老年人功能性肠道障碍患者的chymase基因多态性

　　作者：吴晓尉,孙泉,季洪赞,许小兵,刘瑜,张立　　作者单位：南京军区南京总医院消化内科干部病区，江苏 南京 210002

　　【摘要】目的探讨老年人功能性肠道障碍(FBD)患者的chymase(CMA)基因B种A/G多态性分布的特点，分析其合并血压增高、心脏结构异常、肾功能减退等靶器官损害的临床意义。方法 选择89例老年FBD患者，按其在功能性胃肠病罗马Ⅱ标准中分型，所有患者按序数分成4个亚组包括肠易激综合征(C1;n=17)、功能性腹胀(C2;n=22)、功能性便秘(C3;n=27)、功能性腹泻(C4;n=23)，并选择无FBD老年患者作为对照组(C;n=22)，采用顺序特异性引物聚合酶链反应技术，检测各组患者循环血CMA基因B种A/G多态性的频率，将入选FBD病例分为纯合子GG基因型组(n=51)，以及含A等位基因型纯合子AA和杂合子AG 组(n=38)，并进行两组的临床指标比较分析。结果 FBD总组的CMA基因GG基因型、G等位基因频率为57.30%、76.40%，高于对照组的54.55%、75%，但无统计学意义(Ρ>0.05)，FBD GG基因型组BMI、Cr、SBP、DBP、UAE、LVD、IVSD、LVPWD、LVMI等临床指标明显高于AA和AG基因型组(Ρ<0.05)。FBD 四个组1～3级高血压总罹患率为84.26%(75/89)，与对照组(59.09%;13/22)相差显著(P<0.01)，C1组、C2组、C3组、C4组罹患高血压1～3级分别为70.59%(12/17)、95.45%(21/22)、92.59%(25/27)、73.91%(17/23)，高于对照组59.09%(13/22)。C2组罹患高血压1～3级与对照组相比相差显著(P<0.01)。结论 循环血CMA基因B种A/G多态性虽与老年人FBD患者相关不显著，但CMA基因GG基因型与老年人FBD合并血压增高、肾功能减退、心脏结构异常等靶器官损害相关。

　　【关键词】 老年人功能性肠道障碍(FBD),chymase基因多态性,靶器官损害

　　Chymase(CMA)是RAS一条非ACE依赖的、非血循环的组织生成途径，CMA是其转换酶〔1〕，CMA是循环、肠道黏膜等各机体组织活性分子，通过其效应激素作用于肠道黏膜组织,老年人功能性肠道障碍(functional bowel disorder，FBD)是老年期常见疾病，老年人往往在罹患FBD同时伴血压增高、心脏结构异常、肾功能减退等不同程度的多系统靶器官损害(target organ damage，TOD)。Pfeufer等认为CMA通过加速血管活性肠肽(VIP)的破坏而限制其生物学作用〔2〕，这就能解释FBD的部分临床症状，CMA基因也存在多种多态性，CMA基因存在2个已知等位基因标志CMA/A和CMA/B多态性，它们仅仅是一种是心血管疾病的易感基因，还是与FBD也具相关性?此类研究国内外报道仅仅限于心脏、血管组织，而对肠道障碍研究未见报道。本研究旨在探讨老年人FBD CMA基因B种A/G多态性的分布特点，探讨老年人FBD与CMA基因关联性，以了解老年FBD与血压增高等TOD并存的临床意义。

