慢性丙型肝炎患者血清抗Hp抗体与临床特征的关系

　　作者：张永贵 王江滨 季尚玮 作者单位：吉林大学中日联谊医院消化内科，吉林 长春 130033

　　【摘要】 目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)在慢性丙型肝炎中的作用。方法 采用病例对照研究的方法分析282例慢性丙型肝炎患者的Hp感染状况与年龄变化、HCV RNA载量和HCV RNA分型的关系。结果 Hp感染率随年龄变化无明显差异(P>0.05)，Hp感染率在慢性丙型肝炎组(55.6%)、丙型肝炎肝硬化组(76.5%)和丙型肝炎合并肝癌组(78.6%)明显高于健康对照组(43.4%)(均P<0.01)，各组与慢性胃炎组(57.9%)相比较无明显差异(P>0.05)，其中肝硬化组和合并肝癌组Hp感染率均高于肝炎组(P<0.05)。不同病毒载量的慢性丙型肝炎患者的Hp感染率均明显高于健康对照组(P<0.01)，但不同病毒载量之间无明显差异(P>0.05)。慢性丙型肝炎患者基因1a型、1b型、2a型和2b型患者Hp感染率分别为60.0%、64.8%、61.0%和62.7%，各基因型之间比较无明显差异(P>0.05)。结论 慢性丙型肝炎患者Hp感染率明显增加，且Hp感染率随着肝病病变程度的进展而增加。

　　【关键词】 幽门螺杆菌;慢性丙型肝炎;HCV RNA

　　基金项目：国家自然科学基金资助项目(30670300)

　　Detection of anti-Hp-IgG seroprevalence and its relation to aging，HCV load and HCV genotypes in patients with chronic hepatitis C

　　ZHANG Yong-Gui, WANG Jiang-Bin, JI Shang-Wei.

　　Gastroenterology and Hepatology Department, China-Japan Union Hospital of Jilin University, Changchun 130033, Jilin, China

　　【Abstract】 Objective To explore the role of Hp in chronic hepatitis C. Methods The seroprevalence of Hp infection with different age and the quantity and genotyping of HCV RNA in 282 chronic hepatitis C patients were detected. Results Hp seropositivity had no significant difference in patients with different age (P>0.05). Hp seropositivity was more prevalent among patients with chronic hepatitis C (55.6%), chronic cirrhosis of HCV (76.5%), and HCV-related HCC (78.6%) than that in controls of blood donors (43.4%) (P<0.01); but had no obvious difference from that in chronic gastritis (57.9%) (P>0.05); that of chronic cirrhosis group and HCC group was higher than that in chronic hepatitis group (P<0.05). Hp seropositivity in the patients with different quantity of HCV was higher than that in blood donors (P<0.01); but there was no significant difference among the different quantity of virus (P>0.05). Hp seropositivity in chronic hepatitis C patients with genotype 1a，1b，2a and 2b was 60.0%, 64.8%, 61.0% and 62.7% respectively. But there was no significant difference among the genotypes (P>0.05). Conclusions Seroprevalence of antibodies to Hp is found to be higher in patients with chronic hepatitis C，and Hp seropositivity increases with pathological changes of chronic hepatitis C.

　　【Key words】 Helicobacter pylori; Chronic hepatitis C; HCV RNA

　　近年来研究发现同为慢性丙型肝炎，在除外饮酒、药物、自身免疫、代谢、遗传易感等因素外，患者之间的临床表现及疾病转归却存在巨大差异，因此，人们一直在寻找并研究与嗜肝病毒在慢性肝损伤及癌变发生过程中具有协同作用的其他感染因素。1992年Fox等在A/J Cr小鼠的胆囊和胆小管中发现螺杆菌样细菌〔1〕。进一步的研究表明该螺杆菌可引起某些品系的小鼠发生慢性活动性肝炎,并能导致敏感小鼠的肝癌。已有研究者在慢性病毒性肝炎患者的肝脏等组织中发现幽门螺杆菌(Hp)及其他螺杆菌属DNA的存在〔2～4〕，提示螺杆菌属感染可能在慢性病毒性肝炎的发生、发展过程中发挥重要作用。本研究旨在探讨Hp感染与慢性丙型肝炎之间的关系，分析其在慢性丙型肝炎中的致病作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 病例组为吉林大学中日联谊医院2005年1月至2007年6月期间门诊及住院的HCV RNA定量检测阳性的慢性丙型肝炎患者282例(男148例，女134例，年龄22～80岁)，诊断符合2004年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会《丙型肝炎防治指南》中有关标准，其中慢性丙型肝炎189例，慢性丙型肝炎肝硬化51例，慢性丙型肝炎合并肝癌42例。除外合并其他肝病因素如自身免疫性疾病、代谢性疾病、饮酒、药物等，且各组病例1个月内均未接受过抗生素治疗。健康对照组为同期健康献血者327例(男性210例，女性117例，年龄25～50岁)。慢性胃炎组为同期经胃镜诊断为慢性胃炎患者328例(男175例，女153例，年龄21～83岁)。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 Hp感染的检测及判定 采用Hp流行病学诊断标准中的血清学试验诊断法，即应用酶联免疫吸附测定法(试剂盒由华美生物工程公司提供)检测被检者血清中anti-Hp-IgG判定是否存在Hp感染。

