细胞外基质金属蛋白酶诱导因子CD147和基质金属蛋白酶-9在胆囊癌及癌前病变组织中的表达

我们通过采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶(SP)法检测CD147和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胆囊癌、胆囊上皮不典型增生、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组织中的表达,探讨其与胆囊癌的发生、发展和预后之间的关系.　　材料与方法　　1.一般资料:103例标本取自郑州大学第二附属医院及郑州大学附属肿瘤医院病理科2005至2007年手术切除标本存档蜡块.其中胆囊癌42例,中重度不典型增生18例,轻度不典型增生13例,胆囊腺瘤IS例,慢性胆囊炎l5例.男38例,女65例.患者最大年龄78岁,最小年龄27岁,平均年龄56.42岁.42例胆囊癌标本中高、中分化腺癌14例,低分化腺癌28例;Kevin分期,I,II期10例,〕111期32例;伴有淋巴结转移29例,无淋巴结转移13例所有标本均获病理学诊断,且患者术前未进行任何抗肿瘤治疗(化疗、放疗、生物靶向治疗等).　　2.试剂和方法:即用型兔抗人CDl47,MMP-9单克隆抗体,SP9000试剂盒,二氨基联苯胺(DAB)试剂盒均购自北京中杉生物工程公司.免疫组织化学具体操作流程严格按照试剂盒说明书进行,以己知阳性切片做阳性对照(试剂公司提供),磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗做阴性对照.结果由1名病理科主任医师及1名主治医师采用双盲法进行统计.　　3.结果判断:CD147和MMP-9的阳性表达均为棕黄色至深棕色颗粒,CD147表达于细胞膜和细胞质,MMP-9主要表达于细胞质,少量可表达于细胞膜.光镜下每张切片随机读取5个高倍视野观察.根据染色细胞数和染色强度进行结果判断.按染色细胞百分数:无细胞染色,0分;<25%细胞染色,1分;25%-50%细胞染色,2分;>50%细胞染色,3分.按细胞染色强度:未染色,0分;轻度染色,1分;中度染色,2分;强染色,3分.两项积分之和为总分:0一1分(一),2分(+),3一4分(、),5一6分(*).　　4.统计学方法:应用SPSS17.0统计软件分析.计数资料的比较采用丫检验,CD147和MMP-9之间的相关性采用Spearman等级相关性检验,患者术后的预后采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并用Log_rank检验.　　结果　　1.CD147和MMP-9在胆囊各病变组织中的表达:胆囊癌中CD147和MMP-9的阳性表达率分别为83.33%和88.10%,中重度不典型增生组织中分别为61.11%和66.67%,轻度不典型增生组织中分别为38.46%和30.77%,月旦囊腺瘤中分别为20.00%和26.67%,慢性胆囊炎中分别为6.67%和20.00%.胆囊癌组中CD147和Mb1P-9的阳性表达与轻度不典型增生、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组比较差异有统计学意义(P<0.01),与中重度不典型增生组比较差异无统计学意义(P>0.05);中重度不典型增生组中CD147和}IVIP-9的阳性表达与胆囊腺瘤、慢性胆囊炎组比较差异有统计学意义(P<0.01),与轻度不典型组比较差异无统计学意义(P>0.05,表1).　　2.胆囊癌中CD147和N1MP-9的表达与临床病理特征的关系:CD147和MMP-9在胆囊癌中的阳性表达与癌组织的分化程度、\evin分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无明显相关(P>0.05).分化程度低、Kevin〕IQ期、伴有淋巴结转移的患者CD147和_VIVIP-9阳性表达率分别高于分化程度高、KevinI,II期及无淋巴结转移的患者(表2).　　3.胆囊癌组织中CD147和MMP-9蛋白表达的相关性:镜下观察CD147阳性表达的胆囊癌组织中MMP-9表达也趋于阳性.Spearman等级相关检验显示,MMP-9与CD147在胆囊癌组织中的阳性表达呈正相关(rs-0.427,P<0.O1).　　4.CD147和MMP-9的阳性表达与患者术后生存时间之间的关系:从手术之日起开始随访患者到患者死亡或失访日期或截止到2012年6月末次随访日.　　其中截尾值5例(失访2例,死于其他疾病2例,随访结束1例仍然存活),5年生存率为2.38%.CD147阴性表达组中位生存时间为35.0个月,平均生存时间95%置信区间为(40.07士6.61)个月;CD147阳性表达组中位生存时间为20.0个月,平均生存时间95%置信区间为(24.77士2.35)个月.Log-rank方法检验其生存曲线,提示:CD147表达阴性的胆囊癌患者术后生存期长于CD147表达阳性的患者,差异有统计学意义.(P<0.OS,X2=5.003)}MMP-9阴性表达组中位生存时间40.0个月,平均生存时间95%置信区间为(39.40士7.42)个月;MMP-9阳性表达组中位生存时间20.0个月,平均生存时间95%置信区间为(21.86士1.79)个月.