　　1 资料与方法

　　1.1 病例选择

　　病例来自2003年12月至2007年2月住院或门诊病人，诊断标准均按罗马Ⅱ功能性肠道障碍标准〔3〕,并除外继发性FBD及相关疾病。选择89例老年FBD患者，在功能性胃肠病罗马Ⅱ标准分型中，按序数分成四个亚组，其中肠易激综合征(C1)组17例，男性14例，女性3例，年龄65～87岁，平均(76.53±8.37)岁;病程2～26年，平均(9.05±6.99)年;功能性腹胀(C2)组22例，男性19例，女性3例，年龄65～87岁，平均(77.23±7.84)岁;病程5～36年，平均(9.37±8.23)年;功能性便秘(C3)组27例，男性21例，女性6例，年龄65～88岁，平均(77.37±6.18)岁;病程4～36年，平均(10.44±6.25)年;功能性腹泻(C4)组23例，男性18例，女性5例，年龄65～87岁，平均(77.17±6.18)岁;病程2～36年，平均(9.99±8.17)年。按照序数选择无FBD，无明确高血压病史，亦无恶性肿瘤、肺部疾患及继发性高血压等为对照(C)组，共22例(男16例、女性6例)，年龄在65～85岁，平均(76.68±6.41)岁。各组间年龄、性别、病程相差不显著(P>0.05)，显示各组间的可比性，各组观察前均详细记录病史、体格检查，做血、尿、便和常规肝肾功能、多肿瘤蛋白芯片等指标，辅助检查行B超及全腹部CT、电子结肠镜等检查，排除胃肠及胃肠外疾患诸如胆道疾病、胃肠胆道系统手术后、帕金森病、重症肌无力、重症缺血性脑血管疾病等引起肠道障碍的疾病患者。

　　1.2 方法

　　1.2.1 临床指标检测

　　受试者均测定身高、体重〔计算体质指数(BMI)〕、血肌酐(Cr)。尿白蛋白排泄量(UAE)测定方法:留取晨7时～次晨7时24 h尿计算法,共2～3次,间隔时间3～5 d。用放射免疫分析法测定尿白蛋白含量〔4〕，取平均值。每例患者用24 h尿肌酐法测定肾小球滤过率(GFR)。高血压诊断标准按照2004年中国高血压防治指南(实用本)〔5〕，血压测定取坐位血压测定法，测定2～3次取平均值，记录收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。超声心动图检查，左、右心室内径(LVD、RVD)、室间隔厚度(IVSD)及左室后壁厚度(LVPWD)，用Penn公式计算左室重量(LVM)：LVM=1.04×〔(LVD+IVSD+LVPWD) LVD3〕13.6，并计算左室重量指数(LVMI)=LMV/体表面积〔6〕。

　　1.2.2 CMA基因型检测

　　取空腹静脉血1 ml，EDTA抗凝，常规分离白细胞，用层柱法自白细胞中提取DNA。进行多聚合酶链反应，引物序列为：① 5′GGAAATGTGAGCCAGATAGTGCAGTC3′;R5′AATCCGGAGCTGGAGAACTCTTGTC3′，反应体系中含模板DNA 1 μg，Taq酶(Promega)1 U，10×扩增缓冲液5 μl，5 mol/L dNTP(Promega)2.5 μl，20 pmol引物各1 μl，反应体积共50 μl。在PCR扩增仪上94℃预变性1 min，然后扩增35个循环：94℃变性45 s，55℃退火35 s,72℃延伸70 s，最后72℃延伸4 min，PCR反应产物经过2%琼脂糖凝胶电泳后，通过溴化乙锭染色在紫外线透射反射检测分析仪下判定CMA基因型〔7〕。

　　1.2.3 CMA基因型分组分析

　　将FBD总组分为GG基因型组(n=51)与AA和AG基因型组(n=38)，并进行各组的临床指标比较分析。

　　1.3 统计学处理

　　计数资料用x±s表示，组间差异采用t检验，组间CMA基因型及等位基因频率的比较采用χ2检验或Fisher精确计算概率法。

　　2 结 果

　　2.1 各组CMA基因型和等位基因频率的比较

　　89例FBD患者的CMA基因GG基因型、G等位基因频率为57.30%、76.40%，高于对照组的54.55%、75%，但无统计学意义(Ρ>0.05);89例FBD患者的CMA基因AA基因型、AG基因型、A等位基因频率分别为4.49%、38.20%、23.60%，低于对照组的4.54%、40.91%、25%，但无统计学意义(Ρ>0.05);在FBD的4个亚组的CMA基因型、等位基因频率分别与对照组比较，以及各亚组间相互比较，相差均无显著意义(P>0.05)，见表1。表1 各组CMA基因型和等位基因频率的比较〔n(略)〕

