头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联用对呼吸道感染铜绿假单胞菌抗菌活性的研究

　　作者： 温翠玲 张志华 张秀珑 (河北北方学院附属第一医院呼吸内科, 河北 张家口 075000)

　　【摘要】 目的:评价头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星对呼吸道分离的铜绿假单胞菌体外联合效应，为临床用药提供实验依据。方法: 用微量液体稀释法测三种抗生素单用时对31株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)，并用微量液体平板棋盘法测出联合用药时对这些菌株的MIC，计算FIC指数。结果：头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联合用药对铜绿假单胞菌的体外抗菌协同作用为355%～387%,相加作用为419%～452%，无关作用为161%～226%,无拮抗效应。结论：头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联合应用，对呼吸道分离的铜绿假单胞菌的体外抗菌作用以协同和相加作用为主，无拮抗效应。

　　【关键词】 呼吸道感染; 铜绿假单胞菌; 抗生素联合; 头孢哌酮; 头孢他啶; 左氧氟沙星

　　Study on the Combination of Cefoperazone or Ceftazidime with Levofloxacin Against

　　Pseudomonas Aeruginosa in Respiratory Tract Infection and in the Vitro Activities

　　WEN Cuiling, ZHANG Zhihua, ZHANG Xiulong

　　Department of Respirology,The First Affiliated Hospital,

　　Hebei North University, Zhangjiakou, 075000, Hebei China

　　【ABSTRACT】 Objective: To estimate the combination effect of cefoperazone, ceftazidime with levofloxacin in vitro, and provide experimental data for clinical practice. Methods: Minimum inhibitory concentration(MIC)values of three antibiotics were determined in Mueller Hinton broth by the microdilution technique.MICs of the combination of cefoperazone or ceftazidime and levofloxacin were determined by the microdilution chequer boardtechnique,interpretation of the results was made by calculation of FIC. Results: The results of combining cefoperazone or ceftazidime with levofloxacin showed that synergy was found 355%~387%, addition was 419%~452%, indifference was 161%~226%, none of the combination had an antagonistic effect. Conclusion: The results suggested that synergism and additivity of cefoperazone or ceftazidime with levofloxacin respectively against PA which caused respiratory tract infection should be main action, there was no antagonism.

　　【KEY WORDS】 Respiratory tract infection; Pseudomonas aesuginosa; Antibiotic combination; Cefoperazone; Ceftazidime; Levofloxacin

　　难治性感染疾病的治疗，是当前抗菌药物化疗领域的重要课题之一。铜绿假单胞菌近几年已是呼吸道感染首发病菌，且致病力较强，由于其天然耐药性强，并随着大量抗生素的不合理的广泛应用，多重耐药菌株日益增多，一般单一抗生素治疗往往不能获得满意的疗效，给临床治疗带来极大困难，故目前多采用抗生素的联合应用[1]。用药方案的制定,常需参考体外联合药敏实验结果，部分抑菌指数(FIC moldx)是评价抗菌药物联合效应的重要参数。应用体外实验呈协同或相加效应的抗菌药物组合，可望得到较高的临床治愈率。以往多采用三代头孢与氨基糖甙类药物联用，但后者产生的耳、肾毒性限制了它在临床的使用，临床医生迫切需要寻找一种替代药物。本科题探讨头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星体外联合应用对铜绿假单胞菌的效应，以期为临床治疗提供实验依据。

　　1 材料与方法

　　11 菌株来源:200411~200512月我地区呼吸科住院患者清晨深咳痰,12个月内共分离获得31株引起呼吸道感染的铜绿假单胞菌。质控菌株：铜绿假单胞菌ATCC27837。

　　12 主要试剂

　　121 培养基：MuellerHinton(MH)肉汤、MuellerHinton(MH) 琼脂，购自浙江天河生物制品检定所。

　　122 抗生素：头孢哌酮、头孢他啶、左氧氟沙星标准品，均购自中国药品生物制品检定所。

　　13 用微量液体稀释法测出3种抗生素对31株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)，判断标准按美国NCCLS(1997年)规定[2]。

　　14 用微量液体平板棋盘法[3]：(每种药物最高浓度为其MIC的2倍，倍比稀释到MIC的1/16，分别沿无菌微孔板横轴、纵轴加不同浓度两种药物的MH肉汤50μl，然后加菌液100μl，使菌量最终为5×104CFU/孔)。测出三种抗生素(头孢哌酮、头孢他啶、左氧氟沙星)联合用药时菌株的MIC， 24h后观察结果。