　　1.2.2 HCV RNA定量检测 采用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测血清中HCV RNA的含量。检测试剂盒由广州中山大学达安基因股份有限公司提供。

　　1.2.3 HCV RNA分型 采用聚合酶链反应-微板核酸杂交-酶联免疫测定法，即选取HCV RNA核心区的保守序列作引物，通过聚合酶链反应法扩增患者的血清标本，然后再与特异性探针夹心杂交，最后通过酶联显色对血清中HCV基因型进行检测。试剂由中国广州第一军医大学蓝星生物科技开发有限公司提供。

　　1.3 统计学方法 应用SPSS11.0软件，样本均数的比较采用t检验，率的比较采用χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 慢性丙型肝炎患者Hp感染率的调查 结果显示慢性丙型肝炎患者Hp感染率为62.8%，明显高于健康对照者的43.4%(P<0.01);接近于慢性胃炎组的57.9%(P>0.05)。282例慢性丙型肝炎患者根据疾病程度又分为肝炎、肝硬化及合并肝癌组，Hp感染率分别为慢性丙型肝炎组55.6%，丙型肝炎肝硬化组76.5%，合并肝癌组78.6%，高于慢性丙型肝炎组(P<0.05)。见表1。

　　表1 慢性丙型肝炎患者Hp感染率的调查(略)

　　与健康对照组比较：1)P<0.01，与慢性丙型肝炎组比较：2)P<0.05

　　同时再将282例慢性丙型肝炎患者分为30岁以下、30～39岁、40～49岁、50～59岁及60岁以上5组, 分析不同年龄组中的Hp感染情况，结果显示不同年龄分组之间的Hp感染率无明显差异(P>0.05)。详见表2。

　　表2 不同年龄组慢性丙型肝炎患者Hp感染率的调查(略)

　　2.2 血清HCV RNA载量与Hp感染的关系分析 对282例慢性丙型肝炎患者按照HCV RNA载量进行分组，分别比较各组之间Hp感染状况，结果显示不同HCV RNA载量组Hp感染率均明显高于健康对照者(P<0.01)，但不同病毒载量之间无明显差异(P>0.05)，详见表3。

　　2.3 不同基因型慢性丙型肝炎患者Hp感染率分析 本组282例慢性丙型肝炎患者中以基因1b型患者为主，占38.3%，Hp感染率64.8%(70/108);基因2b型患者次之，占26.6%，Hp感染率62.7%(47/75);基因2a型和基因1a型分别占20.9%和14.2%，Hp感染率分别为61.0%(36/59)和60.0%(24/40)。各组之间Hp感染率比较无统计学意义(P>0.05)。

　　表3 慢性丙型肝炎患者血清病毒载量与Hp感染的关系分析(略)

　　与健康对照组比较：1)P<0.01

　　3 讨论

　　HCV是慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌的主要致病因素。除此之外是否还存在其他协同致病因素，倍受人们的关注并成为该研究领域的热点。近年来, Hp与肝脏疾病的关系已被许多学者广泛关注。国外报道的几组流行病学研究表明，HCV感染相关性肝硬化及合并肝癌患者的血清Hp抗体阳性率明显高于健康献血者〔5,6〕。Rocha等〔7〕检测了109例肝病患者的肝组织，发现慢性丙型肝炎组、丙型肝炎病毒阳性肝硬化组和丙型肝炎病毒阳性肝硬化合并肝癌组分别有4.2%、68.0%、61.3%患者肝组织中存在螺杆菌特异的16S rRNA基因，即肝脏组织中存在螺杆菌DNA，并与丙肝肝硬化进展相关，这些细菌的存在能够导致肝脏结构的改变，螺杆菌可能是HCV相关性慢性肝病的协同危险因素。Avenaud等在8例肝癌标本中发现了螺杆菌16S rDNA 存在，测序证明与Hp具有99%同源性〔4〕。本研究也提示慢性丙型肝炎患者Hp感染率明显增加，且随着肝病病变程度的进展，Hp感染率亦明显增加，与上述Spinzi、Pellicano和Rocha等人的研究结果基本相一致，因此认为Hp在慢性丙型肝炎(尤其是肝硬化和肝癌)的发生发展中可能与HCV发挥协同致病作用;但不同年龄分组之间的Hp感染率无明显差异，且不同HCV RNA载量之间Hp感染率无明显差异，提示Hp感染率与HCV RNA载量之间缺乏相关性。

