酶标法检测小巨核细胞对单纯性贫血的诊断价值

作者:杨颉,吴少玲,赵新东,孟冬  【关键词】  贫血;诊断,鉴别;小巨核细胞

　　［摘要］目的 探讨酶标法检测小巨核细胞在单纯性贫血诊断和鉴别诊断中的意义。方法 应用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶联技术（APAAP）法和瑞特染色法，分别检测106例单纯性贫血（包括骨髓增生异常综合征20例，缺铁性贫血18例，巨幼细胞性贫血10例，溶血性贫血18例，多发性骨髓瘤20例，骨髓纤维化7例，肾性贫血5例，纯红细胞再生障碍性贫血3例，慢性病贫血3例，慢性再生障碍性贫血2例）病人骨髓中巨核细胞的数量和小巨核细胞的数量及类型。结果 APAAP法检测到的巨核细胞的数量较瑞特染色法多，APAAP法检测小巨核细胞的阳性率较瑞特染色法高，差异有显著性（ χ2 =5.013，P <0.05）。结论 APAAP法检测小巨核细胞明显优于瑞特染色法，是诊断单纯性贫血类型的重要方法。

　　［关键词］ 贫血;诊断，鉴别;小巨核细胞

　　DETECTION OF MICROMEGAKARYOCYTES BY ENZYME LINKED IMMUNOSORBENTASSAY: ITS VALUE IN DIFFEREN-TAIL DIAGNOSIS OF SIMPLE ANEMIA

　　YANG JIE， WU SHAO-LING， ZHAO XIN-DONG， et al

　　（Department of Hema-tology， The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College， Qingdao 266003， China）

　　［ABSTRACT］ObjectiveTo assess the significance of detection of micromegakaryocytes by enzyme linked immunosorbent-assay in differential diagnosis of simple anemia. MethodsBone marrow smears from patients with different kinds of anemia （ n =106） were detected by both APAAP staining and Wright's staining for the number and types of micromegakaryocytes. Results The number of micromegakaryocytes and their positive rate detected by APAAP staining were significantly higher than that of Wright's method （ χ2 =5.013， P <0.05）. ConclusionAPAAP staining obviously surpasses Wright's method in the detection of micromegakaryocytes， which is an important technique in the diagnosis of simple anemia.

　　［KEY WORDS］anemia; diagnosis， differential; small megakaryocytes

　　巨核细胞酶标组织化学染色属于免疫化学中非标记抗体酶法，适用于骨髓标本的检测，对形态学难以识别的小巨核细胞和淋巴样小巨核细胞的鉴别有重要意义。贫血是血液系统疾病中的常见病，明确诊断对于治疗非常重要。我科应用巨核细胞酶标染色法，检测了106例单纯性贫血病人的小巨核细胞，探讨小巨核细胞数目及分布情况在单纯性贫血诊断和鉴别诊断中的价值。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象 单纯性贫血病人106例，均为我院2005年1～12月门诊及住院病人，其中骨髓增生异常综合征（MDS）20例，缺铁性贫血（IDA）18例，巨幼细胞性贫血（MA）10例，溶血性贫血（HA）18例，多发性骨髓瘤（MM）20例，骨髓纤维化（MF）7例，肾性贫血5例，纯红细胞再生障碍性贫血（PRCA）3例，慢性 病贫血3例，慢性再生障碍性贫血（CAA）2例。病人均经临床、血常规、骨髓检查确诊，符合文献［1］诊断标准。

　　1.2 方法

　　1.2.1标本采集 常规骨髓穿刺采取骨髓标本，制备骨髓涂片。

　　1.2.2巨核细胞和小巨核细胞检测 分别采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶联技术（APAAP）法和瑞特染色法，所有试剂购自协和干细胞基因工程有限公司，按文献［2，3］方法操作，显微镜下计数。阳性细胞的细胞核呈蓝色，细胞浆或膜有玫瑰红色标记，且在油镜下观察证实;无红色标记者为阴性细胞。根据小巨核细胞的形态，分为4型:Ⅰ型为淋巴样小巨核细胞，直径<12 μm;Ⅱ型为单圆核小巨核细胞，直径12～25 μm;Ⅲ型为大单圆核小巨核细胞，直径26～40 μm;Ⅳ型为多圆核和双圆核小巨核细胞，直径12～ 40 μm［2］。

