结核蛋白芯片联合PPD检测对 痰菌阴性肺结核的诊断价值

　　作者：郭光云, 陈 功, 王家宁, 郭凌云 作者单位：郧阳医学院附属人民医院 1呼吸内科， 2临床医学研究所,湖北 十堰 442000

　　【摘要】 目的：观察结核蛋白芯片和结核菌素纯蛋白衍生物(purified proteiderivative,PPD)实验对痰结核分枝杆菌阴性肺结核(菌阴肺结核)的诊断价值。方法：采用结核蛋白芯片和PPD实验，检测53例痰菌阴性活动性肺结核和40例非结核性肺部疾病患者，观察两种方法检测的灵敏性、特异性、检测的一致性和联合检测阳性率。结果:结核蛋白芯片诊断痰菌阴性肺结核的敏感性和特异性分别为62.3%、87.5% ，敏感性明显高于PPD试验(41.5%)，特异性无明显差异;两种方法检测一致率为69.8%;两种检测方法联用阳性检出率为88.7%，高于单独应用任一方法。结论:结核蛋白芯片检测对痰菌阴性活动性肺结核病人具有较好的诊断价值,联用PPD检测可提高痰菌阴性肺结核患者检出率。

　　【关键词】 肺结核

　　The diagnostic value of Combined detection of tuberculosis protein chip and PPD in smear and culture negative pulmonary tuberculosis GUO Guang-yun, CHEN Gong, WANG Jia-ning, et al (Respiratory Department of Ren Min Hospital Affiliated to YunYang Medical College,ShiYan, Hubei 442000, China)

　　Abstract: Objective To evaluate the diagnostic value of tuberculosis protein chip and PPD skin test in smear and culture negative pulmonary tuberculosis. Methods The two testing methods were used individually and in combination manner respectively to 53 smear and culture negative cases, 40 non-tuberculosis respiratory patients in control group. Results The sensitivity of tuberculosis protein chip was 62.3%, the specificity was 87.5%. The sensitivity is higher than that of PPD.There is significant differences between two methods. In combination examination the positive rates was increased by 88.7%. Conclusion Tuberculosis protein chip is a better method for pulmonary tuberculosis,and will be valuable in clinical applications. Using the two kinds of methods to diagnose smear and culture negative pulmonary tuberculosis patients can increase the positive rates of detection .

　　Key words: pulmonary tuberculosis; tuberculosis protein chip;PPD

　　结核病是当今全球范围对人类最具威胁的感染性疾病之一，痰结核分枝杆菌涂片阴性肺结核占肺结核患者的大多数,高达65%～75%[1],痰结核分枝杆菌培养所需时间长、阳性率低。故痰结核分枝杆菌阴性肺结核的诊断大多以症状、X线胸片为临床依据,其特异性不高,因此判断结核病是否活动,需不需要抗结核治疗,在临床工作中存在困难。为了寻找快速、准确诊断结核病的方法,我们应用结核蛋白芯片和PPD实验检测53例活动性肺结核病患者,并与40例非结核性肺疾病作对照，评价各指标对结核病诊断的价值及两种指标联合检测的意义，以寻找诊断菌阴肺结核更为敏感、特异的指标。

　　1 材料与方法

　　1.1 对象与分组实验组为2003年8月～2005年2月间,本院呼吸科门诊和住院肺结核病患者,共53例,男32例,女21例;年龄为18～68岁,平均45.3岁。本组患者未经抗结核治疗或治疗未超过1月,其诊断符合2001年中华医学会结核分会制定的《肺结核诊断和治疗指南》中“菌阴肺结核诊断标准”[2]。对照组为同期就诊于呼吸科门诊和住院的非结核性肺疾病患者，共40例，男24例,女16例;年龄20～64岁,平均45.8岁。