　　15 FIC指数计算及判读标准：(甲药联合时的MIC/甲药单独时的MIC)+(乙药联合时的MIC/乙药单独时的MIC)，FIC指数<05为协同作用,05～1为相加作用，1～2无关作用，>2拮抗作用。

　　16 统计学处理：经SPSS 110统计软件包处理，采用几何均数的t检验，P<005为有显著性差异。

　　2 结果

　　21 标本分离结果：在同等条件下取样，分离出31株铜绿假单胞菌，均分离自痰液，其中6株表1 三种抗生素单药对铜绿假单胞菌的MIC

　　22 三种抗生素单药对铜绿假单胞菌的MIC值, 见表1。

　　23 用微量液体平板棋盘法测得头孢他啶、头孢哌酮与左氧氟沙星单用和联合用药的MIC50、MIC90、MICG值, 见表2。

　　24 头孢他啶、头孢哌酮与左氧氟沙星联合应用对铜绿假单胞菌的FIC值, 见表3。

　　2006年6月温翠玲等：头孢哌酮、头孢他啶和左氧氟沙星联用对呼吸道感染铜绿假单胞菌抗菌活性的研究表2 头孢他啶、头孢哌酮与左氧氟沙星单用和联合用药的MIC50、MIC90、MICG 值(n=31)表3 头孢他啶、头孢哌酮与左氧氟沙星联合应用对铜绿假单胞菌的FIC值

　　3 讨论

　　铜绿假单胞菌是常见的条件致病菌，广泛分布于自然界中，可通过环境污染、交叉感染、内源性感染、医院性感染等途径，尤其在患有肺部疾病或免疫功能低下时导致呼吸道感染。该菌感染率高，病情来势凶猛，变化迅速，病死率高。近年来，随着大量广谱抗生素、激素、免疫抑制剂的应用，耐药菌株逐渐增多并出现多重耐药菌株，铜绿假单胞菌造成呼吸道感染治疗更加困难,原因:①在粘膜寄居部位其毒力因子使其粘附粘 膜或异物上的能力比较强[4]。②菌落表面形成厚厚的生物被膜保护细菌免受抗菌药物的破坏[5]。③对β内酰胺类抗生素产生耐药机制主要是产生Ⅰ型β内酰胺酶。④金属酶和D2微孔蛋白的丢失是致使该菌耐亚胺硫霉素的原因[6]。因而造成治疗过程中耐药菌株出现，致使清除困难，故及时有效的治疗是非常必要的。

　　从表1、2、3可以看出，头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星联用对呼吸道感染铜绿假单胞菌MIC明显下降，统计学处理均有显著性差异，抗菌作用显著增强，且从FIC值说明这两类抗生素联用的协同作用为355%～387%,相加作用为419%～452%,无关作用为161%～226%,无拮抗作用。头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星为抗菌机制不同的快速杀菌剂，对铜绿假单胞菌有极强的抗菌活性，且两种抗菌药物无交叉耐药性。头孢哌酮、头孢他啶与铜绿假单胞菌的青霉素结合蛋白结合后，可使细菌的细胞壁的通透性增加，促使左氧氟沙星进入铜绿假单胞菌的细胞内，作用于靶位DNA旋转酶，发挥杀菌作用;而环丙沙星、左氧氟沙星不受β内酰胺酶的水解，对一些耐β内酰胺抗生素的产酶株仍可显示较好的抗菌活性。两类药联合应用后，不仅可在一定程度上阻止耐药性的产生，还可能表现出更强的抗铜绿假单胞菌的效应，本实验结果证实了这一理论。本实验中, 头孢哌酮、头孢他啶与左氧氟沙星联用对呼吸道感染铜绿假单胞菌显示协同作用和相加作用,无拮抗效应。因此，这两种药物合理联合应用后，对铜绿假单胞菌的抑制作用显著优于单一的抗生素应用，这为临床控制呼吸道感染铜绿假单胞菌，设计合理治疗方案提供了实验依据，值得临床进一步观察疗效和推广应用。

　　参考文献

　　1 宦定才,张信红,裴雯,等.哌拉西林与环丙沙星对铜绿假单胞菌的联合药敏的研究[J].解放军药学学报,2003,20(1): 2123

　　2 National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)1997.Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically:Approved Standard M7A4.Villanova.PA:NCCLS

　　3 George M, Eliopouios RC, Moellering JR.Antimicrobial combinations[A].In:Antibootics in laboratory medicine[M]. NW Washington,US:Soociety for microbiology,1996.330

　　4 贾辅忠.绿脓杆菌的感染和预防[J]. 中国实用内科杂志,1999,19(2):7576

　　5 许美荣,胡丽萍,邓丽华. 铜绿假单胞菌5年耐药监测结果及注意事项[J].上海医学检验杂志,2003,18(3):183185

　　6 雷兆文.呼吸道生物被膜病.慢性难治性肺部感染的关键环节[J].国外医学呼吸系统分册,1997,17(4):188189