　　2.2 FBD患者的临床指标CMA基因型分组分析

　　将FBD总组GG基因型组与AA和AG基因型组的临床指标进行比较分析，FBD GG基因型组BMI、Cr、SBP、DBP、UAE、LVD、IVSD、LVPWD、LVMI等临床指标明显高于AA和AG基因型组(Ρ<0.05)，FBD GG基因型组GFR明显低于AA和AG基因型组(Ρ<0.05)，见表2。表2 老年人FBD 不同CMA基因型组临床指标比较(略)

　　2.3 高血压罹患率

　　FBD四个组1～3级高血压总罹患率为84.26%(75/89)，与对照组59.09%(13/22)相差显著(P<0.01)，C1组、C2组、C3组、C4组罹患高血压1～3级分别为70.59%(12/17)、95.45%(21/22)、92.59%(25/27)、73.91%(17/23)，高于对照组59.09%(13/22)。C2组罹患高血压1～3级与对照组相比相差显著(P<0.01)。

　　3 讨 论

　　近年来FBD疾病的研究发展很快，2006年6月又公布了经过修订的罗马标准(罗马Ⅲ)，从分子水平上认识FBD存在神经内分泌系统异常的递质分泌〔3〕，脑肠肽对肠道的影响可以解释FBD部分内容。腹痛、恶心、呕吐、腹胀、腹泻、便秘是老年期常见的消化道症状。这些症状严重或影响到老年人的日常生活。一般而言，在进行排除炎症、感染、肿瘤和其他器质性疾病的检查后，在临床上很常见的情况是并未发现任何器质性病因，故将病人诊断为“功能性”症状而进行对症治疗〔8〕。FBD直接影响老年人的生活质量〔9～11〕，它既是老年人肠梗阻、肠道恶性肿瘤的致病基础，又是老年人心脑血管疾病诱发因素。CMA是肥大细胞的一种颗粒成分，人类的CMA存在于皮肤、肠道黏膜的肥大细胞内，是肾素血管紧张素系统(RAS)一条非血管紧张素转化酶(ACE)依赖的、非血循环的组织生成途径，CMA是其转换酶，新近的实验证实人类CMA能增加皮肤的血管通透性，尚能调解组胺对血管通透性的作用，促进肠道黏液细胞的分泌〔12〕。

　　本研究显示，CMA基因GG基因型、G等位基因在老年人FBD人群中频率高于对照组，虽然无统计学意义，但携带GG纯合子基因型FBD老年人的肾功能、心脏功能等靶器官损害临床指标明显高于对照组(P<0.01)。老年肠道功能障碍患者由于年龄大、病程长、合并血压增高致左室肥厚、血肌酐轻度升高、微量蛋白尿排泄增加等靶器官损害。微量白蛋白尿虽然反应肾小球基底膜病变〔13〕。但由于全身微血管病变的弥漫性，包括全身机体动脉与肾脏微小血管同样亦引起病变，肠系膜的微小血管与全身其他器官一样，严重的肠系膜血管病变引起临床上缺血性肠病,轻微的病变引起肠道神经免疫内分泌细胞功能紊乱致肠道功能损害。本研究显示，老年人FBD合并血压增高,明显高于对照组(P<0.01)，一方面说明血压增高是老年期的普遍现象，另一方面反映患有FBD携带GG基因型、G等位基因的老年人合并血压增高几率更高。

　　FBD与其他靶器官损害发病机制有其共同点，有研究表明处于上位神经元的中枢神经系统在FBD发病中起重要作用，近年有人提出炎症以及机体的应激变化都能通过局部的发射或者脑肠轴的活性影响肠道的感觉和动力〔14～16〕，靶器官损害的发病机制除与肾素血管紧张素系统有关外，还与中枢神经系统兴奋、抑制失调有关。FBD与靶器官损害的发病机制均与中枢神经系统有关，血管紧张素无论在循环还是在组织均可以解释血压增高致靶器官损害的因素，CMA系组织内血管紧张素转换酶,存在于肠黏膜、血管壁、心肌等组织〔12，17～21〕，CMA是否是老年人FBD与其他靶器官损害共同致病因素,FBD可能是老年人血压增高所致靶器官损害的靶器官之一，在其背后有无共同的致病基础，有待扩大样本进一步研究。

　　【参考文献】

　　1 Wright SH，Brown J，Knight PA，et al.Transforming growth factorbeta1 mediates coexpression of the integrin subunit alphaE and the chymase mouse mast cell protease1 during the early differentiation of bone marrowderived mucosal mast cell homologues〔J〕.Clin Exp Allergy,2002;32(2):31524.

