青阳参总甙对癫痫发作后脑损伤的神经保护作用的研究

神经保护是预防与治疗癫痫的有效方法。在预防癫痫中起到了重要保护作用,已获得临床中的高度重视[1]。癫痫的形成过程为动态，初始促发损伤( initial precipitating injury，IPI)、癫痫持续状态( status epilepticus，SE)会导致患者的神经变性,抑制功能下降以及大脑异常环路重建[2]。这些改变会促进慢性癫痫的形成,引起反复自发性运动发作( spontaneous recurrent motor seizures，SRMS)、学习以及记忆的损害。目前，虽然有一些传统以及新一代的抗癫痫药物在初期具有保护神经作用，可以有效减轻急性癫痫的神经变性,但却不能预防IPI后形成慢性癫痫[3]。本文主要通过运用海人酸( KA)致癫痈大鼠模型来观察青阳参总甙的神经保护作用。现报告如下。

1资料与方法一般资料：本次实验主要选择体重为200~250 g的120只雄性Wistar大鼠，由深圳大学动物中心提供。并将其大鼠随机分成两组，分别为非癫痫组(20只)和癫痫组(100只)，其中癫痫组又分为对照组、青阳参组、丙戊酸组和青阳参加丙戊酸组等四个亚组(各25只)。海人酸癫痫模型的制作：取体质量200～250 g的雄性Wistar大鼠，戊巴比妥40 mg/kg腹腔注射麻醉后，固定于动物立体定向仪(DY一Ⅱ型，天津市医疗器械研究所生产)，右侧侧脑室内注射海人酸(KA)0.5 μg(0.5 μg/ul);具体靶点：AP=-3.7 mm，L=4.1 mm，V=4.5 mm;注射速度为 0.2 ug/m in，注射完毕后留针5 min。出现Ⅳ级或V级发作的大鼠作为实验对象。非癫痫组注射相应量的生理盐水即可。实验方法：癫痫组均采用海人酸点燃癫痫法制成癫痫模型，观察癫痫大鼠癫痫发作的潜伏期、发作程度、发作频率及死亡率;所有实验大鼠在模型制作成功后第1~6天经腹腔注射2 ml生理盐水或其他处理因素，分别是青阳参组：每天经腹腔注射15 mg/kg青阳参总甙液2 ml(青阳参总甙拟由昆明植物研究所提供);丙戊酸组：经腹腔注射200 mg/kg的丙戊酸液2 ml(丙戊酸钠片由我院药房提供);青阳参加丙戊酸组：每天同时注射上两组的液体2 ml(各取1 ml)。疗效评价标准：显效：治疗前癫痫的发作次数与治疗其发作次数的平均值之比其下降在80%以上;有效：治疗前癫痫的发作次数与治疗其发作次数的平均值之比其下降在50%以上;无效：治疗前癫痫的发作次数与治疗其发作次数的平均值之比其下降50%以下或者频繁发作。统计学方法：将以上镜下结果在高倍显微镜下摄片，进行图像分析。将各组检查结果数据输入电脑，运用 SPSS13.0软件处理数据，计量资料使用均数±标准差(x〖TX-*3〗±s)表示，采用t 检验进行各组之间的比较;运用百分比(%)对计数资料进行表示,采用χ2检验，P>0.05为差异无统计学意义，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果 通过对比分析各组之间癫痫治疗效果，见表1。癫痫组中对大鼠皮层海马内c-fos的表达为( 12.3±2.5)和c-jun为(11.5±2.2)，这与非癫痫组中的(8.6±1.6)以及(7.8 ±1.5)相比，差异具有统计学意义(P﹤0.05)。见表2，表3。

