血友病患者凝血酶激活的纤维蛋白溶解抑制物活性（TAFIa）的检测及其临床意义

作者：胡理明， 叶玲丽， 陈 萍， 谢炳寿， 朱淼勇， 林素仙， 朱永林    作者单位：温州市第三人民医院血液科，温州 325000     【摘要】  目的 检测血友病患者凝血酶激活的纤维蛋白溶解抑制物活性（TAFIa）水平，探讨其临床意义。方法 对20例血友病患者（血友病A 15例，血友病B 5例）及15例正常人对照以发色底物法检测TAFIa水平，对比二者的差异。按临床出血程度将年出血次数≤2次，无关节畸形者列为临床轻型组（n=8），年出血次数>2次，且有严重关节畸形者列为临床重型组(n=12)，比较二组的TAFIa水平。结果 血友病组和正常对照组TAFIa均值分别为86.00±15.67％及107.00±9.63％，二组比较P<0.001，差异有显著性。血友病A和血友病B TAFIa均值分别为87.73±15.50％及80.80±16.72％，二组之间P>0.05，差异无显著性。二组与正常对照P值均<0.001，有显著差异。TAFIa值与临床出血关系：8例轻型组者均值为81.38±15.85％，12例重型组者为87.41±16.04％，两组比较P>0.05，差异无显著性。结论 血友病患者TAFIa水平显著低于正常对照，表明其下调纤溶机制显著减弱，导致纤溶活性增强，促进了血友病患者的出血倾向。提示抗纤溶治疗在血友病出血治疗中占有重要位置。未证明血友病患者临床出血严重程度与TAFIa水平相关。

    【关键词】  血友病; 凝血酶激活的纤维蛋白溶解抑制物活性

    Study on the Levels of Thrombin Activable Fibrinolysis Inhibitor Active (TAFIa) in the Patients with Hemophilia

    HU Liming, YE Lingli, CHEN Ping, XIE Bingshou, ZHU Miaoyong, LIN Suxian*, ZHU Yonglin.

    （The Third Hospital of Wenzhou,Wenzhou ,325000, China）

    Abstract： Objective  To detect the levels of TAFIa for exploring the activity of fibrinolysis in the patients with hemophilia.Methods  The levels of TAFIa were measured by the synthetic chromogenic substrate method in 15 patients with hemophilia A, 5 patients with hemophilia B and 15 healthy controls. The patients with hemophilia were divided into two groups, according to the risk of bleeding: the mild bleeding group (≤2 bleeds/year, absence of joint deformity; n=8); the severe bleeding group (>2 bleeds/year, with severe joint deformity; n=12). The levels of TAFIa in both group were compared.Results   A statistically significant decrease in TAFIa was found in the patients with hemophilia compared to the controls (86.00±15.67％; 107.00±9.63％，P<0.001). There was no difference in the TAFIa levels between the patients with hemophilia A and hemophilia B (87.73±15.50％; 80.80±16.72％，P>0.05). No significant difference was observed between the mild bleeding group and the severe bleeding group in the levels of TAFIa (81.38±15.85％; 87.41±16.04％，P>0.05).Conclusion  The levels of TAFIa in the patients with hemophilia were significantly decrease as compared with the controls and the results showed that the hemophilia patients had a defect of down regulation fibrinolysis and the drug of antifibrinolysis could be used in the treatment of bleeding. There was no difference between the group with mild bleeding and with severe bleeding in the levels of TAFIa.

    Key words：  Hemophilia; Thrombin Activable Fibrinolysis Inhibitor Active(TAFIa)

    凝血系统与纤维蛋白溶解（纤溶）系统通过复杂的机制维护着止血过程的协调和平衡，其中凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）则是凝血依赖的纤溶抑制物[1]，在凝血过程中起着调控纤溶、保护早期形成的止凝血栓避免溶解的作用。该物质在循环中以无活性的酶原形式（proTAFI）存在，只有当凝血启动后，内源凝血途径反馈性系列效应产生足量的凝血酶（FⅡa），才被催化成具有活性的TAFI（TAFIa），发挥下调纤溶的作用[2]。血友病患者由于因子Ⅷ（FⅧ）或因子Ⅸ（FⅨ）缺陷，内源凝血途径产生的FⅡa减少，预示着TAFI激活机制障碍，从而促进了血友病患者的出血倾向。为此我们应用发色底物法检测了血友病患者与正常对照的TAFIa水平，以探讨血友病患者纤溶活性及临床意义。