2 结果

　　瑞特染色法检测到巨核细胞的数量为 37 个，APAAP法染色检测到巨核细胞的数量为67个。APAAP法检测MDS病人小巨核细胞的阳性率为75%，瑞特染色法检测阳性率为40%，二者比较，差异有显著性（ χ2 =5.013，P <0.05）。见表1。MDS出现的小巨核细胞的类型主要是Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，而MA和MF仅出现Ⅲ和Ⅳ型。

　　表1 瑞特染色法和APAAP法检测贫血巨核细胞的数量和小巨核细胞的阳性率比较（略）

　　3 讨论

　　应用骨髓片瑞特染色法进行巨核细胞计数时，常常会造成巨核细胞的漏检。本文应用APAAP法和瑞特染色法检测小巨核细胞阳性率差别有显著性，说明APAAP法检测小巨核细胞更敏感。其主要原因有两个:一是由于APAAP法中主要应用CD41a血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa单克隆抗体，其特异度和灵敏度远远高于瑞特染色法，且能克服内源性过氧化酶的干扰;二是瑞特染色法后进行巨核细胞计数，一般先在低倍镜下观察、后在油镜下确认，所以和幼红、幼粒大小相仿的小巨核细胞往往漏检，造成巨核细胞计数的减少。所以，用APAAP法计数小巨核细胞明显优于瑞特染色法，可推广用于贫血性疾病的常规检查，以提高疾病的诊断准确率，对 形态学难以识别的小巨核细胞和淋巴样小巨核细胞的鉴别有重要意义。本文结果还显示，用APAAP法计数巨核细胞的数量较常规瑞特染色法多，其原因为:巨核细胞酶标组织化学染色属于免疫化学中非标记抗体酶法，适用于骨髓标本的检测。在单纯性贫血疾病中，除MDS外，巨幼细胞性贫血、骨髓纤维化也可出现小巨核细胞，但大部分是以Ⅰ、Ⅱ型以外的小巨核细胞为主。而IDA、HA、肾性贫血、CAA、PRCA等疾病中未检测到小巨核细胞。MDS出现较多的是Ⅰ型小巨核细胞，这是MDS病人巨核系统的病态表现及MDS的特征性改变，也是MDS的一个早期诊断的重要依据。APAAP法大大提高了小巨核细胞检出率，因此，在进行小巨核细胞检测时，应用APAAP法较好［4］。MDS病人单纯表现为贫血，而骨髓仅表现为红系减少或巨幼样变时，瑞特染色法不易与CAA或巨幼细胞性贫血相鉴别，易造成误诊，延误治疗［5］。APAAP法可检出瑞特染色法难以识别的淋巴样小巨核细胞，还可同时观察小巨核细胞的形态和分化特征，对早期诊断MDS及与其他类型贫血的鉴别诊断有重要意义。对指导治疗也有一定的帮助。

　　［参考文献］

　　［1］ 张 之南.血液病诊断及疗效标准［M］. 第2版. 北京:科学出版社， 1998:20.

　　［2］ 王 曦，程爽. 小巨核细胞免疫酶标染色在急性白血病诊断分型中的意义［J］.中华血液学杂志，1995，16（1）:37. 　　［3］ 刘 成玉.临床检验基础实验指导［M］. 第2版. 北京:人民卫生出版社， 2003:11.

　　［4］ 桑玉旗，赵锐利. 小巨核细胞免疫酶标染色在鉴别骨髓增生异常综合征和巨幼细胞贫血中的意义［J］.齐鲁医学杂志，2001，16（4）:276-279.

　　［5］ 崔中光，汪洪毅，赵洪国. 环孢素、司坦唑醇及大剂量甲基泼尼松龙治疗急性再生障碍性贫血的效果［J］.青岛大学医学院学报，2003，39（1）:97.

　　（青岛大学医学院附属医院血液科，山东 青岛 266003）