Tiam 1与PCNA在胃癌中的表达及其临床意义
发表时间：2010-02-05 浏览次数：517次
Tiam 1与PCNA在胃癌中的表达及其临床意义作者：朱金明 余佩武 赵永 作者单位：1 250031 济南，济南军区总医院普通外科； 2 400038 重庆，第三军医大学西南医院普通外科 【摘要】 目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam 1)和增殖细胞核抗原(PCNA)在胃癌中的表达及其与临床病理参数的关系。方法 采用免疫组织化学法对60例胃癌组织及其相应正常胃黏膜组织标本进行检测。结果 ①Tiam 1蛋白在正常胃黏膜组织中为阴性染色，但在胃癌组织中则呈阳性染色(47/60，78.33%)，两者差异有统计学意义(P<0.05)；②胃癌组织中PCNA蛋白标记指数(PCNA LI)(57.49±14.82)显著高于正常胃黏膜组织中的PCNA LI(20.74±6.13)(P<0.05)；③Tiam 1、PCNA蛋白表达均与胃癌组织分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05)，但与胃癌患者的性别、年龄及癌灶原发部位、大小无关(P>0.05)；④Tiam 1阳性表达胃癌组织中的PCNA LI值显著高于Tiam 1阴性表达者(P<0.05)。结论 Tiam 1和PCNA表达上调均与胃癌侵袭转移密切相关，对其进行联合检测有助于判断胃癌的生物学特性。 【关键词】 胃癌 T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1 增殖细胞核抗原 免疫组织化学 Expressions of Tiam 1 and proliferating cell nuclear antigen in gastric cancer and their clinical significance ZHU Jinming, YU Peiwu, ZHAO Yongliang. Department of General Surgery, General Hospital of Jinan Military Command, Jinan 250031, China 【Abstract】 Objective To observe expression of T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1 (Tiam 1) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in gastric cancer and investigate their relationship with clinicopathological parameters. Methods The expressions of Tiam 1 and PCNA in cancer tissues and normal gastric mucosa of 60 cases with gastric cancer were detected by immunohistochemistry method. Results ①Staining of Tiam 1 protein was negative in normal gastric mucosa but positive in gastric cancer (47/60, 78.33%), with significantly statistical difference (P < 0.05). ②PCNA labeling index (LI) in gastric cancer was 57.49±14.82 that was significantly higher than 20.74±6.13 in normal gastric mucosa (P < 0.05). ③Both expressions of Tiam 1 and PCNA were associated with the differentiation degree, invasive depth, TNM stage and lymph node metastasis of gastric cancer (P > 0.05) but not with sex and age of cases as well as primary pathological site or size of the cancer foci (P > 0.05). ④ PCNA LI in cases with positive staining of Tiam 1 was significantly higher than that in cases with negative staining of Tiam 1 (P < 0.05). Conclusions Upregulated expressions of Tiam 1 and PCNA are closely correlated with the invasion and metastasis of gastric cancer. Combined detection of Tiam 1 and PCNA is helpful for estimating the biological behavior of gastric cancer. 【Key words】 Gastric cancer; T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1; Proliferating cell nuclear antigen; Immunohistochemistry 恶性肿瘤细胞的增殖活性与侵袭转移能力是影响其发生发展及转归的重要因素。有研究显示，T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(T lymphoma invasion and metastasis inducing factor 1，Tiam 1)具有调节细胞骨架重组、促进细胞运动与迁移的能力，因而与肿瘤侵袭转移密切相关［1-2］；增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)则作为反映细胞增殖活性的一个重要指标， 其表达水平可用于预测肿瘤的侵袭转移潜能［3］。本研究旨在通过检测Tiam 1、PCNA蛋白在人胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况，进而分析其与胃癌临床病理生物学行为的关系。1 资料和方法 1.1 临床资料 取第三军医大学西南医院普通外科2002年10月至2003年10月间手术切除60例新鲜胃癌组织标本及距肿瘤约3～5 cm的癌旁正常胃黏膜组织，均经病理学诊断证实。胃癌病理组织学分型及PTNM分期分别根据世界卫生组织(WHO)和1988年国际抗癌联盟(UICC)颁布的方案实施。其中，将乳头状腺癌7例、管状腺癌24例归为高分化组，将低分化腺癌10例、黏液腺癌6例、印戒细胞癌9例、未分化癌4例归为低分化组。 