E钙黏蛋白和nm23H1在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

E钙黏蛋白和nm23H1在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义作者：陈晚平 熊力 何鑫 黎柏峰 李珂 叶启发    作者单位：410013 长沙市，中南大学湘雅医学院附属湘雅三医院器官移植研究院    【摘要】  目的 探讨E钙黏蛋白(Ecadherin)和nm23H1在肝细胞性肝癌(HCC)中的表达及其与肝癌浸润转移之间的关系。方法 应用免疫组化SP技术，检测50例肝癌组织中Ecadherin和nm23H1的表达，分析与肝癌侵袭转移之间的关系。结果 50例肝癌组织中Ecadherin和nm23H1的表达与HCC的Edmondson分级、侵袭转移能力密切相关，而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关。Ecadherin和nm23H1的表达具有高度协同性。结论 Ecadherin和nm23H1的表达能反映HCC的侵袭转移能力。联合检测两种蛋白在肿瘤组织中的表达，可以更准确判断HCC的恶性程度和生物学行为。    【关键词】  肝细胞性肝癌 E钙黏蛋白 nm23H1 肿瘤转移    Expression and clinical significance of Ecadherin and nm23H1 in hepatocellular carcinoma  CHEN Wanping, XIONG Li, HE Xin, LI Baifeng, LI Ke, YE Qifa. Organs Transplantation Centre, Third Xiangya Hospital, Xiangya Medical College of Central South University, Changsha 410013, China   【Abstract】  Objective  To explore the expressions of Ecadherin and nm23H1 in hepatocellular carcinoma (HCC) their relationship with invasion and metastasis of HCC. Methods  Immunohistochemical SP technique was used to detect the expressions of Ecadherin and nm23iH1 in primary tumor tissues from 50 cases with HCC and analyze their relationship with invasion and metastasis of HCC. Results  In 50 cases, the expressions of Ecadherin and nm23H1 in HCC closely related with Edmondson grade and metastasis potential of HCC but had none correlation with size of tumor, sex and age of cases, with high cooperativeness upon expressions of Ecadherin and nm23H1. Conclusions  Expressions of Ecadherin and nm23H1 may reflect potential of invasion and metastasis of HCC. Furthermore, combined detection of expressions of Ecadherin and nm23H1 in tissues of HCC may more accurately judge the malignancy degree and biological behavior of HCC.   【Key words】  Hepatocellular carcinoma; Ecadherin; nm23h1; Tumor metastasis    nm23H1被证明是一种有效的肿瘤转移抑制基因［1］。Ecadherin在胚胎形态发生和维持组织结构完整性起重要作用［2］。通过检测50例HCC标本中nm23H1和Ecadherin的表达，探讨它们与HCC侵袭转移潜能的关系以及对判断肝细胞性肝癌临床预后的价值。1  材料与方法    1.1  材料    50例HCC标本均取自湘雅三医院器官移植研究院以及普外科2000年1月至2004年9月间行规则性肝叶、肝段切除的病理科存档蜡块。50例患者中，男42例，女8例；年龄18～73岁，中位年龄46岁。所有患者术前均未行放、化疗及免疫治疗，术后均经常规苏木精伊红染色病理确诊。HCC组织依照Edmondson标准分级，Ⅰ级11例，Ⅱ级19例，Ⅲ级14例，Ⅳ级6例。根据文献［3］，将有癌栓和/或肝内播散即卫星癌灶和/或淋巴结转移以及远处转移的HCC患者定为有侵袭转移组，反之则定为无侵袭转移组，其中有侵袭转移组22例，无侵袭转移组28例。