    1  资料与方法

    1.1  对象

    1.1.1  血友病患者  血友病A 15例，血友病B 5例，共20例,均为男性，年龄5～53岁。据FⅧ及FⅨ浓度，其中重型16例，中型1例，轻型3例。15例血友病A患者中，1例有FⅧ抑制物（8.96％）。所有病例均曾检测血象、肝肾功能及血液传播性疾病HBV、HCV、HIV、RPR。20例中血象均正常，ALT升高者4例（20％），HBV阳性者0例，HCV阳性者11例（55％），HIV、RPR均阴性。

    1.1.2  正常对照15例，均为健康供血员。

    1.2  方法

    1.2.1  受试者空腹抽血9 ml，置入109 mmol/L枸橼酸钠溶液1 ml中（9:1），分离血浆置入-80℃冰箱中待检测。

    1.2.2  TAFIa检测  仪器为法国思达高公司STAR自动血凝仪。试剂由法国思达高公司提供。检测方法：发色底物法。

    1.2.3  FⅧ、FⅨ、FⅧ抑制物、HBV、HCV、HIV、RPR检测  分别应用凝固法、ELISA法以及凝集法检测。

    1.2.4  临床出血程度分型  将年出血次数≤2次，无关节畸形者列为临床轻型组，共8例；年出血次数>2次，且有严重关节畸形者列为临床重型组，共12例。比较二组的TAFIa水平。

    1.2.5  统计学处理  采用SPSS统计软件包进行统计，二组的TAFIa值采用t检验。

    2  结    果

    血友病患者和正常对照TAFIa测定结果见表1。表1  血友病患者与正常对照组TAFIa值注： 与正常对照组比较，* P<0.001.**该例有FⅧ抑制物8.96％

    2.1  血友病组和对照组TAFIa均值分别为86.00±15.67％及107.00±9.63％，两组比较P<0.001，差异有显著性。

    2.2  血友病A和血友病B TAFIa均值分别为87.73±15.50％及80.80±16.72％，两组之间P>0.05，差异无显著性。两组与对照相比较P值均<0.001，差异有显著性。

    2.3  TAFIa值与临床出血关系  8例轻型组者均值为81.38±15.85％，12例重型组者均值为87.41±16.04％，两组比较P>0.05，差异无显著性。

    2.4  15例血友病患者与对照配对检测结果，13例TAFIa值<对照，幅度从4％至43％，平均25.5％，2例TAFIa值>对照，分别为2％及19％。

    3  讨    论

    血友病患者纤溶活性与出血的关系早已受到关注，Walsh等[3]1971年已观察到经替代治疗后拔牙的血友病患者3～5日后出现牙龈出血、纤溶指标增高，而接受6氨基己酸抗纤溶治疗后的另一组患者则无出血现象。Anlovic等[3]研究表明，血友病患者的纤溶酶－纤溶酶抑制物（纤溶酶－α2抗纤溶酶）复合物高于正常对照组。说明血友病患者纤溶状态较正常人活跃，但其机理并不很明确。近年来各种试管实验已证明这种活跃的纤溶状态与TAFI水平密切相关。Mosnier等[4]以低浓度组织因子（TF）诱导血友病A患者血浆凝固，以组织型纤溶酶原激活物（tPA）介导纤溶时，血块溶解时间较正常人明显加快，而当加入FⅧ、TAFI或凝血酶调节蛋白（TM）后，血块溶解时间得以纠正。同样的，Broze等[1]以FⅨ缺乏的血友病B血浆作实验，以小剂量TF诱导凝血后，用尿激酶（UK）诱导早期纤溶，这种活跃的纤溶可被加入FⅨ所纠正。若预先以特异的抗TAFI抗体处理血浆后，则尽管加入FⅨ或TM，并不能纠正纤溶。这些实验足以证明TAFI的抗纤溶作用。此外，内源途径凝血因子FⅧ或FⅨ也能纠正血友病A、B患者血浆的纤溶活性，表明是由于增加了FⅡa的生成量，促进了TAFI活化的结果。

