Survivin和bFGF在胃癌及肠化生组织中的表达及其与胃癌血管生成的关系
发表时间：2010-01-26 浏览次数：529次
Survivin和bFGF在胃癌及肠化生组织中的表达及其与胃癌血管生成的关系作者：姬永忠 罗梅 张煦 赵宪龙 作者单位：1 730070 兰州军区总医院安宁分院微创中心； 2 730000 兰州大学医学院病理学教研室 【摘要】 目的 探讨Survivin和bFGF在胃癌及肠化生组织中的表达及其与胃癌血管生成的关系,为胃癌的诊断、治疗及预后判断提供依据。方法 应用免疫组化SP法检测44例胃癌组织、22例肠化生组织和10例正常胃黏膜组织中的Survivin、bFGF的表达和MVD值，分析Survivin、bFGF表达、MVD值与临床病理因素间的关系。结果 在44例胃癌组织、22例肠化生组织和10例正常胃黏膜组织中Survivin、bFGF和MVD 3种标记物在3组组织之间差异有统计学意义(P<0.05)。在胃癌组织中Survivin、bFGF表达及MVD值均与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。胃癌组织中Survivin和bFGF表达与MVD值均有相关性(P<0.05)。胃癌组织中Survivin和bFGF两者均阳性组中MVD值与两者均阴性组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胃癌组中Survivin、bFGF的表达均与MVD值有明显相关性，bFGF和Survivin的表达共同促进胃癌血管的生成。联合检测Survivin、bFGF和MVD有助于对胃癌的病理分级、恶性程度判定和预后判断。 【关键词】 胃肿瘤 生存素 碱性成纤维细胞生长因子 免疫组织化学胃肿瘤 生存素 碱性成纤维细胞生长因子 免疫组织化学 Expressions of Survivin and basic fibroblast growth factor in tissues of gastric carcinoma and intestinal metaplasia and their relationship with angiogenesis of gastric carcinoma JI Yongzhong, LUO Mei, ZHANG Xu, ZHAO Xianlong. Department of Laparoendoscopic Surgery Centre, Anning Hospital, General Hospital of Lanzhou Military Command, Lanzhou 730070, China 【Abstract】 Objective To observe expressions of Survivin and basic fibroblast growth factor (bFGF) in tissues of gastric carcinoma and intestinal metaplasia and their relationship with angiogenesis of gastric carcinoma so as to provide experimental and theoretical basis for diagnosis, treatment and predicating prognosis of gastric cancer. Methods Expressions and microvessel density (MVD) values of Survivin and bFGF in 10 normal gastric mucosa, 22 intestinal metaplasia of gastric mucosa and 44 gastric carcinoma tissues were examined by means of immunohistochemical SP to analyze relationship of expressions of Survivin and bFGF as well as MVD with various clinicopathologic factors. Results There was statistically significant difference in aspects of expressions of Survivin and bFGF and MVD value in three groups (P<0.05). Statistical analysis revealed that expressions of Survivin and bFGF and MVD value in gastric cancer were correlated with depth of infiltration, TNM stage and lymph node aversion (P<0.05). The expressions of Survivin