血清AFP, GGTII及sICAM1联合检测诊断肝细胞

　　作者：赵威,窦科峰,岳树强,杨雁灵　　作者单位：第四军医大学西京医院肝胆外科，陕西 西安 710033

　　【摘要】目的：联合检测血清中AFP，GGTII，sICAM1以提高肝细胞性肝癌(HCC)的确诊率. 方法：46例HCC患者，肝转移癌18例，肝硬化42例，各型肝炎30例，良性肝肿瘤38例及健康对照者46例. 血清AFP，GGTII及sICAM1分别采用荧光酶联免疫吸附法、自然不连续缓冲系统聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳检测法和双抗体酶联免疫吸附法进行检测. 结果：AFP，GGTII，sICAM1三者联合检测使HCC的检出灵敏度达到96%，正确率达到93%，高于单独检测其中任一肿瘤标志物，可明显降低漏诊概率. 结论：肿瘤标志物的联合检测对确诊肝细胞性肝癌具有临床价值.

　　【关键词】 肝细胞性肝癌;甲胎蛋白;γ谷氨酰转肽酶同工酶II;可溶性细胞间黏附分子1

　　Roles of combined detection of AFP, GGTII and sICAM1 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma

　　ZHAO Wei, DOU KeFeng, YUE ShuQiang, YANG YanLing

　　Department of Hepatobiliary Surgery, Xijing Hospital, Fourth Millitary Medical University, Xian 710033, China

　　【Abstract】 AIM: To enhance the final diagnosis rate of hepatocellular carcinoma (HCC) by detecting AFP, GGTII and sICAM1 consociatedly in HCC sufferers sera. METHODS: We collected altogether 220 blood samples, including 46 cases of HCC, 18 cases of liver metastatic carcinoma, 38 cases of liver benign tumor, 42 cases of hepatic cirrhosis, 30 cases of hepatitis and 46 cases of normal controls. The serum AFP, GGTII, sICAM1 were measued with fluorescent enzyme linked immunosorbent assay, vertical polyacrylamide gel gradient electrophoresis and double antibody enzyme linked immunosorbent assay. RESULTS: Combined detection of AFP, GGTII and sICAM1 enhanced the sensitivity of HCC diagnosis to 96% and the accuracy to 93%, higher than that of detection of any single tumor marker and obviously reduced the rate of misdiagnosis. CONCLUSION: It is necessary to detect the markers of HCC consociatedly.

　　【Keywords】 HCC; AFP; GGTII; sICAM1

　　0引言

　　甲胎蛋白(AFP)是肝细胞性肝癌(HCC)特异的肿瘤标志物，但一些良性肝胆疾病患者血清中AFP 也可呈高值，更重要的是有部分HCC 患者血清AFP 呈低值甚至为阴性，阴性率甚至可达30%以上. 因此将多个肝脏肿瘤标志物联合检测逐渐成为临床的研究趋势. 我们联合检测血清中AFP，GGTⅡ和sICAM1，以提高HCC的确诊率.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　200607/200705住院肝病患者及门诊青年健康查体献血者共220例，其中HCC 46例，肝转移癌18例，肝硬化42例，各型肝炎30例，良性肝肿瘤38例及正常对照者46例. HCC男30例，女16例，已发生肝外转移25例，年龄32~67(平均46)岁，均符合1999年全国原发性肝癌诊断与分期标准(草案);肝转移癌男10例，女8例，胃癌肝转移9例，结肠癌肝转移9例;肝硬化男22例，女20例，病毒性肝炎后肝硬化37例，原发性胆汁性肝硬化5例;病毒性肝炎男15例，女15例;肝血管瘤男22例，女16例;正常对照组为门诊青年健康查体者，男23例，女23例，均无任何疾病. 于清晨空腹条件下采集以上各组人员的血清，离心分离后保存于-70℃.

　　1.2方法

　　AFP检测采用荧光酶联免疫吸附法，752N型紫外可见分光光度计由上海天普分析仪器有限公司生产，试剂盒购自上海卓康生物科技有限公司，HPR 标记的抗体由第四军医大学唐都医院提供;GGTII采用自然不连续缓冲系统聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳检测法;sICAM1采用双抗体酶联免疫吸附法进行检测，美国ADLsICAM1酶免疫分析试剂盒购自上海卓康生物科技有限公司，所有步骤均严格按照操作规程进行. 阳性判断分别为AFP≥200 μg/L, GGTII≥6.5 μg/L, sICAM1≥1000 μg/L.

　　统计学处理：采用SPSS12.0统计软件包进行分析，两组之间sICAM1比较用成组t检验，阳性率比较用χ2检验，各组AFP，GGTII，sICAM1检测结果之间比较用非参数秩和检验.

　　2结果

　　2.1肝病患者血清AFP，GGTII，sICAM1比较

　　各对照组AFP，GGTII，sICAM1与HCC组比较有统计学差异(P<0.05,表1).表1肝病患者血清AFP，GGTII，sICAM1比较(略)

　　2.2肿瘤标志物联合检测诊断价值

　　肿瘤标志物联合检测诊断价值可提高(表2).表2AFP，GGTII，sICAM1联合检测诊断HCC比较(略)

　　2.3血清中sICAM1含量比较

　　肝外有转移患者血清中sICAM1的含量[(1168±208) μg/L]及阳性率93.8%与无肝外转移患者血清中sICAM1的含量[(657±145) μg/L]及阳性率15.3%有统计学差异(P<0.05).