3讨论

癫痫是一种以大脑局部病灶突发性的异常高频放电并向周围组织扩散为特征的大脑功能障碍，可伴有明显脑电图改变及短暂性的运动、感觉、意识及自主神经功能异常，根据WHO2005 年公布的流行病学调查结果显示：全球共有五千万的癫痫患者，且其平均年发病率为0.5‰ ~ 1‰;我国有癫痫患者900余万，每年新增约40万癫痫患者，深圳市有约10万癫痫患者[4]。可见，癫痫是十分常见的神经系统疾病之一。该疾病给患者本人、家庭及社会带来较大的负担。反复的癫痫发作不但使癫痫难于控制，而且可致脑损伤，并导致患者智能及生活能力下降。目前，对癫痫的治疗不尽满意，抗癫痫药物虽多，但仍有36%左右的癫痫患者为难治性癫痫，且有些药物不良反应显著，也有可能加重患者脑损伤致智能下降。因此，寻找不良反应小且具有神经保护功能的抗癫痫药物显得尤为重要。既往研究表明，中药青阳参具有明显的抗痫作用,且有作用持久、无镇静作用、不良反应少，与其他抗惊厥药联用无明显不良反应的特点[5]。青阳参抗痫作用的主要成分是青阳参总甙，有学者认为，对难治性癫痫其不失为一个有前途的新的抗癫痫药。青阳参的抗痫作用机理主要是通过保护癫痫发作后的脑损伤而实现。青阳参为萝摩科鹅绒藤属植物青阳参的根，主要分布于我国的云南、贵州、广西、湖南等地区，生于海拔1 500~2 800m的山坡、溪谷、森林中。青阳参性微温、味甘微苦，具有益肾强筋、健脾和胃、祛风除湿、解毒、镇静、驱虫等药效，民间用作补气益肾、活血散瘀、祛痰止咳，治疗子宫肌瘤、腰骨痛、结核、癫痫等疾病。青阳参片在临床中已使用多年，其有效成分是青阳参总甙。既往的临床报道已证明，青阳参片具有较好的抗癫痫的作用。 在动物实验方面，吴培等[6]制备了杏仁核电刺激点燃模型并观察，发现青阳参皂苷对大鼠杏仁核点燃进程有延长作用，对已点燃大鼠有抑制作用，与丙戊酸钠、尼卡地平联合应用有协同作用，其机制可能与增强GABA 系统功能有关，这为联合用药治疗癫痫提供新的实验依据，同时也为青阳参皂苷类化合物作为一种预防用药提供了合理的实验依据。裴印权等[7]用青阳参皂苷对小鼠听源性惊厥进行观察，发现青阳参皂苷能加强苯巴比妥钠和苯妥英钠的抗小鼠超强电休克惊厥效应，对小鼠回避性条件反射有抑制作用，对使硫酸亚铁引起的慢性癫痫型家兔有治疗作用，并能使其异常的大脑皮质电图恢复正常。本研究中，青阳参加丙戊酸组治疗的总有效率为92%，与青阳参组的72%以及丙戊酸组的76%相比差异具有统计学意义(P﹤0.05)。癫痫组中对大鼠皮层海马内c-fos和c-jun的表达与对照组比较，差异有统计学意义(P﹤0.05)。综上所述，青阳参总甙具有与丙戊酸同等的抗癫痫作用，两者合用，抗癫痫效果更佳，可以有效减少癫痫发作频率，并可以有效减少脑组织的细胞凋亡，安全性较高。可进一步积累资料，期望今后能在临床中进一步推广与使用[8]。

1黎丽云,殷志琦,张庆文. 云南民间药青阳参的研究进展[J].海峡药学,2011,(04):78.

2AkingPT,LiuPK,HsuCY. Immediately early geneexpres-sion in responses to cerebral ischemia friend or foe[J].STROKE,1996,(09):1682.

3李建一,赵天睿,南国华. 青羊参对小鼠脑中几种氨基酸含量的影响[J].中国药理学通报,1987,(03):144.

4李先春. 青阳参总甙抗癫痫作用的分子机理研究[D].华东师范大学(生理学),2005.625.

5JensenFE,FirkusnyIR,MowerGD. Differencesinc-fos immunoreactivity due to age and model of seizure induction[J].Molecular Brain Research,1993,(34):185.

6吴培. 青阳参总甙对大鼠杏仁点燃模型的作用研究[D].青岛:青岛大学,2006.7-53.

7裴印权,曹龙光. 青阳参的中枢药理作用研究[J].北京医学院学报,1981,(13):213.

8HonkamiemiJ,KononenJ,KainnT. Inductionofmultiple immediate early genes in rat hypothalamic pareventricular nucleus after stress[J].Molecular Brain Research,1994,(03):234.