and bFGF in gastric carcinoma were correlated positively with MVD value (P<0.05). MVD value of both Survivin and bFGFpositive groups was higher than that of both Survivin and bFGFnegative groups (P<0.05). Conclusions The expressions of Survivin and bFGF are correlated obviously with MVD value in gastric carcinoma tissues and contribute to angiogenesis of gastric carcinoma. Combined examination of expressions of Survivin, bFGF and MVD in gastric carcinoma is helpful for histological grading, tumor malignancy estimation and prognosis prediction of gastric carcinoma. 【Key words】 Gastric carcinoma; Survivin; Basic fibroblast growth factor; Immunohistochemistry 胃癌是严重危害人民健康的疾病之一,发病率居消化系统恶性肿瘤的首位。我国胃癌病死率为25.16/10万,占恶性肿瘤病死率的23.35%。从分子生物学及遗传学的角度，肿瘤可以被看成是基因或DNA的疾病。近年来的大量研究已证实胃癌的发生、发展和预后是多基因改变的结果。本实验用免疫组化SP法联合检测生存素(Survivin)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrolast growth factors,bFGF)和间质微血管密度(microvessel density，MVD)在胃癌、肠化生组织中的表达，旨在为胃癌病理分级、恶性程度判定及预后判断提供客观指标。探讨其相互关系及对胃癌血管生成的影响，为胃癌发生、侵袭、转移的早期诊断、基因治疗及判断预后提供更多的理论和实验证据。1 资料和方法 1.1 一般资料 1998-2003年我院手术切除的胃癌组织蜡块44例，均系术前未接受放疗和化疗者。男38例，女6例，年龄33～71岁，平均56.4岁。44例中高分化腺癌10例，中分化腺癌8例，低分化腺癌、黏液腺癌和印戒细胞癌26例；浸润至肌层以上18例，浸润至浆膜26例；有淋巴结转移17例；有远处转移5例；胃癌TNM分期(1987年第4版)Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期28例。来源于胃镜活检组织的肠化生组织蜡块22例，其中男14例，女8例，平均年龄56.6岁。正常胃组织蜡块10例，其中男6例，女4例，平均年龄54.4岁。 姬永忠,等. Survivin和bFGF在胃癌及肠化生组织中的表达及其与胃癌血管生成的关系 1.2 方法与主要试剂 Survivin、bFGF、CD34均系鼠抗人抗体(美国Maxim公司产品，购自福州迈新生物工程有限公司)，SP法试剂盒、DAB染色试剂盒(购自福州迈新生物工程有限公司)。石蜡标本在切片机上连续切片4张，厚度4 μm，1张贴于常规处理的洁净载玻片上，行苏木精伊红染色，核对资料无误后，其余3张贴于经多聚赖氨酸处理过的洁净载玻片上，并于60 ℃烤箱烘烤6 h以上，行Survivin和bFGF、CD34免疫组织化学SP染色。 1.3 阳性判定标准和定量测定 Survivin主要定位在胃癌细胞的细胞质或细胞膜上。阳性细胞为细胞质中出现细或粗的棕黄色颗粒。阳性对照为迈新公司提供的阳性切片，阴性对照为一抗用PBS代替。 1.3.1 Survivin和bFGF 细胞胞质内出现棕黄色颗粒判断为阳性。 1.3.2 bFGF标记切片 无着色为(-)判定为0分；弱阳性(+)：阳性范围<25%者，判定为1分；阳性()：阳性范围25%～50%，判定为2分；强阳性()：阳性范围＞50%，判定为3分。 1.3.3 Survivin切片 无着色为0分，染色弱1分，染色清晰2分；阳性范围≤10%者为0分，阳性范围≤25%为1分，阳性范围≤50%为2分，阳性范围＞50%为3分。根据两项相加数分为：0～1为(-)；2分为(+)；3～4分为()；5～6分为()。 1.3.4 定量测定 低倍镜选取肿瘤微血管数量(CD34阳性)最丰富区域，在200×视野范围计算5个视野的微血管数目，取平均数作为MVD值。有无管腔并非计数微血管所必需，即使怀疑是同一血管或血管分支，但只要彼此不相连，即应计作两个，肌性厚壁血管等大血管不作计数。微血管计数在完全不知临床病理资料和预后的情况下进行。 