结肠癌中hTERT的表达及其与Survivin和bcl-2表达的关系

　　作者：刘亮1,陈建1,刘凤军2　　作者单位：1消化内科　2普外科　(山东　济南　250012)

　　【摘要】目的：研究端粒酶逆转录酶(hTERT)在结肠癌中的表达及其与Survivin和bcl-2表达的关系。方法：应用免疫组织化学SABC法检测52例结肠癌及其相应癌旁正常组织中hTERT、Survivin和bcl-2的表达。结果：52例结肠癌组织中hTERT表达阳性率为80.8%，而相应癌旁正常结肠组织中无一例阳性表达。hTERT表达的上调与患者性别、年龄、肿瘤浸润深度无明显相关(P>0.05)，而与肿瘤分化程度、淋巴结转移、Dukes分期明显相关(P<0.05)。在52例结肠癌组织中hTERT与Survivin以及hTERT与bcl-2的表达之间呈正相关(r=0.589，P<0.05;r=0.559，P<0.05)。结论：hTERT表达的上调与结肠癌的发生、发展、恶性程度有着密切的关系;结肠癌中hTERT的表达与Survivin和bcl-2的表达密切相关。

　　【关键词】 结肠肿瘤,端粒酶逆转录酶,Survivin,bcl-2

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of hTERT in colorectal cancer and its relationships between the expression of Survivin and bcl-2. Methods: The expression of hTERT，Survivin and bcl-2 were detected in 52 cases of tumor tissue and tumor-adjacent norma1 tissue by immunohisto-chemical method of SABC. Results: The positive rate of hTERT in colorectal cancer was 80.8%, hTERT was not expressed in normal tissue. The over expression of hTERT had no relation with sex, age and tumor depth(P>0.05). It was significantly related to tumor differentiation, lymph node metastasis,Dukes staging(P<0.05).There were significant positive correlations between 　　端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)被认为是端粒酶活性的限制性因素[1]。端粒酶在hTERT的作用下延长随细胞分裂而进行性缩短的端粒，在细胞永生化和恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用[2]。研究表明，hTERT在肿瘤组织中高表达[3]。Survivin和bcl-2是细胞凋亡的抑制基因，多项研究表明两者在结肠癌中都有高表达[4-5]。然而结肠癌中Survivin和bcl-2的高表达与hTERT的表达有无关联尚不明确。本研究通过检测结肠癌组织中hTERT、Survivin和bcl-2的表达情况，探讨hTERT与结肠癌临床病理资料的关系以及与Survivin和bcl-2的关联。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　选择2008年1月—2009年4月山东大学齐鲁医院病理科结肠癌标本52例，其中男32例，女20例;年龄38～70岁，平均年龄56.2岁;高、中分化腺癌38例，低分化腺癌14例;22例有淋巴结转移，30例无淋巴结转移;浸润至肌层者18例，浆膜层者34例;Dukes分期A+B期29例，C+D期23例。所有病例术前均未接受放疗和化疗。所有标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，常规制备5 μm厚切片。每例同时取距肿瘤边缘5 cm以外的正常大肠组织作对照。

　　1.2　试剂和方法

　　hTERT兔抗人多克隆抗体、Survivin兔抗人多克隆抗体、bcl-2鼠抗人单克隆抗体均购于博士德公司。采用免疫组织化学SABC法。实验步骤严格按照说明书进行。用PBS代替一抗作阴性对照，用已知结肠癌阳性片作阳性对照。

　　1.3　结果判定

　　hTERT染色以细胞核染成棕黄色为阳性，Survivin以细胞质染成棕黄色、bcl-2以细胞质或细胞膜染成棕黄色为阳性。参考美国亚利桑那州癌症中心病理科及有关的文献标准[6]，随机读取l 000～l 500个细胞，按照肿瘤细胞着色数量多少，半定量法分为4级：不着色为阴性(-)，阳性细胞数<25%为弱阳性(+)，阳性细胞数25%～50%为阳性(++)，阳性细胞数>50%为强阳性(+++)。

