脑脊液Cystatin C及β2-MG在神经系统疾病中的临床观察

实验室诊断神经系统疾病的临床实用性指标目前多采用检测脑脊液蛋白质及脑脊液中其它物质如脑脊液中血糖(αu)、氯化物(α)等含量,在结合临床病理特征及其它辅助检查如头颅CT和/或MRI等情况下对神经系统疾病诊治过程中起着重要的作用。随着检验医学技术的逐步发展,除了常规的脑脊液总蛋白、脑脊液微量白蛋白等常规脑脊液临床生化指标外,越来越多的新型脑脊液蛋白质指标进人临床观察、实际应用中,脑脊液胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin C及β2-MG微球蛋白正是其中的两种蛋白质。大量文献证明脑脊液Cystatin C及β2-MG在神经系统疾病诊断、治疗等医疗过程中扮演了重要的角色,但此两种蛋白质之间的关系极少见诸报道。本文观测、分析了多种神经系统疾病患者脑脊液Cystatin C及β2-MG水平,并结合常规脑脊液生化指标,旨在对上述两种蛋白的联合应用及结合其它常规指标的应用提供相关的临床观察及分析。

1对象及方法

1.1对象本研究所有数据来源于我院2010年8月2012年3月间送检的脑脊液临床生化结果,183人,254次检测结果,(144人仅测试1次,其余39人共计完成110次检测);男性104人,女性79人。所有检测结果均包括脑脊液中胱氨酸蛋白酶抑制剂C、脬微球蛋白、脑脊液总蛋白和脑脊液微量白蛋白及其它脑脊液常规生化检测指标,部分数据根据临床需求检测了(血清白蛋白/脑脊液微量白蛋白比值,sAlb/MA1b)。所有患者均经临床明确诊断,均为神经系统疾病患者或其它非神经系统患者但合并神经系统症状,具体疾病分类见表1。

1.2生化指标及测定

1.2.1指标测定本研究所有临床生化指标测定均在日立7600ll10全自动生化分析仪上进行;β⒉MG及Cystath C浓度测定均采用乳胶增强免疫比浊法,TP测定采用浊度法,MAlb采用免疫比浊法,为脑脊液MAlb浓度/血清Alb浓度,并计算脑脊液MAlb/TP比值。所有标本均在送检后2~4h候内完成测试。

1.2.2分组及统计(1)有文献报道脑脊液中β2—MG正常参考值为<2.2mg/L,与其它文献对比有较大差距[2〗,且本研究中采用的数据均来源于神经系统疾病患者或非神经系统疾病但有神经系统症状患者,故本研究中按照实际观测阳一MG四分位将254次检测结果分组,采用单因素方差分析(ANOVA),对比分析组间Cystadn C、TP、MAlb及MAlb/TP值;(2)根据QNb将254次检测结果分组,采用单因素方差分析(ANOVA)对比分析组间Cystaun C、β2MG`TP、MAlb及MAlb/TP值;(3)分析190例患者数据(含脑脊液Cystaun C、MG、TP、MAlb及Q知b)中Cystaon C与眵-MG、TP、MAlb及QNb的相关系数显著性检验及β2-MG与TP、MAlb及QNb的相关系数显著性检验;患者基础数据汇总在Excd2010上完成,ANOVA、porwise test(Tukey)及boxp1ot图、相关系数显著性检验均在R forlldows2.15中完成。

2结果

2.1按照脬一MG四分位分组,ANOVA分析及Tukey成对检验结果如图1及表2。所有观测均包含上述生化指标。按照田-MG四分位将所有观测结果分为四组:≤0.810mg/L、0.810~1.465mg/L、1165~3.000mg/L及)3.000mg/L,各组观测数分别为″=66、刀=61、刀=63及″=64。ANOVA结果显示:各组间CyStatin C、MAlb及TP比较差异均有统计学意义,而MNb1/TP比值组间比较差异无统计学意义(P分别为0,0○863、(2e15、(2e16及0,167);Tukey分析显示:除脬一MG≤0,810mg/L组与0.810~1.465mg/I冫组及1.465~3000mg/L组Cystaun C组间P<0,1(0.0841及0,0109)外,其余组间Cystaon C比较P均)0,1;而除外″-MG为0,810~1。迮65mg/I'组与≤0,810mg/I'组及1.465~3,000 mg/I冫组MA1b和TP组间比较P)01(MAlb:0,9075,0,3286;TP:0.9416,0.2195)外,其余组间M川b及TP比较P均(0,1(≤0.810mg/I'组与1.465~3.000mg/L组组间MAlb及TP比较P分别为0,0786及0.0566,其余P均<0.001)。

2.2 190例含Qmb数据按照Qmb分组对比组间C阝taⅠn C、β⒉MG、MAlb及TP结果见图2及表3。190例观测均包含上述生化指标。按照QAb将所有观测结果分为四组:≤9,0、9,0~15.0、15.0~30,0及)30.0,各组观测数分别为″=110、刀=33、″=31及死=16。ANO、叭结果显示:根据Qslb分组,组间脬一MG、MA1b及TP比较差异均有统计学意义(P<2c16),而组间Cysta“nC比较差异无统计学意义(P)0。D;Ttlkey分析显示:除QAlb≤9,0组与9.0~15.0组组间比较及15,0~30.0组与)30,0组组间比较田-MG差异无统计学意义外(P分别为0,132及0.32D,其余组间田一MG比较差异均有统计学意义(P<0.00D;各组间MAlb及TP比较差异均有统计学意义(P<0.00D;但各组间Cystaon C比较均差异无统计学意义(P>0。D 

