幽门螺杆菌感染与胃癌和癌前病变p53、ras基因表达
发表时间：2010-06-28 浏览次数：379次
作者：李舒，郭莲怡，陈洋 作者单位：辽宁医学院附属第一医院消化科，辽宁 锦州
【摘要】 目的 研究幽门螺杆菌Hp感染的胃癌和癌前病变中p53、ras基因蛋白的表达。方法 美兰和W-S特殊染色方法确定Hp感染和免疫组化方法检测p53、ras基因蛋白表达。结果 1. 慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠化生(IM)、异型增生(DYS)、胃癌(GC)中Hp感染率均高于浅表性胃炎(CSG)(P<0.05 );2. 在GC中p53,ras的阳性表达率显著高于IM(P<0.01)，在IM中两者的阳性表达率要高于CAG(P<0.05);3.在IM中，Hp阳性组p53的阳性表达率高于Hp阴性组(P<0.05),在DYS和GC中，Hp阳性组p53、ras的阳性表达率均高于其阴性组(P<0.05)。结论 Hp感染在胃粘膜病变的演变过程中起着重要作用，Hp感染与胃癌发生过程中的p53、ras密切相关，同时Hp可能作为促癌剂在胃癌的发生中起一定作用。
【关键词】 幽门螺杆菌;胃癌;癌前病变;p53;ras
Helicobacter Pylori Infection and the Expressions of p53,
ras Gene in Gastric and Precancerous LesionsLI Shu, GUO Lianyi, CHEN Yang
(Digestive Department, the First Affiliated Hospital to Liaoning Medical University, Jinzhou 121001 China)Abstract:Objective To study the association between Helicobacter pylori (Hp) infection and the expression of p53, ras gene in gastric cancer and precancerous lesions. Methods Methylene blue staining and Warthin-Starry method were used to determine Hp. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of p53, ras gene protein. Results 1. The positive rate of Hp in chronic atrophic gastritis (CAG), intestinal metaplasia (IM), Dysplasia (DYS) and gastric cancer (GC) was significantly higher than that in CSG(P<0.05).2. The positive expression rate of p53, ras in GC was higher than that of IM in GC (P<0.01), the positive expression rate of p53, ras in IM was higher than that in CAG (P<0.05).3. The positive expression rate of p53 in IM with Hp positive was higher than that in IM with Hp negative (P<0.05). The positive expression rate of p53 and ras in DYS and GC with Hp positive was higher than that in DYS and GC with Hp negative (P<0.05). Conclusions Hp infection may play an important role in the development of gastric mucosal lesion. Hp infection was closely correlated with p53 and ras gene in the genesis of GC. Hp might act as a tumor promoter in the genesis of GC.
Key words: Helicobacter pylori(Hp); gastric cancer; precancerous lesion; p53; ras
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发生是一个多阶段、多因素参与的复杂过程。幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌密切相关，但在Hp诱导胃癌发生中的确切机制尚不清楚。本文通过检测 p53、ras的表达，探讨Hp感染与抑癌基因、癌基因的关系。
1 资料和方法
1.1 一般资料
选取2006—2007年胃镜检查和胃癌手术切除标本共计175 例，男性100 例，女性75 例，年龄18～85岁，平均(56.32±21.05) 岁。其中浅表性胃炎(CSG)32 例、慢性萎缩性胃炎(CAG)32 例、肠化生(IM)34 例、不典型增生(DYS)32 例、胃癌(GC)45 例，胃癌患者在手术前均未接受化疗、放疗或者免疫治疗;所有患者在取病理或者手术前4周均没有接受根除Hp治疗和服用质子泵抑制剂，并排除胃黏膜相关淋巴瘤标本，全部标本均经病理诊断证实。标本离体后迅速用中性福尔马林固定、常规脱水、石蜡包埋、制成4 μm厚连续冷冻切片。
1.2 方法