　　1.4　统计学处理

　　采用SPSS16.0统计分析软件进行分析，采用χ2检验和非参数秩和检验，检验水准α=0.05。

　　2　结果

　　2.1　hTERT的表达

　　52例结肠癌组织中阳性表达42例(图1)，阳性率为80.8%;相应正常结肠组织中无一例阳性表达。结肠癌与正常结肠组织hTERT的表达率差异具有统计学意义(P<0.01)。

　　2.2　hTERT表达与结肠癌临床病理特征的关系

　　hTERT的表达与年龄、性别和浸润深度无关(P>0.05)，而与分化程度、淋巴结转移、Dukes分期有关(P<0.05，表1)。

　　2.3　Survivin的表达

　　52例结肠癌组织中Surivivn阳性表达40例(图2)，阳性率为76.9%;相应正常结肠癌组织中无一例阳性表达。结肠癌与正常组织Survivin表达率差异具有统计学意义(P<0.01)。

　　2.4　bcl-2的表达

　　52例结肠癌组织中阳性表达36例(图3)，阳性率为69.2%;相应正常结肠组织中有5例阳性表达，阳性率为9.6%。结肠癌与正常组织bcl-2的表达率差异有统计学意义(P<0.01)。

　　2.5　结肠癌组织中hTERT与Survivin和bcl-2表达的相关性

　　在52例结肠癌组织中hTERT与Survivin以及hTERT与bcl-2之间呈正相关(r=0.589，P<0.05，表2;r=0.559，P<0.05)。

　　3　讨论

　　人端粒酶是一种核糖核蛋白复合物，由hTERT、人端粒酶RNA组分(hTR)以及人端粒酶相关蛋白(hTEP1等)组成。研究表明，在80%～90%的人体肿瘤中有端粒酶的激活[7]。端粒酶作为肿瘤发生、发展过程中一个重要分子生物学标志在肿瘤诊断及其预后判断上所起到的作用已受到广泛重视[8]。大量文献报道，hTERT在胃癌、肝癌、结肠癌中呈高表达[9-12]。本研究表明，hTERT在结肠癌中的阳性表达率为80.8%，而在相应正常结肠组织中无表达，表明hTERT和结肠恶性肿瘤的发生密切相关，对结肠癌的良恶性肿瘤有鉴别价值;同时，在14例低分化结肠癌中，全都有hTERT的表达，提示hTERT的表达与结肠癌细胞的恶性程度相关，可以作为判断结肠癌恶性程度和预测生物学行为的良好指标;hTERT的表达在不同分化程度、有无淋巴结转移及不同Dukes分期上差异有统计学意义(P<0.05)，说明hTERT的表达和结肠癌患者的预后密切相关。

　　Survivin最先于1997年由Altier利用效应蛋白酶-Ⅰ从人类基因库中筛选克隆出来。研究表明，Survivin的过度表达与结肠癌的发生、发展、转移、浸润有密切关系[13-15]。目前普遍认为Survivin抑制细胞凋亡的作用在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用。细胞凋亡的启动存在内源性和外源性两条途径，Caspase-3和Caspase-7作为细胞凋亡内外途径的交汇点，位于细胞凋亡通路的下游，在细胞凋亡中起重要作用。Survivin可以直接抑制Caspase-3和Caspase-7的活性，使其无法发挥蛋白水解的功能，阻断细胞的凋亡[16]。Survivin也可通过P21间接抑制Caspase-3而阻断细胞凋亡。bcl-2是较为公认的细胞凋亡抑制基因，其过度表达与结肠癌的发生、演变有密切关系[17]。和Survivin一样主要通过抑制细胞凋亡途径导致结肠癌的发生、演进。但有学者认为，bcl-2通过干扰细胞色素C自线粒体的释放，阻断Caspase蛋白酶连锁反应的激活，进而抑制细胞凋亡[18]。本研究结果显示，Survivin和bcl-2在结肠癌组织中表达阳性率显著高于相应正常结肠组织，且与hTERT的表达呈正相关(P<0.05)，提示结肠癌的发生、演进是一个极其复杂的过程，推测可使细胞“永生化”的hTERT可能与凋亡抑制基因Survivin以及bcl-2之间存在着某种复杂的相互作用网络，参与了结肠癌发生和发展的共同通路。而对共同通路的研究将为结肠癌发生的分子机制和基因治疗等提供更充分的理论依据。

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