1.4 统计学处理 Survivin和bFGF均用阳性率(%)表示，MVD用±s表示，用χ2检验、Fisher精确概率法和独立样本的t检验，单因素方差分析及Post Hoc Tests中的LSD法用SSPS8.0 for Windows软件进行统计学处理。2 结果 2.1 3种指标在各组中的表达 本实验Survivin：10例正常的胃黏膜未见表达；22例肠化生组织细胞内有3例重度肠化生组织有阳性表达；胃癌组织中有20例阳性表达。3组间差异有统计学意义(χ2=12.33,P=0.002)。bFGF：在正常胃黏膜的阳性表达率为30%；肠化生的胃黏膜的表达率为36.36%；胃癌中表达率65.9%。3组间差异有统计学意义(χ2=7.501,P=0.024)。经CD34标记的胃癌、肠化生及正常胃黏膜组织均有良好显示，阳性部位位于血管内皮细胞，呈棕黄色至棕褐色深染，逗点状，小管状或条索状。胃癌组织中MVD值明显高于肠化生组织及正常胃黏膜组织。单因素方差分析及均数多重比较检验(Post Hoc Tests)中的LSD法，3组间差异有统计学意义(F=12.753，P=0.00)；组间比较差异有统计学意义(t=18.451, P=0.00； t=31.204, P=0.00)。见表1。表1 胃癌、肠化生及正常组织中Survivin、bFGF、MVD的表达 2.2 胃癌中Survivin、bFGF、MVD表达及其与临床病理因素的关系 经χ2检验和独立样本t检验显示，Survivin、bFGF表达和MVD值与年龄、性别、肿瘤大小均无关(P>0.05)；Survivin表达和MVD值与组织分化程度有关(χ2=10.182，P=0.001；t=2.459，P=0.018)；3者均与肿瘤浸润的深度有关(P=0.026，P=0.012，P=0.018)，并且均与淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)；Survivin表达和MVD值与远处转移有关(χ2=6.243，P=0.018；t=3.257，P=0.002)。见表2。表2 胃癌组织病理学特征与Survivin、bFGF、MVD表达的关系 2.3 胃癌中Survivin表达与bFGF表达的相关性 在20例Survivin阳性的胃癌组织中，bFGF阳性18例，阴性2例；在24例Survivin阴性的胃癌组织中，bFGF阳性11例，阴性13例。χ2检验显示Survivin和bFGF相关(χ2=9.471，P=0.002)。 2.4 胃癌中bFGF表达与MVD之间的关系 在bFGF阳性的29例中，MVD值为45.8±8.8；在bFGF阴性的15例中，MVD值为38.0±10.5；独立样本t检验显示两者差异有统计学意义(t=15.892，P=0.000)。 2.5 胃癌中Survivin表达与MVD之间的关系 在Survivin阳性的20例胃癌组织中，MVD值为46.5±8.3；在Survivin阴性的24例胃癌组织中，MVD值为40.1±10.9；经独立样本t检验两者差异有统计学意义(t=13.72，P=0.000)。 2.6 在胃癌中Survivin、bFGF与MVD的关系 单因素方差分析各组间的MVD值差异有统计学意义(F=50.098,P=0.000)。使用Post Hoc Tests中的LSD法两两比较： 在Survivin、 bFGF两者均阳性的18例中， MVD值为45.2±7.8； 在Survivin、 bFGF两者均阴性的13例中， MVD值为39.4±10.5。阳性与阴性比较MVD值差异有统计学意义(t=5.814 6,P=0.000)。Survivin、bFGF两者均阳性组与单一Survivin阳性组和单一bFGF阳性组相比，MVD值差异无统计学意义(t=0.923 1,P=0.395；t=0.561 9,P=0.352)；但单一Survivin阳性组和单一bFGF阳性组与两者均阴性组相比，MVD值差异有统计学意义(t=6.737 4,P=0.000；t=6.376 2,P=0.000)。见表3。表3 胃癌中Survivin、bFGF表达与MVD的关系 2.7 在胃癌中Survivin、bFGF和MVD同时高表达与临床病理因素的关系 在本组中Survivin、bFGF同时阳性与MVD高表达(MVD>43.9)的胃癌标本共有6例，其中细胞低分化5例，中分化1例，浆膜侵犯6例，淋巴结转移6例，远处转移4例(本组中共有远处转移5例)。3 讨论 3.1 Survivin、bFGF和MVD与临床病理因素间的关系及意义 Survivin作为凋亡抑制因子家族的成员，在已研究的肿瘤中均有表达，阳性率30%～100%［1-4］，且与多种肿瘤的生物学行为有关。Kawasaki等［3］研究发现Survivin在癌细胞中高表达，而在正常黏膜中不表达。本研究采用免疫组化SP法检测胃癌组织、肠化生及正常胃组织中Survivin表达发现，3组阳性表达率依次增高，差异有统计学意义(P<0.01)，与文献报道基本相同［5-6］。Survivin的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无明显相关性(P>0.05)，与肿瘤细胞分化、淋巴结的转移和TNM分期、远处转移有相关性，与文献报道基本一致［6-7］。