血清端粒酶与CEA活性检测诊断价值的比较研究

作者：张义平 殷嫦嫦 邬亚华 孙维君 王丽丽作者单位：九江学院医学院 江西九江 332000 【摘要】  通过比较研究血清端粒酶与CEA活性，探讨对恶性肿瘤的诊断价值。方法：采用TRAP-PCR-ELISA法检测癌症患者外周血端粒酶活性，采用放免分析法检测患者血清CEA含量。测定例数为：正常对照组20人；良性病变组32人，癌症组肺癌56人。 结果：癌症患者56例中，端粒酶表达阳性率768%； CEA阳性率625%；对照组的端粒酶和CEA的假阳性率分别为96% 和77%。同时检查两项指标任一项阳性者，则阳性率911%，假阳性率135%，若需两项指标均阳性，阳性率571%，假阳性率38%。结论：检测血清端粒酶和CEA对恶性肿瘤的诊断均有一定的价值，联合检测综合诊断更能提高诊断准确率。 【关键词】  恶性肿瘤 端粒酶 癌胚抗原 诊断价值    COMPARATIVE STUDY OF DIAGNOSTIC VALUE OF    TELOMERASE AND CEA ACTIVITY ASSAY IN SE RUM    ZHANG Yiping；YIN Changchang；WU Yahua；SUN Weijun；WANG Lili    (Jiujiang University Medical College，Jiujiang Jiangxi，332000)    ABSTRACT  OBJECTIVE：To explore the diagnostic value of telomerase assay and CEA in Cancer．METHOD：Telomerase activity and CEA from serum of cancer cases and the control group cases were detected bv TRAP-PCR-ELISA and IRA．RESULTS： The positive rates of telomerase and CEA in cancer patients were 76.8% and 62.5%，respectively． The false-positive rates of telomerase and CEA in the control group cases were 9.6% and 7.7%，respectively．CONCLUSION：The assay of telomerase and CEA from serum in cancer is valuable for diagnosis of cancer．The combination of the two assays can increase the accuracy of the diagnosis．    KEY WORDS  cancer；telomerase；cancer embryo antigen (CEA)；diagnostic value    近年来，肿瘤标记物在肿瘤诊断中具有一定价值，但目前尚未发现一种同时具有高灵敏性及高特异性的肿瘤标记物，笔者采用端粒重复序列扩增(TRAP) 法［1］和免疫放射分析法比较研究56例恶性肿瘤组织及52 例对照组外周血端粒酶活性和癌胚抗原 (CEA)的水平，旨在探讨两项肿瘤标记物在恶性肿瘤诊断中的联合价值。    １  材料和方法    11 材料    111 标本的选择  经临床病理诊断的56 例恶性肿瘤患者， 肺癌23例，胃癌11，肝癌9例，结肠癌13例，其中男39 例，女17 例；年龄47～72 岁，平均512 岁；良性病例组32例，男17例，女15例，平均年龄为555岁。以上病例主要来自九江市医院收集。正常组为20名健康献血者，平均年龄为524岁。所有标本均采集全血标本。    112 试剂与仪器  端粒酶试剂盒采用华美公司提供的TRAP-PCR-ELISA试剂盒，CEA检测试剂盒采用中国医学科学院肿癌研究所试剂盒。PCR仪为杭州搏日公司生产（仪器型号Qy18－C027－2012A），γ计数仪为国营二六二厂生产（型号为Fj－2003/50A）。    12 方法    121 端粒酶活性的测定  白细胞提取物的制备按文献［2］进行，阴性对照标本通过热处理获得，即将白细胞提取物在沸水中加热10min，达到灭活端粒酶活性的目的。得到测定样本及阴性对照标本后，通过端粒的扩增，杂交及ELISA反应过程，使用ELISA酶标仪，分别测得测定标本在450nm和690nm波长吸光度，计算其差值A(A=A450nm－A690nm)，A>15可认为端粒酶阳性。