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片。    1.2  方法    采用SP法检测Ecadherin和nm23H1蛋白。鼠抗人nm23H1单克隆抗体，购自武汉博士德生物技术有限公司；鼠抗人Ecadherin单克隆抗体、SP试剂盒、DAB显色剂为Santa Cruz公司产品。免疫组化染色程序严格按试剂盒说明书进行操作，PBS代替一抗作阴性对照，以肝破裂、肝血管瘤患者所切取的正常肝组织作正常对照。    1.3  结果判断    参照文献［4］采用半定量方法。由两位经验丰富的病理科医生光镜下双盲阅片。以细胞呈清晰棕色或棕黄色为阳性。每张切片分别观察10个高倍视野，每个高倍视野计数100个肿瘤细胞或非肿瘤肝细胞内免疫染色阳性细胞数，计算出每张切片的阳性细胞百分数。按阳性细胞百分数分为3个等级：<5%为阴性(-)，5%～50%为(+)，>51%为()。综合两位医师阅片结果取其平均值作为本研究的结果。    1.4  统计学处理    采用SPSS 12.0统计软件，χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2  结果    2.1  Ecadherin和nm23H1在HCC组织中的分布及定位    Ecadherin主要定位于胞膜，呈棕黄色线状或颗粒状，少数同时见于胞质(图1)。nm23H1阳性表现为棕黄或棕褐色颗粒或团块，呈胞质型和/或核浆型，以胞质型为主(图2)。    2.2  Ecadherin和nm23H1的表达与HCC临床病理指标的关系    Ecadherin和nm23H1在HCC的阳性表达率与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显关系，而与肿瘤的Edmondson分级、侵袭转移能力密切相关(表1)。表1  Ecadherin和nm23H1的表达与HCC临床病理指标的关系    2.3  Ecadherin和nm23H1的共同表达与HCC侵袭转移的关系由表2可见，在HCC中，两者表达的共同缺失与肿瘤的侵袭转移有关。该种表型具有较高的侵袭转移发生率(P=0.004 9)。这表明两者在抑制肿瘤侵袭转移方面可能有协同性。表2  Ecadherin和nm23H1的共同表达与 HCC侵袭转移的关系    2.4  Ecadherin和nm23H1在HCC中表达的相关性    50例肝细胞性肝癌患者中， 同时阳性表达Ecadherin和nm23H1的有24例，同时不表达的有14例。 经统计学处理后，发现50例HCC中Ecadherin和nm23H1的表达有一致性，即表达有相关性趋势，见表3。 表3  Ecadherin和nm23H1在HCC的表达的相关性3  讨论    nm23H1基因调控着肿瘤细胞的分化、浸润、转移等各个环节［1］，其抑制肿瘤转移主要是通过参与微观蛋白的聚合和调节G蛋白介导的信号传递，影响细胞的增殖、分裂［5］,调控形成完整基底膜的微环境来实现［6］。上皮性钙黏蛋白(Ecadherin)属于钙依赖黏附素家族，是一类介导同种细胞间相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，在调节胚胎形态发生和维持组织结构完整性与极性方面起着重要作用［2］，由Berx首先克隆［7］。1989年，Behrens发现Ecadherin蛋白黏附功能的丧失可使细胞获得高侵袭表型。    我们通过免疫组化技术，检测了nm23H1和Ecadherin基因蛋白在HCC组织中的表达，结果显示两种蛋白的表达水平与肿瘤大小、年龄、性别无关，但随着肿瘤细胞分化程度的降低和侵袭转移的发生，阳性表达率显著降低。这表明nm23H1、Ecadherin基因蛋白表达下调的过程伴随了HCC的发生、发展、侵袭转移的全过程，与HCC的发生、肿瘤细胞的演进、异质化、侵袭转移密切相关。结合nm23H1和Ecadherin基因蛋白的生物学功能，我们推测，在这个过程nm23H1的表达缺失或下调，导致G蛋白介导的信号传递功能障碍，微管聚合异常，使肝细胞分化不良，产生了恶性肿瘤的特性，而Ecadherin表达的下调，使肝细胞间正常的黏附力减弱或消失，肿瘤细胞获得侵袭性生长的表型，并易于从原发灶脱落分离，向局部淋巴结转移或远处转移。    本研究发现，nm23H1和Ecadherin在HCC组织中的表达有明显正相关(P<0.01)，表明在抑制肿瘤转移方面它们有重要的协同作用，这就提示肿瘤细胞表型为nm23H1-/Ecadherin-可能预示着严重预后不良。由于时间较短，未获得全部随访资料，未能对生存率和复发率进行研究，但已知上述表达类型的1例患者术后仅2个月全身广泛转移而死亡。因此，联合检测nm23H1和Ecadherin在肝癌肿瘤组织中的表达能较精确地反映肝细胞性肝癌的组织恶性程度和生物学行为，可以作为临床判断HCC预后的有用指标。【参考文献】［1］ Kimura N, Shimada N, Fukuda M, et al. 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