同样用Log-Rank法检验结果显示,MMP-9表达阴性的胆囊癌患者术后生存期也长于MMP-9表达阳性的患者,差异有统计学意义(P<0.OS,XZ二4.112).　　讨论　　CD147是免疫球蛋白超家族成员(igSF)之一,为相对分子质量5000的1种单次跨膜糖基化蛋白,参与细胞与细胞或细胞与基质之间的豁附.作为细胞外MMP诱导因子,CD147的表达与肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌、神经胶质瘤等多种肿瘤的浸润、转移能力密切相关等研究表明,胆囊癌组织中CD147阳性表达率为70.02%,显著高于胆囊炎组织,差异有统计学意义.MMP-9是MMPs的一种亚型,相对分子质量为92x10',主要由巨噬细胞及某些肿瘤细胞合成分泌,可降解IV,V,IX,XI型胶原及促进肿瘤组织毛细血管新生.现已研究结果显示,MMP-9在多种肿瘤组织中都有不同程度阳性的表达,并与肿瘤的发生、发展及转移有一定的关系.张云锋等研究结果显示,MMP-9在胆囊癌中高表达且与癌组织的分化程度、临床分期、淋巴结转移及术后生存有关.　　本实验结果显示,CD147和MMP-9在胆囊癌、胆囊上皮不典型增生、胆囊腺瘤以及慢性胆囊炎组织中均可见阳性表达,且表达量有依次降低趋势.其中,CD147和MMP-9在胆囊癌组织中的表达显著高于轻度不典型增生组织、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组织的表达,差异有统计学意义,与中重度不典型增生组织比较差异无统计学意义.CD147和MMP-9的强表达与胆囊癌的分化程度,临床分期、淋巴结转移相关,而与患者的性另上年龄及肿瘤的大小无关,这与以上研究基本一致.它提示CD147和MMP-9的表达与胆囊癌的浸润和转移有关.两者在胆囊癌组织中的阳性表达呈正相关,可认为胆囊癌中CD147的高表达在一定程度上刺激、诱导MMP-9的高表达,两者共同促进了肿瘤的浸润和转移.CD147和MMP-9在中重度不典型增生组织中的表达量也显著高于胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组织,差异有统计学意义;与轻度不典型增生组比较,差异无统计学意义.它说明CD147和MMP-9可能在胆囊豁膜病变及癌变过程中起到一定的作用,恶性组织中的表达量高于良性病变组织.随访结果显示,CD147和MMP-9阴性表达的患者术后生存期均高于阳性表达的患者,且差异有统计学意义.进一步结果表明CD147和MMP-9的阳性表达可能与胆囊癌的预后相关,表达率越高预后越差.　　本研究结果表明,CD147和MMP-9在胆囊茹膜的癌变以及胆囊癌的发展、浸润及转移过程中可能发挥着积极的作用,可在一定程度上间接地反映胆囊癌的进展及预后CD147作为MMP上游分子,阻断其活化途径及功能发挥将有效抑制肿瘤的发展.然而两者相互作用的分子机制目前仍不明朗,有待进一步研究证实.　　参考文献　　王善伟,陈丽荣. CD147、MMP-9和p-ERK在乳腺癌中的表达及临床意义[J].实用肿瘤学杂志,2007.133-137.　　张惠忠,魏益平,华平. 非小细胞肺癌淋巴结转移和预后与CDl33和CD147表达的关系[J].中华实验外科杂志,2007,(7):873-874.doi:10.3760/j.issn:1001-9030.2007.07.039.　　Sun J,Hemler ME. Regulation of MMP-1 and MMP-2 production through CD147/extracellular matrix metalloproteinase inducer interactions[J].Cancer Research,2001.2276-2281.　　Wu W,Wang R,Liu H. Prediction of prognosis in gallbladder carcinoma by CD147 and MMP-2 immunohistochemistry[J].Medical Oncology,2009.117-123.　　Zhang S,Li L,Lin JY. Imbalance between expression of matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in invasiveness and metastasis of human gastric carcinoma[J].World Journal of Gastroenterology,2003,(5):899-904.　　张云锋,王作仁,牛新捷. 胆囊癌中基质金属蛋白酶9、黏附分子CD44变构体6表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志,2002,(5):405-406.doi:10.3760/j.issn:1001-9030.2002.05.008.　　Kim JY,Kim WJ,Kim H. The stimulation of CD147 induces MMP-9 expression through ERK and NF-kappaB in macrophages:implication for atherosclerosis[J].Immune Netw,2009.90-97.