2.3 190例患者数据(含脑脊液Cystaun C、脬-MG、TP、MAlb及QAb)中C阝忱dn C与β⒉MG、TP、MAb及QNb的相关系数显著性检验及β2—MG与TP、MAlb及QNb的相关系数显著性检验结果见表4。由表4可见,C阝忱“nC与脬-MG相关系数显著性检验差异有统计学意义(P(0,01),与TP、MAlb及Q川b均呈负相关,其相关系数显著性检验差异无统计学意义(P>0.05);β⒉MG与Crta吐nC、TP、MAlb及QNb相关系数显著性检验差异均有统计学意义(P(0,01)。3讨论神经系统疾病患者脑脊液中蛋白质的检测对疾病的鉴别诊断、治疗方案的确定及预后等有重要价值。近年来,多种脑脊液中蛋白质的重要价值逐渐被探索;诸如脑脊液蛋白(TP)、脑脊液白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)等在判断血一脑脊液屏障受损、鞘内合成等方面具有重要的价值[3];而血-脑脊液屏障是由脑毛细血管内皮细胞、基膜和神经胶质膜结构形成的血浆和脑细胞外液间的屏障,通常限制分子量)40kD的物质自由通过,只允许离子和水等小分子以及脂类物质通过,对维持中枢神经系统内环境的稳定具有极其重要的意义。目前大量的研究证明MAlb与SALB的比值QNb是反映其损伤的灵敏指标。Cystath C是一种分子量13的小分子蛋白质,是C阝tan超家族中的一种;在人体中主要作为组织蛋白酶的抑制剂,多种有核细胞均可分泌,能够参与微生物侵袭及炎症的调控。脑脊液中的Cystatin C浓度较血清中高5倍左右,其来源多为柔脑膜产生△5i。研究证明多发性硬化、格林一巴利综合症等神经系统疾病中脑脊液CystanC显著降低,且与组织蛋白酶B及H的高活力有关L6丬菡脊液CystanC在神经系统疾病中的表现各不相同,在脑实质受损的疾病中表现出明显的下降趋势,而在非脑实质受损的疾病中下降趋势不明显或处于较高水平[7]。本次研究表明:伴随QNb变化,组间脑脊液Cystatin C比较差异并未表现出明显的统计学意义,且Cystaon C与Qmb相关性较差,可能的机制为:脑脊液Cystdtin C分子量虽远,但其主要来源于柔脑膜,其分泌主要由神经元及胶质细胞产生。血一脑脊液屏障的通透性对该物质在脑脊液中的分布产生的影响较小,血-脑脊液屏障的受损不足以影响其在脑脊液中表达水平的变化,结合其在脑脊液中的水平远高于血清中;血脑屏障两侧Cystaun C浓度梯度亦不是其脑脊液中分布的影响因素。更进一步证实了脑脊液C阝taun c是脑源性蛋白质,主要来源于脑部神经细胞的分泌,其参与组织蛋白酶B及H的调控可能也主要局限于神经系统。

βMG同样系体内有核细胞产生的多肽低分子蛋白(<1l,8kD),其分子量与CyStaon C相当接近,在组织器官出现免疫应激、炎症反应等情况时由细胞产生增加。有研究表明中枢神经系统感染时,血清中β2-MG无明显增加,而脑脊液中含量显著升高h;本研究证明:伴随QNb变化组间田一MG比较差异有统计学意义,脬一MG与QNb的相关性较好;乩作为判断血一脑脊液屏障受损的灵敏指标,其水平的上升表明了血一脑脊液屏障受损的逐步恶化,从而导致血清中的多种病原物质通过受损的血一脑脊液屏障逐步侵袭至脑部组织尤其是与脑室临近的脑部组织,进一步导致了脑部组织有核细胞应激分泌β2-MG增加。中枢神经系统疾病时,脑脊液中TP多会出现,尤其在脑膜炎、脑膜脑炎等疾病时,TP和MNb更会明显增加。本研究表明TP和MA1b的增加和脬-MG的增加保持一致;脑脊液Cystatin C及β2-MG有一定程度的相关,但与TP和MAlb相关性较差,脑脊液Cystatin C及β2-MG表达水平和脑脊液TP和MAlb的表达水平不一致,而与疾病和脑组织受损部位有关。

综上,Cystatin C及β2-MG虽均为分子量较小、且分子量大小极为接近的有核细胞分泌的蛋白质,但在神经系统疾病中的表达形式却不尽相同:脑脊液Cystatin C主要作用在于对抗病毒等物质侵袭神经系统导致组织蛋白酶水平的上升,而田一MG则可能系血清中病原物侵袭神经系统而致脑部细胞分泌增加;但此两种蛋白质相关系数显著性统计分析差异有统计学意义则表明了:β2—MG在病理情况下的应激性增加有可能是脑脊液Cystd吐nC水平维持一定程度的高水平表达的影响因素之一。囚此我们认为:此两种蛋白在脑脊液中虽由不同的部位产生及分泌,且其作用机理不尽相同,但并不应该完全割裂开其关系,而应在神经系统的诊治过程中统一分析脑脊液Cystatin C及β2-MG水平,并结合其它蛋白指标的情况下,可能对判断神经系统疾病具有重要价值,对提示神经系统疾病的严重程度及预后亦可能有重要价值,也在—定程度上对认识神经系统疾病的病理过程有价值。

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