幽门螺杆菌感染及环氧合酶2表达与胃癌变的关系

　　作者：陈随才　　作者单位：榆林市第二医院消化内科，陕西 榆林 719000

　　【摘要】目的探讨胃黏膜幽门螺杆菌(helicobactor pylori, H.pylori)感染、环氧合酶2(COX2)的表达与胃癌发生、发展的关系. 方法： 胃癌(GC)标本80例，非典型增生(Dys) 40例，萎缩性胃炎(CAG) 30例，肠上皮化生(IM) 30例，浅表性胃炎(CSG) 30例，应用免疫组化方法测定COX2蛋白的表达，用亚甲兰染色检测H.pylori. 结果： CSG，GC中H.pylori阳性和阴性病例COX2表达差异无统计学意义(P>0.05),但在CAG，IM，Dys中的H.pylori阳性病例中COX2表达高于H.pylori阴性病例(52.9% vs 7.6%，52.6% vs 9.0%，67.9% vs 33.3%). 结论： H.pylori感染诱导COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段.

　　【关键词】 胃肿瘤,癌前状态,螺杆菌,幽门 前列腺素内过氧化物合酶

　　0引言

　　胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程. 至今，病因还没有完全研究清楚，但近年的大量研究证实，H.pylori感染是胃癌病因中最重要的环境因素之一，H.pylori感染诱导一个复杂免疫反应，首先炎细胞聚集，然后导致增生，细胞因子释放，最终导致分子改变. 在被H.pylori上调的靶基因中，COX2在胃癌进程中起重要作用，因此，COX2与肿瘤的关系倍受关注，COX2 是一种诱导型酶,其与肿瘤的发生、发展有密切关系,并且可作为预防、治疗肿瘤的靶分子,对其检测具有重要的临床意义. H.pylori感染及其诱导的COX2表达在胃黏膜病变转变过程中的相关性尚不清楚. 我们检测chronic superficial gastritis,chronic atrophic gastritis,intestinal metaphasia,dysplasia和gastric carcinoma标本中的H.pylori感染和COX2蛋白的表达，探讨H.pylori感染及其诱导的COX2在不同胃黏膜病变中的表达情况，探讨其表达与胃癌发生、发展的关系，为胃癌的早期诊断及治疗提供依据.

　　1对象和方法

　　1.1对象200501/200612病理确诊存档组织蜡块，术前未放、化疗，年龄28~90(中位58)岁. 男125例，女85例. 其中GC标本80例，CSG 30例，CAG 30例，IM 30例，Dys 40例. 常规制备4 μm连续切片4张，兔抗人COX2多克隆抗体、免疫组化SABC试剂盒及DAB显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司. 亚甲兰溶液配制：亚甲兰11 g，硼酸1 g加蒸馏水100 mL.

　　1.2方法免疫组织化学染色采用SABC法： 新鲜配置H2O2孵育;微波修复抗原;滴加BSA封闭液，室温30 min. 甩去多余液体，不洗;每张切片加1滴或50 μL第一抗体，4℃孵育过夜;滴加二抗，37℃下孵育20 min，PBS冲洗，5 min×3次;滴加试剂SABC，37℃下孵育20 min; PBS冲洗，5 min×3次;DAB显色：每张切片加2滴或100 μL新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察5~10 min; 蒸馏水冲洗;自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，中性树胶封片. COX2阳性染色主要位于细胞胞质中,呈棕黄色弥漫性分布，间质细胞(炎性细胞、内皮细胞及成纤维细胞)和平滑肌细胞中亦可见散在部分表达，通过光学显微镜每张切片摄取5个高倍视野，计数阳性细胞个数，计算阳性细胞率， 以≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,76%~100%为4分，着色强度0分为阴性,1分为浅棕黄色(弱阳性),2分为棕黄色(阳性),3分为深棕黄色(强阳性). 每张切片的染色积分以这两者的乘积表示. 另HP染色：石蜡切片61℃烤片40 min，脱蜡，梯度水化. 亚甲兰溶液中染色1 min. 水洗凉干后用中性树胶封固. H.pylori在400倍高倍镜下观察，以切片中腺腔内找到深兰色单个或多个聚集的短棒状、弧状、“S”状杆菌为阳性(+)，否则为阴性.

　　统计学处理：组间率的比较采用χ2检验或精确概率法，P<0.05为差异有统计学意义.

　　2结果

　　2.1胃黏膜感染率在CSG，CAG，IM，Dys，GC中H.pylori感染率分别为23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80). CAG，IM，Dys的H.pylori感染率与CSG相比差异有统计学意义(χ2=6.94,χ2=6.71,χ2=10.60, P<0.01). GC的H.pylori感染率与CSG相比差异无统计学意义(χ2=1.37, P>0.05).