1.2 方法 采用链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化法，染色程序参照即用型SABC检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)说明书操作。兔抗人/鼠Tiam 1多克隆抗体(美国Santa Cruz公司，工作浓度1∶100)，即用型鼠抗人PCNA单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司)。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。 1.3 结果判断 高倍镜下每张切片随机选择10个视野，共计数1 000个细胞。Tiam 1蛋白表达评估标准：①按细胞内(膜、质)染色强度计分，0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为黄褐色；②按阳性染色细胞百分率计分，0分为阳性细胞数≤10%，1分为阳性细胞数10%～25%，2分为25%～50%，3分为>50%。将①×②的结果分为以下等级，0分为阴性“-”，1～2分为弱阳性“+”，3～4分为阳性“”，5～9分为强阳性“”。 PCNA蛋白表达评估标准：细胞核内呈棕黄染色为阳性，采用PCNA标记指数(labeling index，LI)=PCNA阳性细胞数/100个细胞。 1.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件，Tiam 1表达阳性率行χ2检验和Spearman相关分析，对PCNA LI值的比较应用单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。2 结果 2.1 Tiam 1和PCNA的表达 ①在正常胃黏膜组织中Tiam 1蛋白染色为阴性，而在胃癌组织中染色阳性率为78.33%(47/60)，差异有统计学意义(P<0.05)。在胃癌组织中，Tiam 1蛋白阳性染色浓淡不一，不均一性分布于癌细胞的胞膜及胞质部位。其中表达“-”者13例(21.67%)；“+”者7例(11.67%)；“”者21例(35.00%)；“”者19例(31.67%)(图1、2)。②胃癌组织中PCNA LI值(57.49±14.82)显著高于正常胃黏膜组织中的PCNA LI值(20.74±6.13)，差异有统计学意义(P<0.05)。PCNA蛋白阳性染色颗粒，局限于细胞核内。在正常胃黏膜内仅见少量核染色阳性细胞散在分布，而在不同分化程度的胃癌组织及其不同区域内，可见大量核染色阳性细胞呈异质性分布(图3、4)。 图1 正常胃黏膜细胞Tiam 1蛋白阴性染色(SABC×200) 图2 胃腺癌细胞Tiam 1蛋白阳性染色(SABC×200) 图3 正常胃黏膜细胞PCNA蛋白弱阳性染色(SABC×200)图4 胃腺癌细胞PCNA蛋白阳性染色(SABC×200) 2.2 Tiam 1和PCNA表达与胃癌临床病理参数的关系 Tiam 1蛋白在胃癌组织中的表达与患者性别、 年龄及癌灶原发部位、 大小无关 (r分别为-0.038，0.092，0.031，-0.012；P>0.05)；组间阳性率比较，差异无统计学意义(χ2值分别为0.087，0.513，0.059，0.009；P>0.05)，但与胃癌组织分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移显著相关(r分别为0.347，0.314，0.319，0.356；P<0.05)。在低分化胃癌组织及浸润深度较广、TNM分期较晚、伴有淋巴结转移发生者中，Tiam 1蛋白阳性染色率升高，组间比较差异有统计学意义(χ2值分别为7.215，5.908，6.104，7.625；P<0.05)(见表1)。表1 Tiam 1、PCNA蛋白表达与胃癌临床病理参数的关系 PCNA蛋白表达以LI值进行比较，在以不同性别、年龄及癌灶原发部位、大小为区分的各组间，差异无统计学意义(F分别为3.078，1.371，2.465，2.819；P>0.05)；但在低分化胃癌组织及浸润深度较广、TNM分期较晚、伴有淋巴结转移发生者中，其PCNA LI值均升高，差异有统计学意义(F分别为20.683，18.745，11.584，13.617；P<0.05)(见表1)。 2.3 Tiam 1与PCNA表达间的关系 胃癌组织中Tiam 1阳性者47例的PCNA LI值(62.14±10.17)高于Tiam 1阴性者13例的PCNA LI值(50.05±7.38)，差异有统计学意义(F=24.259，P<0.05)。3 讨论 Tiam 1是Dbl(diffuse Bcell lymphoma oncogene family)家族成员，具有催化GTP/GDP转换的功能，可作为小G蛋白Rho家族重要成员Rac 1的特异性鸟苷酸转换因子，激活Rac 1，进而调节细胞骨架结构重组，影响细胞的形体极化过程，促进细胞运动和迁移［4-5］。研究表明，Tiam 1基因除在人大脑和睾丸组织中表达外，在其他正常组织中不表达或仅呈低度表达，但在乳腺癌、肺癌、卵巢癌等多种肿瘤组织中呈阳性表达，且其表达水平与肿瘤细胞分化程度及侵袭转移能力密切相关［1-2］。本实验发现，Tiam 1蛋白在正常胃黏膜组织呈阴性表达，但在胃癌组织的表达阳性率为78.33%，尤其在低分化胃癌及浸润深度较广、TNM分期较晚、伴有淋巴结转移发生者中可达90%以上，提示Tiam 1与胃癌侵袭转移行为相关。 PCNA则作为DNA多聚酶δ的辅助蛋白，参与DNA合成和细胞周期调控，其表达水平增强反映细胞增殖活性升高，目前认为PCNA表达水平与胃癌的侵袭转移密切相关［6］。本实验结果也支持了这一观点。我们发现，胃癌组织中PCNA LI值(57.49±14.82)显著高于正常胃黏膜组织中的PCNA LI值(20.74±6.13)，且在低分化胃癌及浸润深度较广、TNM分期较晚、伴有淋巴结转移发生者中表达较强。 另外，本研究还观察到不仅Tiam 1、PCNA表达均与胃癌侵袭转移密切相关，且在Tiam 1蛋白阳性者胃癌组织中PCNA LI值显著高于Tiam 1蛋白阴性者中的相应值。这一现象提示，当增殖活性强的癌细胞快速大量增殖后，可导致肿瘤组织内部压力升高，从而推动癌细胞向压力低处迁移，若同时该癌细胞骨架蛋白重组及变形能力较强，则更容易向他处游走、侵袭。因此，Tiam 1与PCNA表达上调的直接效果，既可能是简单的功能叠加，也可能存在一定的相辅相成联系。已有研究显示，Tiam 1表达缺陷小鼠的表皮基底层细胞对化学致癌剂诱导的凋亡敏感性增高，且在上皮源性肿瘤的发生阶段肿瘤细胞凋亡增加，而在进展阶段肿瘤细胞增殖受阻［7］。那么，通过反义基因技术抑制Tiam 1在胃癌细胞中的表达，进而检测相关因子的变化或许能对Tiam 1与PCNA表达上调间的关系作出较明确的解释。【参考文献】［1］ Malliri A, Rygiel T P, van der Kammen R A, et al. 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