　　3讨论

　　AFP作为肿瘤标志物应用于临床血清学诊断HCC已有多年，是目前临床诊断HCC最常用、最有价值的血清学诊断指标，在HCC术前和术后监测等方面有重要的临床意义. 国内报道阳性率在75%～78% [1]，同时亦有部分HCC患者AFP呈低浓度或阴性[2]，且有报道称HCC患者血清中AFP浓度与肿瘤大小有关，有部分肿瘤较小的患者血清AFP表现为阴性[3~5],可导致较高的漏诊率. 本实验中AFP诊断HCC的阳性率仅为76%，漏诊概率较高，故在临床上不能用作HCC的排除诊断依据.

　　GGT广泛分布于体内，以肾脏、肝脏、胰腺、小肠等脏器最为丰富，其中又以肾脏活性最高. 但血清中GGT多来自肝组织[6]. GGTⅡ诊断HCC特异性高，除转移癌偶可出现阳性外，其余肝病中及正常人中出现率极低. 目前检测GGTⅡ的方法主要有聚丙烯酰胺阶段梯度电泳(PVSGE)和亲和层析法, 国内学者报道其检测阳性率分别为90%和84%,检测特异性分别为98 %和97 %[7]. 因此GGTⅡ可作为诊断肝癌的重要肿瘤标志物.

　　GGTⅡ与AFP浓度或肿瘤大小无相关性,在AFP低浓度肝癌或小肝癌中,其临床价值优于AFP. 本实验中AFP阴性的11例HCC，有8例GGTⅡ阳性，极大地降低了HCC的漏诊概率. 对HCC 患者血清GGTⅡ进行定量分析,与肝炎、肝硬化、正常对照组比较有统计学差异(P<0.05). 而非HCC患者仅有1例阳性,且活性较低. 表明检测GGTⅡ对HCC诊断有较高的敏感性和特异性. 本实验中GGTⅡ检测HCC的阳性率为92%，特异性达86%. GGTⅡ在健康人几乎测不出,急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、恶性胆道梗阻及其他肿瘤仅有极低水平的表达,都在6.5 μg/L以下,提示肝癌组织表达的GGT与正常GGT有差别. 但GGTⅡ在肝转移癌患者中也有较高的表达，本实验18例肝转移癌中有12例GGTⅡ阳性，故对于GGTⅡ阳性的患者，应建议进一步检测其他肿瘤标志物或影像学检查，以明确是否为HCC或是肝外肿瘤转移所致,以免造成误诊，错过治疗机会. 关于HCC患者 GGTⅡ升高的原因目前尚未完全阐明，主要认为可能与GGT基因的表达受基因甲基化程度的调节有关[8]，癌变过程中GGT基因因去甲基化，使已关闭的GGT基因重新活化，再过度表达的GGT引起肝组织和外周血中该酶活性的大幅度升高，另在肿瘤的不同部位存在着甲基化状态的不均一性，使酶的表达也存在差异，故HCC时GGTⅡ的活性明显升高.

　　ICAM1是免疫球蛋白超基因家族成员之一，肿瘤细胞膜表达一定水平的ICAM1[9]， sICAM1是诱导白细胞穿过血管壁进入炎症病灶的最重要的细胞因子, 参与多种炎症反应和免疫过程. 对组织的自身稳定和细胞的移行与分化起重要作用. 有资料证实:血清sICAM1水平与肝损害的程度密切相关. HCC患者血清中存在着较高水平的sICAM1, 其升高机制可能是产生于肝细胞、肝胆管和肝血窦内皮细胞及肝组织内活化的淋巴细胞有关[10].

　　本组46例HCC患者血清中sICAM1的水平与肝硬化组、健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)，并且转移组高于非转移组，可见血清中sICAM1含量可反映患者的带瘤状态和转移状态，sICAM1有可能作为判断HCC发展程度及转移状态的一个检测指标. 有转移组sICAM1的水平明显高于无转移组, 提示对HCC患者来说sICAM1的水平越高, 患者的预后可能越差. 实验中AFP 阴性组和AFP 阳性组患者血清中sICAM1的水平无统计学差异(P>0.05)，提示sICAM1在HCC的诊断中较AFP更敏感，HCC患者血清中sICAM1的检测一定程度上可以反映肝肿瘤的恶变程度及肝癌细胞的侵袭转移能力,说明sICAM1有可能作为判断HCCC发展程度及转移状态的一个检测指标.

　　本研究中，在灵敏度方面GGTⅡ为92%最高，AFP其次，为76%，sICAM1最低，为68%. 特异性方面，AFP为95%, sICAM1为86%，GGTⅡ为90%. 准确度GGTⅡ 89%, AFP 85%, sICAM1为78%. 综合评价，GGTⅡ虽然灵敏度、准确度较高，但其特异性较AFP低;AFP的特异性和准确度较高，但灵敏度低. 而sICAM1在诊断HCC方面灵敏度较低，但其特异性好，准确度尚可. 如将HCC分成肝外转移和无肝外转移两组，则在发生肝外转移组，sICAM1的含量和灵敏度可达1168±208和93.8%，在无肝外转移组仅为657±145和15.3%，两组差异比较有统计学意义(P<0.05). 而AFP和GGTⅡ与是否存在HCC的肝外转移无统计学差异(P>0.05). 这表明sICAM1对于判断HCC患者是否存在肝外转移具有重要意义. 有利于临床上尽早发现肝外病灶并予以积极治疗.

　　AFP阴性的11例HCC患者中，其中sICAM1阳性3例，GGT阳性8例，任一项阳性的检测为85%，两项均为阳性的检出率为86%. 这充分表明sICAM1和GGTⅡ对AFP检测阴性的HCC具有良好的补充作用，减少了AFP的漏诊概率，因此提示联合检测血清中的AFP, GGTⅡ及sICAM1对HCC的诊断具有临床意义.

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