白芍总苷的降血脂、抗氧化作用及其对脂肪肝的防治研究

　　作者：刘月丽1，吕俊华2　 作者单位：(1.海南医学院药学院药理教研室，海南 海口　571101; 2.暨南大学药学院药理教研室，广东 广州　510632)

　　【摘要】 目的：研究白芍总苷的降血脂、抗氧化作用及其对脂肪肝的防治作用。方法：采用高脂高糖饮食建立脂肪肝大鼠模型，并预防性给予白芍总苷处理8周。8周后，处死大鼠，测定血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)水平;取全肝称重，计算肝指数，同时测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT) 和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性以及丙二醛(MDA)的含量，取肝左叶，HE染色，光镜下观察肝脏组织学变化。结果：白芍总苷可明显降低脂肪肝大鼠血浆TC、TG、LDL-C水平，提高血浆HDL-C水平;降低肝指数，降低ALT和AST水平，明显提高肝脏组织中SOD、CAT 和GSH-PX活性，降低MDA含量，改善肝脏组织学改变。结论：白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝有防治作用，其作用机制可能与降血脂和提高肝脏抗氧化能力有关。

　　【关键词】 白芍总苷;脂肪肝;降血脂;抗氧化;防治作用

　　[ABSTRACT] Objective： To study hypolipidemic and antioxidative effect and hepatic protective effect of total glucosides of paeony′s on non-alcoholic fatty liver. Methods：Rats were bred with high sugar and fat diet to establish non-alcoholic fatty liver model. Total glucosides of paeony ( 0.1 g/kg ) was administered to prevent development of non-alcoholic fatty liver. After 8 weeks， rats were sacrificed and the blood was collected to test total cholesterol (TC)， triglyceride(TG)， high density lipoprotein cholesterol(HDL-C)， low density lipoprotein cholesterol(LDL-C) levels and the activities of aspartate aminotransferase(AST)， alanine aminotransferase (ALT). Isolated liver was weighed to calculate liver index and used to evaluate the activities of glutathione peroxidase (GSH-PX)， superoxide dismutase (SOD)， catalase (CAT) and the amount of malonaldehyde (MDA) as well as histological changes. Results：Total glucosides of paeony can decrease TG， TC， LDL-C， increase HDL-C， lower the activities of ALT， AST and liver index of non-alcoholic fatty liver rats， in addition， total glucosides of paeony can enhance activities of SOD， CAT， GSH-PX， diminish amount of MDA greatly and improved histological changes in liver of non-alcoholic fatty liver rats. Conclusion：Total glucosides of paeony can decrease serum lipid and improve hepatic function of non-alcoholic fatty liver rats; furthermore， the anti-oxidative and hypolipidemic effect may be responsible for its liver protective effect.

　　[KEY WORDS] Total glucosides of paeony; Non-alcoholic fatty liver; Hypolipidemic; Antioxidative; Protective effect

　　白芍为毛茛科植物芍药( Paeonia lactiflora Pall.) 的干燥根， 白芍总苷(total glucosides of paeony) 是从白芍中提取的，主要含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜苷类化合物。现代药理学研究发现，白芍总苷具有镇痛、抗炎、免疫调节、抗血栓、护肝、抗氧化等作用[1-7]。脂肪肝好发于肥胖人群，与脂质代谢紊乱、胰岛素抵抗、高血压等并称为代谢综合征，病理表现为大泡性脂肪变性，伴有小叶性肝炎及肝纤维化形成。本研究采用高脂高糖饮食制备脂肪肝模型，探讨白芍总苷的对高脂高糖饮食诱导脂肪肝的保护作用与其机制。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料

　　刘月丽等.白芍总苷的降血脂、抗氧化作用及其对脂肪肝的防治研究　1.1.1　动物　健康SD大鼠60只，雌雄各半，体重150～180 g，由广东省实验动物中心提供。合格证号：SCXK(粤)2003-0002。

　　1.1.2　药品与仪器

　　白芍总苷胶囊(三九医药股份有限公司)，二甲双胍(深圳市中联制药有限公司)，戊巴比妥钠和胆固醇(广州市医药公司化学试剂玻璃仪器批发部)。721分光光度计(上海第三仪器分析仪器厂)，TGL-16G台式高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，LXJ-Ⅱ型高速离心机(上海医用分析仪器厂)，BECMAN全自动生化分析仪(美国BECMAN公司)。

　　1.1.3　试剂

　　过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、考马斯亮兰蛋白、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测试盒均由南京建成生物工程研究所提供。

　　1.2　方法

　　1.2.1　模型的建立

　　取健康SD大鼠60只，适应性喂养1周后，随机抽取15只作为正常对照组，普通饲料 (广东省医学实验动物中心) 喂养，饮自来水，余高脂饲料[8](77.9%普通饲料+10%猪油+10%蛋黄粉+2%胆固醇+0.1%他巴唑) 喂养，饮10%葡萄糖水。

　　1.2.2　分组及给药

　　将高脂饲料喂养的SD大鼠随机分为模型组，二甲双胍组(0.2 g/kg )、白芍总苷组(0.1 g/kg )，在给予高脂饲料的同时灌胃给予相应的药物，溶剂为1 mL/100 g体重，正常对照组和模型组给予相应体积的蒸馏水。