但Okada等［8］用IHC方法研究认为，胞质内表达与预后、淋巴结转移、组织分型无关。Lu等［2］的资料显示，Survivin在胃癌组织中的表达率为34%，其表达与胃癌组织的组织学类型及淋巴管浸润有关，并且指出Survivin在细胞核中的表达率为82%，核中Survivin阳性多见于年轻和血管未受侵犯的病例，可视为预后好的表现，作为一个独立的预后因素。 bFGF具强有力的促血管生成作用，也是多种细胞的促有丝分裂原。肿瘤细胞在自身产生bFGF同时,可诱导血管内皮细胞产生bFGF，通过自分泌和旁分泌机制作用于肿瘤细胞和内皮细胞,促进内皮细胞分裂,从而引起血管生成增加。Ohtani等［9］报道bFGF的高分子量型(22 000、23 000、24 000)主要呈胞核表达，低分子量型(18 000)主要在胞质和胞膜中表达。这提示胃癌组织有可表达一种或多种形式的bFGF。肿瘤细胞亚克隆bFGF的不同表达可能代表了胃癌核型、抗原性、血管发生和组织学特征的异质性。本实验用免疫组化方法观察bFGF 3组中bFGF表达依次增高，且差异有统计学意义(P<0.05)。并发现胃癌组织中肿瘤细胞胞质、胞核均可表达bFGF。此外，伴有肠化生的胃黏膜也表达bFGF，而肠上皮化生是肠型胃癌发生的基础。淋巴结转移组中bFGF阳性表达程度明显高于无淋巴结转移组(P=0.013)，同时bFGF表达与肿瘤浸润深度及TNM分期均有明显关系(P<0.05)，此与文献报道基本一致［10］。其提示bFGF可能是引起细胞恶化的一个重要因素,并通过促进间质血管生成加速恶变细胞进入淋巴道和血循环形成转移瘤。因此bFGF的异常表达与肿瘤恶性生物学行为密切相关。 MVD是判定血管生成的一个良好指标。实验性肿瘤模型和人类癌前病变血管生成研究发现：在肿瘤发生的早期即显示血管表型，随着早期癌向浸润癌的进展MVD显著增加，至浸润癌期微血管密度最高、肿瘤体积增大更明显、转移的概率也增多。本研究结果表明MVD在正常的胃黏膜、肠化生组织、胃癌组织均有表达，表达率呈依次增高，差异有统计学意义(P<0.01)。在胃癌组织中，MVD与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期、远处转移均有密切关系。许多肿瘤的MVD已被认为是影响患者预后的独立因素，甚至在术后接受常规辅助化疗的乳腺癌组织的MVD也是一个可靠的预后指标［11］。 3.2 Survivin、bFGF、MVD之间的关系及意义 既往研究发现，Survivin与多个基因均有相关性，例如在胃癌的研究中，与P53等有相关性［2］。本实验中，胃癌组织中Survivin表达与MVD值有明显相关性，Survivin阳性组MVD值明显增高(P<0.01)。O'Connor［12］研究发现Survivin可控制血管内皮细胞的凋亡，促进血管的生长。本实验说明Survivin对血管的生成有一定的促进作用，胃癌组织中Survivin表达与bFGF亦有相关性(P<0.01)；bFGF表达亦与MVD的表达有明显相关性(P<0.01)。有文献报道经体外实验显示，bFGF可被有丝分裂原诱导升高，其对血管的作用主要通过血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)来实现［13］。但亦有bFGF通过旁分泌和自分泌直接促进了血管的生长，是血管增长的最重要的血管因子，其作用大于VEGF的报道。bFGF作为生理性的抗凋亡因子，能增强内皮细胞的抗凋亡能力，使癌细胞避免了药物引起的程序性死亡,从而增加了肿瘤细胞的抗药性。因此在肿瘤的发展中bFGF与Survivin具有协同作用，我们的研究发现Survivin和bFGF阳性组中，MVD的值明显高于两者阴性组(P<0.01)，提示两者可能共同作用与血管的生成和发展。Survivin和bFGF同时阳性组与单一Survivin阳性组和单一bFGF阳性组相比无明显差异，可能提示在血管生成过程中，bFGF和Survivin都是重要的因子。 O'Connor等［12］还研究发现，在血管生成中VEGF的抗凋亡特性主要通过诱发内皮细胞中的Survivin的表达而介导的，Survivin提高了代偿性血管生成时内皮细胞的生存能力。因此，可能bFGF与VEGF一样，通过诱导血管内皮中的Survivin的水平，进一步促进了血管的生长，亦促进了肿瘤细胞的浸润和转移。因此当Survivin和bFGF同时阳性时，将意味着肿瘤细胞的浸润生长更快、更易出现淋巴结的转移、远处转移，患者的预后将更差。本实验研究结果显示在本组中Survivin、bFGF同时阳性与MVD高表达的胃癌标本共有6例，其中细胞低分化5例，中分化1例，浆膜侵犯6例，淋巴结转移6例，远处转移4例(本组中共有远处转移5例)。提示Survivin、bFGF与MVD都可作为独立反映胃癌生物学行为的指标，但联合检测3种标记物且发现三者共同高表达时，则意味着胃癌高度恶性的生物学行为且预后更差。【参考文献】［1］ Ambrosini G, Adida C, Altieri D C. 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