(1)Hp检测：Warthin～Starry Hp呈杆状，黑色或者棕黑色;美兰染色Hp为蓝色，两项均为阳性者为Hp感染。(2)p53、ras的免疫组化检测：p53,ras单克隆抗体由武汉博士德公司提供，程序按照S-P试剂盒说明书进行，以PBS代替一抗做阴性对照。结果判定：p53染色以细胞核内出现棕黄色至深棕色颗粒为阳性细胞;ras染色见细胞核(和)或者细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞。阳性表达细胞>10%为基因蛋白表达。阳性反应强度分别用弱阳性(淡黄色)、中阳性(棕黄色)、强阳性(棕黑色)表示。
1.3 统计学方法
采用SPSS11.0软件处理，以χ2检验、四格表的Fisher精确检验进行统计分析。
2 结 果
2.1 Hp在五种病变类型中的感染情况
在胃粘膜浅层可见杆状、黑色或者蓝色的Hp，分布于粘膜表面粘液层、表面上皮层、小凹内及腺体颈部，肠化生腺体中Hp很少，但是肠化生患者非肠化生胃粘膜中的Hp感染多见。CAG、IM、DYS和GC的Hp感染率均高于CSG(P<0.05 )，CAG、IM、DYS和GC四者间的Hp感染率没有差异(P>0.05)，见表1。
2.2 比较不同胃粘膜病变组织中的p53,ras基因表达情况
p53在各种类型的组织中均有表达，ras在CAG中开始有表达，其中，在GC中两者的阳性表达率显著高于IM(P<0.01)，在IM中两者的阳性表达率要高于CAG(P<0.05),在DYS及GC中两者的阳性表达率要显著高于CAG(P<0.01)。见表1。 表1 不同病变胃粘膜的Hp感染率及p53,ras基因的表达情况比较*与CSG比较,P<0.05;**与CSG比较，P<0.01;▲与CAG比较，P<0.05;▲▲与CAG比较，P<0.01;#与IM比较，P<0.012.3 Hp感染与两种基因蛋白表达的关系
在IM中Hp阳性组p53阳性表达率高于其阴性组，两者之间有差异(P<0.05),在DYS中，Hp阳性组p53、ras的阳性表达率均高于其阴性组(P<0.05), 在GC中Hp阳性组两者的阳性表达率显著高于其阴性组(P<0.01)，见表2。表2 Hp感染与两种基因表达的关系组织类型nHpnp53
3 讨 论
慢性胃炎-胃粘膜萎缩-肠上皮化生-异型增生-肠型胃癌这一模式，目前已得到广泛认可。Hondans等[1]研究表明Hp感染可引起胃癌，但其机制目前仍无定论，大多学者认为GC可能是Hp长期感染与其他因素共同作用的结果，其中Hp可能起先导作用。本研究对不同的胃粘膜病变就Hp感染和p53，ras基因突变的关系进行探讨。结果发现GC患者Hp感染率明显高于CSG(P<0.05)，同时CAG、IM、DYS病变组分别与CSG比较感染率也有显著差异(P<0.01)，表明GC与Hp的感染有关，进一步说明了Hp感染在胃黏膜癌变中的作用，并且随着病变的加深感染率逐渐下降，这与国外Arif[2]等报道相似,可能因为Hp在胃粘膜癌变的过程中组织不利于Hp生长，特别是癌变后胃内环境改变，更不利于HP生长，Hp难以定值，或导致Hp死亡，同样这提示随着胃粘膜萎缩、肠化及异型增生的出现和加重，Hp的致病作用将逐渐减小，从慢性胃炎发展到胃癌是一漫长的过程，可能起着先导作用.
p53基因为抑癌基因，定位为17号染色体短臂，分野生型和突变型两种。野生型p53的作用主要的生物学功能是充当G1期检查点作用，可引起细胞周期阻滞，使DNA得以修复，从而抑制细胞过度增生、诱导凋亡，协调细胞凋亡与增殖速度，修复损伤的DNA或者通过凋亡清除DNA异常的细胞，以防止细胞的异常蓄积和恶性转化，p53基因突变后表达的突变型p53则失去了抑制细胞增殖、启动DNA修复及诱导细胞凋亡的作用，导致细胞增殖过度、凋亡减少及异常细胞蓄积和转化，导致肿瘤发生[3]。野生型p53基因蛋白半衰期极短(t1/2 约20min)，易水解，难以检测，而突变型p53基因蛋白半衰期较长，不易水解，可用免疫组化技术检测，因此组织中有p53蛋白的高表达，表明有p53基因的突变[4]。本实验结果显示，慢性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌的发展过程中p53随着病变的加重表达呈上升趋势。胃黏膜肠上皮化生的p53阳性表达率高于慢性胃炎(P<0.05);异型增生与胃癌组的p53阳性表达率明显高于慢性胃炎组(P<0.01)，表明突变型p53基因蛋白在癌前病变阶段已经起作用，并继续作用于胃癌病变阶段，表明p53基因突变对胃癌的早期诊断具有重要意义，检测p53蛋白有助于胃癌的早期诊断;同时研究发现IM、DYS、GC组HP阳性者与阴性者p53蛋白阳性表达率比较有差异(P<0.05、P<0.01)，表明Hp感染在p53基因突变中起促进作用，使其失去抑癌功能，使胃上皮细胞易于向癌细胞转化,促进胃癌的发生。
ras是原癌基因，参与细胞生长与分化的调节，起着生物开关的作用，被认为是肿瘤发生的启动基因。正常组织中存在少量激活状态的ras，以维持细胞的正常分化，ras表达主要出现在细胞表型发生转化之前，ras表达水平持续增高，能启动和加速细胞的生长、分化，最终导致细胞的恶化，在多种人类肿瘤中可发现其表达增高[5]。本研究中，ras在慢性胃炎中开始表达，并在病变发展过程中呈逐渐增高趋势，DYS、GC组蛋白表达率与CAG相比差异有显著性(P<0.01)，IM组蛋白阳性率与CAG相比有(P<0.05)说明ras表达是胃癌发生的早期事件。GC、DYS中Hp阳性组ras表达率显著高于Hp阴性组(P<0.01)，可能是Hp感染导致ras基因突变处于激活状态，ras基因蛋白表达量增多的关系。另有研究[6]表明，p53蛋白能促进ras基因的活化，并进一步引起细胞转化和持续增殖，胃癌中ras及p53的阳性表达存在显著的相关性，两者在胃癌组织中有共同阳性表达趋势，即p53阳性组织(一般认为检出的P53蛋白为突变型)大多同时伴有ras蛋白表达，由此推断ras癌基因可被突变型p53基因激活，在胃癌发展病过程中，两者具有协同作用,同时有研究[7]也表明，此两项基因的改变与胃粘膜异型增生与早期胃癌密切相关。
本研究表明，ras、p53基因在胃粘膜的不同病变阶段开始表达并逐渐增高，说明在胃粘膜癌变过程中往往伴有多种癌基因和(或)抑癌基因的协同作用，Hp的感染与胃粘膜癌变密切相关，Hp导致胃粘膜癌变可能是通过上述分子“调控”来实现的，因此，早期进行ras、p53检测，根治Hp对胃癌的防治有积极意义。
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