NO及oxLDL水平与消化性溃疡的相关性研究

　　作者：张进，疏仁旺，马景德 作者单位：解放军第456医院，山东 济南 250031

　　【摘要】 目的 探讨NO和oxLDL在消化性溃疡时的合成分泌情况及其作用机制。方法 用分光光度法和酶联免疫吸附法分别检测了57例消化性溃疡患者血中的NO和oxLDL含量。结果 胃及十二指肠溃疡患者血清NO水平分别为 (0.38±0.25)μmol/L和(0.49±0.23)μmol/L均较正常人的(0.66±0.18)μmol/L明显降低，血浆oxLDL的水平分别为(0.67±0.09)mg/L和(0.52±0.09)mg/L较正常人(0.32±0.07)mg/L明显升高(P<0.01)，且胃溃疡(GU)与十二指肠溃疡(DU)间存在显著性差异(P<0.05)，血清中的NO水平与溃疡直径呈明显负相关(r=-0.453 8);血浆oxLDL水平溃疡直径呈显著正相关(r=0.437 4，P<0.05)。结论 NO对消化性溃疡的发病有一定作用，oxLDL可能参与了溃疡的形成过程，有效地调节NO在胃十二指肠黏膜中的生成含量，限制LDL的氧化修饰，对预防和治疗胃十二指肠溃疡具有重要意义。

　　【关键词】 一氧化氮,氧化修饰低密度脂蛋白,胃溃疡,十二指肠溃疡

　　消化性溃疡(peptic ulcer diseases, PUD) 的发病机制是多因素影响的复杂过程，主要由化学物质，间接的血管损伤，幽门螺旋菌(HP)感染、缺血和炎症介质引起。一氧化氮(nitric oxide, NO)是由左旋精氨酸(Larg)与分子氧在NO合酶(NOS)的催化下转换为L胍氨酸时生成的，作为一种神经递质，在炎症和组织细胞的损伤[1]和增殖、胃肠运动的调节及其黏膜保护[2]等生理功能和病理生理过程中起着重要作用。氧化修饰低密度脂蛋白(oxidatively modified low density lipoprotein，oxLDL)源于LDL脂质中多不饱和脂肪酸的过氧化作用，其既具有强烈趋化活性，促使循环单核细胞进入内皮下，又具有细胞毒性，可使内皮细胞损伤剥脱，与动脉粥样硬化的关系密切，而其对消化性溃疡有何影响报道不多。为了解NO和oxLDL在胃十二指肠溃疡时的合成分泌情况，及其与溃疡面大小的关系，探讨二者在胃十二指肠溃疡中的作用机制，我们对57例胃、十二指肠溃疡患者血清(浆)中的NO及其oxLDL含量进行了检测研究。

　　1 对象与方法

　　1.1 病例选择 选择门诊及住院病人57例，男性43例，女性14例，其中胃溃疡(gastric ulcer，GU)患者23例，十二指肠溃疡(duodenal ulcer，DU) 患者34例，年龄在24~63岁之间，平均35.7岁，均为活动性溃疡，溃疡直径为(2. 98 ±2.03)cm，且均>0.5 cm，并经病理学或内镜证实;同时将所有溃疡患者， 按溃疡直径大小分为3个亚组：A组：溃疡直径<1 cm (n=16)，B组：1.0～2.0 cm (n=23)，C组：> 2 cm (n=18)。

　　1.2 健康对照组 选择68例健康查体者，年龄在14~67岁之间，平均42.9岁，均排除心血管疾病及胃肠道疾病。

　　1.3 方法 采集空腹12 h 静脉血标本，分为两管，一管加入样品保护剂，另一管注入普通试管内，常法分离血浆及血清，于-20 ℃ 下保存待测。血浆标本采用单克隆抗体(McAb)酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法，与酶标记的oxLDL发生反应，经二次孵育后终止反应，在492 nm 波长下用南京产DG5030型酶联免疫检测仪比色，按标准曲线法测定oxLDL的含量，试剂盒购自南京聚力生物医学研究所。血清标本采用Griess法[3]，反应原理为NO2与磺酸及萘乙烯二胺盐酸盐作用可生成粉红色偶氮化合物，以荷兰产ISPⅡ型生化分析仪在546 nm 处测定NO2/NO3的量间接推算出NO的含量，试剂盒购自解放军军事医学科学院放射医学研究所;统计处理采用样品均数t检验及等级相关分析。

　　2 结果

　　胃及十二指肠溃疡患者血清NO水平均较正常人明显降低，血浆 oxLDL的水平较正常人明显升高(P<0.01)，且GU与DU间也有显著性差异(P<0.05)，详见表1。病人亚组分析显示：溃疡直径较大者，其血清中的NO水平则较低，与溃疡直径呈明显负相关(r=-0.453 8);溃疡直径较大者其血浆中oxLDL水平也较高，与溃疡直径呈显著正相关(r=0.437 4,P<0.05)。

　　表1 消化性溃疡时NO和oxLDL的水平(略)