　　2.2胃黏膜 COX2的表达率COX2在CSG，CAG，IM，DYS，GC中的阳性表达率分别为10%(3/30)，33.3%(10/30)，36.6%(11/30)，57.5%(23/40)，72.5%(58/80)，CAG，IM，Dys的COX2阳性表达率与CSG相比差异有统计学意义(χ2=4.81，χ2=5.96，χ2=16.57，P<0.05,图1). GC的阳性表达率与CSG相比差异亦有统计学意义(χ2=34.50，P<0.01).

　　2.3胃黏膜感染与COX2表达的关系CSG，GC中阳性和阴性病例COX2阳性表达率差异无统计学意义(28.6% vs 4.0%，85.7% vs 65.4%)，但在CAG，IM，DYS中的阳性病例中COX2表达率高于阴性病例(52.9% vs 7.6%,52.6% vs 9.0%,67.9% vs 33.3%).

　　A: CAG; B: Dys; C: IM; D: 阴性对照; E: GC高分化; F: GC中分化.

　　图1胃黏膜COX2表达SABC ×400

　　3讨论

　　H.pylori已被认为是慢性活动性胃炎、十二指肠球部溃疡的重要致病因素，是胃癌的高危因素[1]. 胃癌是经过炎细胞浸润CAGIMDysGC的演变过程[2]. 我们的实验结果显示,H.pylori在CAG，IM，Dys的感染率与CSG相比差异有统计学意义(P<0.05). GC的H.pylori感染率与CSG相比差异无统计学意义(P>0.05). 胃癌H.pylori感染率为35%(28/80)，低于CAG，IM和Dys的检出率,其原因可能是由于胃癌的发生改变了胃黏膜组织结构和胃内微环境,尤其是胃癌表面的坏死组织,不利于H.pylori继续生长或胃癌组织释放其中的破坏因子使局部H.pylori破坏崩解所致.

　　COX有2种亚型： 结构型COX1和诱生型COX2，本研究结果显示，COX2在CAG，IM，Dys中的表达率与CSG相比差异有统计学意义(P<0.05). 在GC中的表达率与CSG相比差异亦有统计学意义(P<0.01)，提示COX2表达可能是CSG发展到GC的分子标志.

　　许多研究证实H.pylori是诱导COX2表达的重要因素, H.pylori感染和COX2的表达有明显的相关性[3]，在H.pylori感染的胃黏膜中COX2 mRNA和蛋白表达明显增加[4]，进一步说明了H.pylori和COX2有着明显的相关性[5]，樊薇等[6]研究结果显示,在H.pylori感染的胃黏膜疾病中,COX2阳性表达率高于非H.pylori感染的胃黏膜病变,且差异有统计学意义(P<0.01),且在胃癌组二者差异亦有统计学意义(P<0.01)，说明COX2的表达上调与H.pylori菌株感染有关, H.pylori菌株感染通过介导COX2的表达上调，在胃癌的发生中起作用，这可能是H.pylori感染诱导胃黏膜细胞异常增殖及细胞凋亡进而促使胃癌发生的重要机制. 本研究显示,在CSG和GC中H.pylori阳性和阴性病例COX2表达率差异无统计学意义(P>0.05)，但在CAG,IM和DYS的胃黏膜中H.pylori阳性病例的COX2表达率高于H.pylori阴性病例(P<0.05),提示H.pylori感染诱导COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段. 因此，在根除H.pylori感染的同时应用非甾体类抗炎药物可能对胃癌的防治起重要作用，这为肿瘤化学预防和治疗提供了新思维.

　　【参考文献】

　　[1] Mori N, Nada A, Hirayama T, et al. Activation of intercellular adhesion molecule expression by helicobacter pylori is regulated by NFkB in gastric epithelial cancer cells[J]. Infect Immun,2000,68(4):1806-1814.

　　[2] Honda S, Fujioka T, Tokieda M, et al. Development of Helicobacter pylori induced gastric carcinoma in Mongolian gerbils[J]. Carcer Res,1998,58:4255-4259.

　　[3] Uefuji K, Ichikura T, Schinomiya N, et al. Induction of apoptosis by JTE522, aspecific cyclooxygenase2 inhibitor, in human gastric cancer cell lines[J]. Anticancer Res, 2000,20(5):4279-4284.

　　[4] Guo XL, Wang LE, Du SY, et al. Association of cyclooxygenase2 expression with Hp cagA infection in gastric cance[J]. World J Gastroenterol, 2003, 9(4):246-249.

　　[5] Sung JJ, Leung WK, Go MY, et al. Cyclooxygenase2 expression in Hp associated premalignant and malignant gastric lesions [J]. Am J Pathol, 2000,157(3):729-735.

　　[6] 樊薇,周涛,程宝泉,等. HP感染及COX2的表达与胃癌及癌前病变关系的研究[J]. 山东大学学报,2006,44(7):704-705.