　　2 Pfeufer A，Osterziel KJ，Uer H，et al.Angiotensinconverting enzyme and heart chymase gene polymorphisms in hypertrophic cardiomyopathy〔J〕. Am J Cardiol，1996;78：3624.

　　3 Drossman DA.The functional gastrointestinal disorders and the Rome Ⅲ　process〔J〕.Gastroenterology，2006;130:137790.

　　4 季洪赞，刘小北，张 立，等.苯那普利对心衰大鼠IL2、TNFα及心肌细胞凋亡的影响〔J〕.中国老年学杂志，2005;25(04)：4501.

　　5 刘力生.2004年中国高血压防治指南(试用本)〔J〕.高血压杂志,2004;6(12):4836.

　　6 季洪赞，缪东培，杨继红,等.微量白蛋白尿对老年高血压病患者心脏病变的影响〔J〕.中国慢性病预防与控制，2001;9(4)：911.

　　7 许小兵，季洪赞.血管紧张素转化酶抑制剂抗肿瘤作用的研究进展〔J〕.医学研究生学报,2008;21(3):3259.

　　8 Drossman DA.Functional GI disorders：what′s in name〔J〕? Gastroenterology,2005;128(4):17712.

　　9 季洪赞，吴晓尉，许小兵,等.匹维溴胺治疗老年人功能性肠道障碍的临床疗效及生活质量评估〔J〕.中国组织工程研究与临床康复，2007;11(12)：22758.

　　10 Levy RL,Olden KW,Naliboff BD，et al.Psychosocial aspects of the functional gastrointestinal disorders〔J〕.Gastroenterology,2006;130:144758.

　　11 Chang L,Toner BB,Fukudo S,et al.Gender,age,society,culture,and the patients perspective in the functional gastrointestinal disorders〔J〕. Gastroenterology,2006;130(5):143546.

　　12 Noviana D，Mamba K，Makimura S，et al.Distribution，histochemical and enzyme histochemical characterization of mast cells in dogs〔J〕.J Mol Histol，2004;35(2):12332.

　　13 季洪赞，吴晓尉，许小兵，等.老年人功能性肠道障碍与高血压靶器官损害相关性研究〔J〕.中国慢性病预防与控制,2007;4(15):3656.

　　14 时 乐，卜 平.内脏感觉的检测方法〔J〕.世界华人消化杂志，2006;14(3)：8895.

　　15 Kellow JE,Azpiroz F,Delvaux M,et al.Applied principles of neurogastroenterology:physiology/motility sensasion〔J〕.Gastroenterology，2006;130(5):141220.

　　16 Grundy D，Al Chaer ED,Aziz Q,et al.Fundamentals of neurogastroenterology:basic science〔J〕.Gastroenterology，2006;130(5)：1391411.

　　17 Urata H，Kinoshita A，Misono KS，et al.Identification of a highly specific chymase as the major angiotensin Ⅱ forming enzyme in the human heart〔J〕.J Biol Chem,1990;265(36):2234857.

　　18 Muto T，Fukami H.Recent chymase inhibitors and their effects in in vivo models〔J〕.J Drugs,2002;5(12):114150.

　　19 Takehiro M，Atsuyuki W，Takayoshi T，et al.Chymase inhibition prevents cardiac fibrosis and improves diastolic dysfunction in the progression of heart failure〔J〕.Circulation,2003;107:25558.

　　20 Kokkonen JO，Lindstedt KA，Kovanen PT,et al.Role for chymase in heart failure：angiotensin Ⅱdependent or independent mechanisms〔J〕? Circulation， 2003;107(20):25224.

　　21 Takai S，Miyazaki M.The role of chymase in vascular proliferation〔J〕. Drug News Perspect，2002;15(5):27882.