　　①与对照组比，P<0.01;②与GU组比，P<0.05

　　3 讨论

　　胃黏膜损伤是胃黏膜微循环调节障碍、胃黏膜血流减少所致。Kugler等[4]研究发现，在富含黏液的胃黏膜细胞部分和主细胞中NOS活性最大，而NOS是合成NO的关键酶，由此可推断NO调节着胃上皮细胞的功能。NO的合成与分泌受许多因素调节，胃酸分泌，胃肠运动，迷走神经功能异常等均可影响其产生。也有研究认为，胃黏膜内NO来源于吞噬细胞和多形核白细胞[5]，并可使胃黏膜血管扩张，抑制胃黏膜微循环的血小板凝集，改善血管的通透性，增加胃黏膜的完整性，具有保护作用[2]。NO除直接扩张血管外，也可作为其他扩血管物质的协同因子或终末介质[6]，介导胃黏膜的生理或病理性充血反应[7]，保护胃黏膜[8]。其机制普遍认为是NO介导胃黏膜产生前列腺素和增加胃黏膜血流量来实现的。本研究证实，胃及十二指肠溃疡患者血清NO水平降低，说明NO对消化性溃疡的发病有一定作用，提示患者体内作为舒血管的活性物质NO生成减少，使胃肠黏膜血管持续性收缩，而造成胃肠黏膜的缺血缺氧，并使机体产生大量的氧自由基以对脂蛋白进行化学修饰，使得oxLDL含量升高，损伤胃肠黏膜。同时由于NO的含量下降，导致NO抑制胃酸分泌及胃黏膜保护作用降低，进一步促进溃疡病的发展，使溃疡面加大。病人亚组分析可见，随溃疡面直径增大，血清NO下降更明显，并呈进行性变化，NO与溃疡直径呈等级负相关，提示NO可能是溃疡面扩大的促进因子抑或独立的致病因素。由于溃疡损伤了胃黏膜及腺体，并进一步引起黏膜和腺体的萎缩而导致胃酸分泌减少，也造成了NO生成减少。NO在胃肠运动和胃排空中的作用尚存争议[8~10]，多数文献认为NO可抑制胃排空，由于消化性溃疡患者血清NO降低使得胃排空能力增强，胃酸排出增多，一方面相对加大了胃内的碱环境，利于胃内细菌过度生长繁殖;另一方面胃酸排出增多加重了十二指肠的酸负荷，易造成十二指肠黏膜的损伤。同时，消化性溃疡时NO减低可使胃黏膜血管呈无规律性收缩，从而导致胃黏膜缺血，胃黏膜缺血可使黏膜内的能量亏损，H+逆行扩散增加，胃清除胃酸的能力降低，以致发生胃黏膜糜烂、溃疡形成和出血。Takeuchi等[11]发现NO对胃酸分泌有抑制作用，并可刺激HCO3-分泌物增加，消化性溃疡时NO含量下降，可使胃酸分泌增加，HCO3-分泌减少，加重了胃黏膜的酸负荷，导致了胃黏膜的进一步损害。至于NO含量在胃溃疡时明显低于十二指肠溃疡的结果，我们认为可能是胃黏膜中NOS的活性明显高于肠黏膜，当黏膜受到同等损害时胃黏膜NOS的活性较十二指肠黏膜NOS的活性下降明显，以致NO的生成量减少更多的缘故。本组结果，胃及十二指肠溃疡患者oxLDL水平升高，提示可能参与了溃疡的形成过程，作为毒性趋化因子加深溃疡的创伤，加之NO的减低延缓了胃的排空能力，增强了盐酸的胃黏膜损伤。其机制可能是活性氧修饰LDL后，携带氧自由基的LDL进入胞内，与胞内大分子如核酸、蛋白质、脂肪等共价结合，破坏细胞内成分。也可能是胃肠黏膜受多因素影响使血流量减少之后，氧自由基生成增多，加速了LDL 的氧化修饰，一方面oxLDL本身的毒性作用造成胃肠黏膜损害;另一方面由于NO的生成减少，从而导致胃肠道血管收缩，使胃肠黏膜毛细血管淤血，诱导溃疡病变的形成，当然也不排除oxLDL含量升高所导致的NOS活性受抑制引起NO生成减少的因素。本研究结果提示，溃疡直径与oxLDL含量呈正相关，提示oxLDL可能是造成溃疡的首要因素，或是使溃疡面进一步增大的促进因子。由于NO的合成分泌减少，使得胃肠肌肉的收缩性增强，从而诱发胃肠黏膜缺血，进一步造成氧自由基生成增多，进而oxLDL水平大增，造成胃肠黏膜损伤，形成糜烂和溃疡并进一步增大溃疡创面。至于oxLDL在胃溃疡时明显高于十二指肠溃疡时的结果，我们认为可能是由于在机体组织中以肠黏膜绒毛的黄嘌呤氧化酶含量最高，对部分缺血性损伤最敏感的缘故。总之，体内NO和oxLDL的生成互为因果，有效地调节NO在胃十二指肠黏膜中的生成含量，限制LDL的氧化修饰，提高NO的胃肠黏膜的保护作用，减少oxLDL对胃肠道黏膜的损伤，对预防和治疗胃、十二指肠溃疡具有重要意义。

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