122 CEA的测定  该三项肿瘤标志物的标本为血清标本，CEA采用放射免疫法测定，操作均按试剂盒说明书进行。该肿瘤标志物的阳性判断标准分别为：CEA＞15ng/mL。    2  结果    21 端粒酶、CEA单项测定结果  各组外周血端粒酶及血清 CEA的测定结果见表1。表1  各组端粒酶、CEA各自检测结果表1的测定值经t检验，癌症组外周血端粒酶A值及血清CEA的含量与正常组相比均有显著性差异。    21 两项肿瘤标记物联合检测对恶性肿瘤的诊断结果  见表2。 表2  端粒酶和CEA联合检测对恶性肿瘤的诊断结果由表2可知各组外周血端粒酶及血清 CEA的联合检测结果，两项指标以一项阳性者作为对恶性肿瘤的诊断依据，则敏感性上升至911% ，特异度为865%；以两项指标均阳性作为对恶性肿瘤的诊断依据，敏感性下降至571%，但特异度上升至962%。

    3  讨论

    端粒酶是一种特殊的逆转录酶，它能催化染色体末端的特殊结构端粒复制。它存在于人的生殖细胞、永生化细胞系、肿瘤细胞和增殖组织。有证据表明，正常人体细胞无端粒酶的活性，而大部分的肿瘤细胞和胚系细胞中的端粒酶活性呈阳性［2］。Kim 等建立的(TRAP) 法［1］，使端粒酶活性测定的敏感度增加。之后，国外学者采用TRAP 法检测了各种肿瘤组织的端粒酶活性，阳性率达85%～95 %，而良性肿瘤和正常组织仅为4%左右。因此，端拉酶可作为癌症筛选的标记物［3］。本研究结果表明：56例恶性肿瘤外周血端粒酶阳性率为768%，特异度为904%。因此我们认为，外周血端粒酶测定有一定的灵敏度和特异性，可作为诊断恶性肿瘤的辅助手段之一。

    CEA是一种分子量约18万的糖蛋白，目前检测CEA蛋白的免疫技术，易产生假阳性结果，限制其进一步应用［4］。本研究结果表明：56例恶性肿瘤外周血CEA阳性率为625%，特异度为923%。

    由于肿瘤细胞异质性特点，迄今尚未发现对各型肿瘤均具有高度特异性和敏感性的标记物，通过采用联合检测可提高诊断效能，弥补单项标记物对不同肿瘤敏感性不同的缺点［5］。本研究结果显示：两项肿瘤标记物联合检测若以一项阳性作为恶性肿瘤的诊断标准，则敏感性增高至911%，特异度为865%，苦以两项阳性作为诊断标准，虽敏感性下降至571%但特异度可达962%。因此，临床上如有一项阳性，要考虑恶性肿瘤的诊断，并作进一步检查；如两项均阳性则诊断为恶性肿瘤准确性较大。

【参考文献】  ［1］Kim NW， Piatyszek MA ， Prowse KR ， et al .Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer［J］. Science，1994，266∶2011

［2］Allsopp R C， Vaziri H， Patterson C， et al.Telomere length predicts replicative capacity of human fibroblasts［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 1992， 89∶10114

［3］Thewissen M， Linsen L， Geusens P，et al. Impaired activation-induced telomerase activity in PBMC of early but not chronic rheumatoid arthritis patients［J］.Immunol Lett. 2005，100(2)∶205

［4］Goeminne J C，Guillaume T，Salmon M，et al.Unreliability of carcino embryonic antigen(CEA)reverse transcriptase polymerase chain reaction indetecting contaminating breast cancer cells in peripheral blood stem cells due to induction of CEA by growth factors［J］. Bone Marrow Transplant，1999，24∶769

［5］Yague E，Arance A，Kubitza L，et al. Ability to acquire drug resistance arises early during the tumorigenesis process［J］.Cancer Res. 2007，67(3)∶1130