产后6～8周下降至正常未孕或早孕时的水平。正常妊娠分娩组血浆PZ水平显著性高于早孕组、正常未孕组（t值分别为2.60、2.36,P<0.05）和产后组（t值为2.92，P<0.01），其它各组之间的差异无统计学意义（P>0.05）。正常妊娠妇女血浆PZ的平均水平（Y）与平均孕周（X）之间有好的相关性（Y = 0.0145X + 1.7572，R2 = 0.9865）。表1  不同孕周的正常妊娠妇女与未孕妇女血浆水平PZ *与未孕组和早孕组相比P<0.05；与产后组相比P<0.01

    3  讨    论

    PZ是由肝脏合成的一种维生素K依赖的血浆蛋白，由360个氨基酸组成的单链蛋白，分子质量为62 ku，人PZ的编码基因位于染色体的13q34区域，结构上与其他维生素K依赖性凝血因子Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及蛋白质C 分子十分相似。在蛋白Z依赖的蛋白酶抑制物( protein Zdependent protease inhibitor, ZPI)抑制活化的因子Ⅹ（FⅩa）的作用中，PZ作为一种辅助因子使ZPI对FⅩa的抑制作用增强1 000倍以上[6]。

    近年来有关PZ与血栓形成的研究引起了人们的兴趣。在妊娠过程中，由妊娠引起的凝血和纤溶系统变化（包括许多凝血因子水平的升高及纤溶蛋白活性的显著性降低）可导致血栓栓塞的危险性增加。本研究发现正常妊娠者血浆PZ水平随着孕周的增加而升高，二者之间呈明显的正相关；正常妊娠妇女从早期妊娠到分娩，血浆PZ水平比早期值升高22.6%（P<0.05），在分娩后6～8周下降至正常未孕或早孕时的水平；与文献报道一致[7]。本研究结果提示在正常的妊娠过程中，PZ水平的增加可能是机体的一种保护机制，通过抑制FⅩa以降低胎盘血栓形成的几率；而PZ水平降低则会导致胎盘血栓形成的危险性增加，从而引起不良妊娠结局的发生。Gris等[2]对不明原因的早期流产患者的研究也持这一结论。他们发现不明原因的早期流产患者中PZ缺乏发生率高。PZ缺乏者早期流产的危险性增加6.7倍，并认为孕妇的PZ缺乏可导致母体和胎儿之间胎盘血栓形成的危险性增加。他们随后的研究发现，用LMWH（依诺肝素）治疗不明原因早期流产患者，治疗失败的患者PZ缺  乏更严重[8]。因此，在妊娠过程中监测血浆中PZ水平，尤其是对基础PZ水平低的患者，具有一定的临床价值，以便早期给予治疗避免不良妊娠结局的发生。

【参考文献】[1] 郝艳华,程明刚,姚吉龙. 蛋白Z与不良妊娠结局的研究进展[J].血栓与止血学, 2008,14(3):139141.

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[4] PAIDAS MJ, KU DH, LEE MJ, et al. Protein Z, protein S levels are lower in patients with thrombophilia and subsequent pregnancy complications [J]. J Thromb Haemost, 2005, 3(3):497501.

[5] PAPAIOANNOU G., TOPALIDOU M., GARIPIDOU B., et al. Protein Z in patients with pregnancy complications [J], Thrombosis Research, 2007; 119(S1): S113.

[6] BROZE GJ JR. Protein Zdependent regulation of coagulation [J]. Thromb Haemost, 2001, 86(1):813.

[7] QUACK LOETSCHER KC, STILLER R., ROOS M., et al. Protein Z in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation [J]. Thrombosis Research, 2007, 119(S1): S114.

[8] GRIS JC, MERCIER E, QUéRé I, et al. Lowmolecularweight heparin versus lowdose aspirin in women with one fetal loss and a constitutional thrombophilic disorder[J]. Blood, 2004, 103(10):36953699.