    TAFI亦称血浆前羧肽酶B或R或U（CPB、CPR、CPU）[3],是一种金属家族的糖蛋白，由肝脏合成，分子质量大约6 ku，在血浆中以无生物活性的酶原形式（proTAFI）存在[5]。在血液凝固期，TAFI被FⅡaTM复合物裂解，释放出分子量为35 ku、具羧肽酶活性的不稳定碎片TAFIa，发挥抑制纤溶作用。在37℃环境中TAFIa通过蛋白构象的改变迅速失活，转化为无活性物质即TAFIi。曾有学者[6]以ELISA法研究过血友病患者proTAFI抗原，TAFITAFIi抗原以及总TAFI抗原水平，发现血友病患者proTAFI抗原水平明显低于正常对照，TAFITAFIi抗原水平明显高于正常对照，而总TAFI抗原水平则在正常水平范围。本组研究的是以发色底物法检测血友病患者TAFIa水平，有别于上述研究。从检测结果可知血友病患者TAFIa水平显著低于正常对照。血友病A及血友病B两者之间TAFIa水平无差异，而与正常对照比较均显著降低。本组检测结果与Antovic 等[3]测定血友病患者proTAFI抗原水平明显低于正常水平结果相一致。显然血友病患者TAFIa水平的降低不仅是由于proTAFI水平的降低，同时也由于TAFI活化机制的障碍所致。proTAFI抗原的减少原因并不清楚，而TAFITAFIi及总TAFI抗原水平的改变Antovic等[3]推测可能是由于纤溶酶参与活化，促进TAFI活化率以及这些物质在体内蓄积有关，有待进一步研究。此外，本组15例配对检测结果表明有2例TAFIa水平大于正常对照，Guo等[6]亦观察到在74例患者中有2例总TAFI抗原高于对照。出现这种现象的原因是否与纤溶酶发挥活化TAFI的作用及血浆内蓄积有关亦有待研究揭示。

    虽然血友病患者临床出血症状的严重程度取决于FⅧ或FⅨ的浓度，但研究发现确有部分重型血友病患者尽管因子水平<1％，而临床出血症状相对较轻微[7]。为探讨其原因，Shetty等[8]将重型血友病患者按临床出血症状轻重分为临床出血轻型及临床出血重型，测定其血栓形成生物抗凝因子以及包括TAFI在内的纤溶相关物质，将两组进行对比研究发现轻型者70％有抗凝物质缺陷，而重型者仅5.4％；TAFI指标两组比较，轻型者明显高于重型者（P<0.05）。说明血友病患者临床出血轻重还与患者是否同时存在生物抗凝物质缺陷及TAFI水平高低有关。为探讨TAFIa与临床出血症状的关系，我们同样将临床出血轻重分为2组，即轻型组及重型组，对比其TAFIa均值，结果显示两组TAFIa均值无差异，未证明TAFIa水平这一单一因素与临床出血程度有因果关系。

    本组检测结果表明，血友病患者proTAFI及TAFIa的水平均明显低于正常对照，其潜在的下调纤溶机制显著减弱，促进了血友病患者的出血倾向。因此抗纤溶治疗在这些患者出血的治疗、预防中显得尤为重要。

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[4] MOSNIER LO, LISMAN T, VAN DEN BERG HM, et al. The defective down regulation of fibrinolysis in haemophilia A can be restored by increasing the TAFI plasma concentration［J］. Thromb Haemost, 2001, 86：10351039.

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[8] SHETTY S, VORA S , KULKARNI B, et al. Contribution of natural anticoagulant and fibrinolytic factors in modulating the clinical severity of haemophilia patients［J］. British Journal of Haemotology, 2007, 138：541544.