　　1.2 方法结核蛋白芯片：采取实验组和对照组的静脉血，分离血清。用结核芯片系统和蛋白芯片阅读仪(南京大渊生物技术工程有限公司提供)按芯片说明书进行操作。结果根据仪器生产厂家设置参数自动判别。LAM、38 kD与16 kD中任意一项指标阳性判为结核杆菌阳性。PPD皮试：实验组和对照组患者均采用卫生部药品生物制品鉴定所生产的PPD(1∶2500)稀释液,于左前臂下1/3掌侧处皮内注入0.1 ml,72 h测量局部硬结,平均直径≥5 mm为阳性。

　　1.3 特异性和敏感性计算方法敏感性=实验组真阳性数/实验组例数×100%特异性=对照组真阴性数/对照组例数×100%

　　1.4 统计学分析用SPSS11.0软件进行统计学处理。率的比较用χ2检验，P<0.05有统计学差异。

　　2 结果

　　2.1 结核蛋白芯片和PPD检测结果表1 结核蛋白芯片和PPD检测结果 表1说明结核蛋白芯片系统检测的敏感性为62.3%, 特异性为87.5%。PPD试验的敏感性为41.5%,特异性为85.0%。两者的敏感性相比，结核蛋白芯片系统检测高于PPD试验(P<0.05)，而特异性相比无显著差异(P>0.05)。

　　2.2 结核蛋白芯片阳性病例中各种指标分布情况表2 结核蛋白芯片各种指标的构成比抗结核菌单个抗原的抗体阳性率以抗38 kD的阳性率最高，为30.3%，次之为抗LAM抗体阳性率(21.3%)，最低为抗16 kD抗体的阳性率(12.1%)。抗结核菌三种抗原的抗体均阳性，占24.2%。

　　2.3 结核蛋白芯片与PPD实验的符合率两种方法检测痰菌阴性肺结核病人标本均阳性22例，均阴性15例，合计为37例，二者检测的符合率为69.8%。

　　2.4 结核芯片与PPD联合检测的阳性率 53例肺结核患者中,结核芯片和PPD试验阳性者共47例, 两者联合检测的敏感性为88.7%, 高于单一用结核芯片或PPD 试验(P<0.01)。

　　3 讨论

　　尽管痰涂片检查是目前最主要的肺结核确诊手段,但其阳性率较低,约25%～35% ,还存在着大约65%～75%涂片阴性或培养阴性可疑结核病的诊断问题[1] ,因此,对于菌阴肺结核患者的诊治是目前较为棘手的问题。蛋白质芯片(protein chip)是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新方向[3,4]，它类似于基因芯片,是将蛋白质点到固相物质上[5],然后与要检测的组织或细胞等进行“杂交”,再通过自动化仪器分析得出结果。结核蛋白芯片系统的基本原理是以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的结核菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)、蛋白16 kD(rTPA16)和38 kD(rTPA38)等三种抗原固相于同一膜片上，并利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物而直接在膜上显色。显色后的芯片放入芯片阅读仪，在专门软件的支持下对不同抗原点阵的灰度值进行分析。结核蛋白芯片检测实现了对这三种抗原的抗体进行同步检测，从而对结核菌感染情况做出诊断。 LAM是分枝杆菌属细胞壁的重要组成部分，属特异性抗原，具有较强的免疫原性，其检测的灵敏度较高，但除结核分枝杆菌外，其它分枝杆菌也有LAM成分，因此其特异性相对较低。结核分枝杆菌38 kD抗原与16 kD抗原是结核分枝杆菌所特有的抗原，它与其它分枝杆菌和非结核分支杆菌不存在交叉反应，其诊断的特异性较高[6~9]。本研究发现蛋白芯片比PPD试验敏感性高，特异性无明显差异,且两者能够互相补充, 它们联合检测可查出88.7%的肺结核病人。PPD试验所需费用低，但所需时间是72 h, 而且测量有一定误差, 又易受多种因素的影响;结核蛋白芯片检测只需10 min, 简便快捷, 重复性好,非常适合快速诊断需求，但费用较高。二者联用对痰菌阴性结核病诊断和鉴别诊断具有重要的参考价值。但结核蛋白芯片作为肺结核的一项新的诊断方法,需要得到更进一步临床的验证。

　　【参考文献】

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