　　1.2.3　指标的检测

　　8周后，称重，禁食12h，用3%戊巴比妥(0.03 g/kg，腹腔注射) 麻醉大鼠，从腹主动脉采血，放入抗凝试管，1 500 r/min，离心10 min，分离血浆，-30 ℃保存，测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量及丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)的活性。迅速取出肝组织，称肝湿重，计算肝指数;用冰冻生理盐水洗去血污，滤纸吸干，准确称取0.2 g肝组织，制成10%匀浆，3 000 r/min离心，取上清，根据试剂盒要求测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT) 和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性以及丙二醛(MDA)含量;肝组织病理：取肝左叶相同部位的组织，10%甲醛固定，石蜡切片，常规HE染色，光学显微镜下观察肝脏组织学改变。

　　1.3　统计学处理

　　用SPSS13.0统计软件包进行单因素方差分析，计量资料采用组间t检验(方差不齐时用t′检验)，检验水准α=0.05。

　　2　结果

　　2.1　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠血脂的影响

　　模型组大鼠TC、TG、LDL-C较正常组明显升高(P<0.05～0.01)，HDL-C较正常组明显降低(P<0.01);二甲双胍和白芍总苷组大鼠的TC、TG、LDL-C较模型组明显降低(P<0.05～0.01)，HDL-C较模型组明显升高(P<0.01)，见表1。

　　2.2　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠肝功能和肝指数的影响

　　模型组大鼠ALT、AST、肝指数较正常组明显升高(P<0.05);二甲双胍和白芍总苷组大鼠的ALT、AST、肝指数较模型组明显降低(P<0.05～0.01)，见表2。

　　2.3　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠肝组织抗氧化能力的影响

　　模型组大鼠MDA含量较正常组明显升高(P<0.01)，SOD、CAT、GSH-PX活力较正常组明显降低(P<0.05～0.01);二甲双胍和白芍总苷组大鼠的MDA含量较模型组明显降低(P<0.01)，SOD、CAT、GSH-PX活力较模型组明显升高(P<0.05～0.01)，见表3。表1　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠血脂的影响表2　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠肝功能和肝指数的影响表3　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠肝组织抗氧化能力的影响

　　2.4　白芍总苷对高脂高糖饮食诱导的脂肪肝大鼠肝脏组织学变化的影响

　　正常组肝脏组织细胞结构完整，无脂肪变性;模型组大鼠肝组织呈不同程度的脂肪变性，病变多在肝小叶外周，肝细胞明显肿胀呈圆形，胞浆内充满大小不等的脂滴，细胞核被脂滴挤向一侧，界限不清，肝窦不清，汇管区有少量炎细胞浸润;二甲双胍和白芍总苷处理后的大鼠肝脏脂肪性病理变化程度较模型组明显改善，脂肪变性的细胞减少，胞浆内脂滴减少或消失，胞浆丰富，肝窦整齐。

　　3　讨论

　　非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)全球的发病率约为10%～39%，在糖尿病人群中的发病率约为50%，在肥胖人群的发病率约为57%～74%，脂肪肝如果得不到及时的治疗，可发展为肝炎、肝硬化;肥胖和胰岛素抵抗是脂肪肝发病的重要危险因素[9,10]。

　　高脂高糖饮食喂养大鼠8周后，大鼠TC、TG、LDL-C升高，HDL-C水平降低，大鼠肝组织中MDA含量增加，抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX活力下降，肝脏组织学变化明显，脂滴增多，肝细胞肿胀等，这和前期的研究一致[8]。高脂高糖饮食喂养大鼠8周，大鼠血清中的游离脂肪酸(FFA)含量增加[8]，在肝脏合成和储存TG，导致肝指数增大。过多的脂肪酸被过氧化物酶和线粒体氧化，产生活性氧，活性氧导致氧化应激，进一步损伤肝细胞，导致ALT、AST外漏，肝功能受损，进一步发展导致肝炎、肝硬化[11]。脂质过氧化参与了脂肪肝的发病和发展，Day等[12]将此称为“第二次打击”，即在胰岛素抵抗“第一次打击”的基础上，脂质过氧化进一步加重肝细胞的损伤，促使脂肪肝的产生和发展。

　　二甲双胍是常见的口服降血糖药，研究表明，二甲双胍可以治疗脂肪肝[13,14]，本研究证实了这一结果。二甲双胍可能通过降低脂肪肝大鼠的血脂水平，减少TG在肝脏中的合成与蓄积，降低肝指数、改善肝脏组织学改变及肝功能。

　　白芍总苷可以减少TG的合成及其在肝组织的储存，表现为大鼠血浆中TG含量下降和肝指数降低，光镜下可见肝细胞内脂滴减少，结构趋于正常;降低脂肪肝大鼠血清中游离脂肪酸的水平[7]，降低脂肪酸过氧化，减少活性氧的产生及氧化应激对肝组织的损伤，提高肝组织的抗氧化能力，改善肝脏组织学改变，保护肝功能，表现为肝组织内脂质过氧化产物减少，抗氧化酶活性增加，血浆中ALT、AST含量降低。

　　白芍总苷可能是通过减轻高脂高糖饮食诱导脂肪肝大鼠的高脂血症，减少肝组织内脂质过氧化损伤，从而起到护肝作用。

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