　　另外，已有研究表明宿主因素在慢性丙型肝炎的进展中发挥重要作用，基因1b型丙肝患者肝脏病变进展较迅速，且预后较差〔8〕。本研究也按照HCV基因分型对本地区慢性丙型肝炎患者进行分组后比较各组之间Hp感染状况，结果表明，虽然基因1b型患者Hp感染率最高，基因2b型和2a型患者次之，基因1a型Hp感染率最低，但各组之间Hp感染率比较无统计学意义。因此，现有的调查研究尚未发现Hp感染与HCV RNA基因型之间存在相关性，并且目前国内外尚无相关方面的研究报道可供参考。

　　综上所述，本研究对Hp感染与HCV在慢性丙型肝炎发生发展中可能的协同作用做了初步探讨和研究，考虑可能的协同致病作用为：Hp感染与HCV感染均是慢性持续性感染过程，持续性感染可诱发慢性炎症反应和免疫应答反应，他们在局部的感染就可能引起全身的系统性反应，导致感染局部位置和其他部位的损伤〔9～12〕。但上述观点仅为探讨Hp感染与慢性丙型肝炎相关性的可能发病机制，具体发病机制如Hp感染，特别是毒力菌株释放的毒素对肝细胞的炎症、坏死、凋亡、肝纤维化、肝癌的发生机制以及是否伴有其他螺杆菌的感染还有待于进一步研究。

　　【参考文献】

　　1 Fox JG，Dewhirst FE，Tully JG，et al. Helicobacter hepaticus sp. nov., a microaerophilic bacterium isolated from livers and intestinal mucosal scrapings from mice〔J〕. J Clin Microbiol, 1994;(5):1238-45.

　　2 Penzetto A, Pellicano R, Leone N, et al. Helicobacter infection and cirrhosis in hepatitis C virus carriage: is it an innocent bystander or a troublemaker? 〔J〕. Med Hypotheses, 2000;54(2):275-7.

　　3 Nilsson HO, Taneera J, Castedal M, et al. Identification of Helicobacter pylori and other Helicobacter species by PCR, hybridization, and partial DNA sequencing in human liver samples from patients with primary sclerosing cholangitis or primary biliary cirrhosis〔J〕. J Clin Microbiol, 2000;(3):1072-6.

　　4 Avenaud P, Marais A, Monteiro L, et al. Detection of Helicobacter species in the liver of patients with and without primary liver carcinoma〔J〕. Cancer, 2000;89(7):1431-9.

　　5 Spinzi G, Pellicano R, Minoli G, et al. Helicobacter pylori seroprevalence in hepatitis C virus positive patients with cirrhosis: the Como cross-sectional study〔J〕. Panminerva Med, 2001;43(2):85-7.

　　6 Pellicano R, Leone N, Berrutti M, et al. Helicobacter pylori seroprevalence in hepatitis C virus positive patients with cirrhosis〔J〕. J Hepatol, 2000;33(4):648-50.

　　7 Rocha M, Avenaud P, Ménard A, et al. Association of Helicobacter species with hepatitis C cirrhosis with or without hepatocellular carcinoma 〔J〕. Gut, 2005;54(3):396-401.

　　8 Delic' D, Nesic' Z, Prostran M, et al. Histopathology of chronic hepatitis C in relation to virus genotype〔J〕. Vojnosanit Pregl，2006;63(9):819-25.

　　9 Pappo J, Jorrey D, Gastriotta L, et al. Helicobacter Pylori infection in immunized mice lacking major histocompatibility complex class I and class II functions〔J〕. Infect Immun, 1999;67(1):337-41.

　　10 Baldari CT, Lanzavecchia A, Telford JL. Immune subversion by Helicobacter pylori〔J〕. Trends Immunol, 2005;26(4):199-207.

　　11 Yamaoka Y, Kita M, Kodema T, et al. Helicobacter Pylori cagA gene and expression of cytokine messenger RNA in gastric mucosa〔J〕. Gastroenterology, 1996;110(6):1744-52.

　　12 Dore MP, Realdi G, Mura P, et al. Helicobacter infection in patients with HCV-related chronic hepatitis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma〔J〕. Dig Dis Sci, 2002;47(7):1638-43.