肝癌中Bcl2、Bax和Cmyc基因的表达及其临床意义

　　作者：杨闯,魏振彤,郑宇,王广义　　作者单位：吉林大学第一医院普外科，吉林 长春

　　【摘要】目的 探讨Bcl2、Bax和Cmyc基因表达在肝细胞癌(HCC)中的临床意义。方法 采用免疫组化技术检测不同HCC组织、癌旁组织及正常肝组织中的Bcl2、Bax和Cmyc蛋白表达。结果 Bcl2、Bax和Cmyc在HCC组织、癌旁组织和正常肝组织中均有部分阳性表达;Bcl2和Cmyc蛋白在HCC组织中呈高表达，其个体阳性率明显高于正常肝组织(P<0.05);Bax蛋白在HCC组织中呈低表达，其个体阳性率明显低于正常肝组织(P<0.05);Bcl2基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小、UICC分期和转移均无关;Bax基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和转移无关(P>0.05)，而与HCC的UICC分期有关(P<0.05);Cmyc基因的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和UICC分期无关(P>0.05)，而与HCC的转移有关(P<0.05)。结论 Bcl2、Bax和Cmyc基因相互协调作用，促进HCC的发生和发展。

　　【关键词】 肝细胞癌;Bcl2;Bax;Cmyc

　　Expression and clinical significance of Bcl2，Bax and Cmyc in hepatocellular carcinoma

　　YANG Chuang, WEI ZhenTong, ZHENG Yu, et al.

　　Department of General Surgery, the Affiliated First Hospital of Jilin University, Changchun 130021, Jilin, China

　　【Abstract】Objective To investigate the expressions and the clinical significance of Bcl2, Bax and Cmyc gene in hepatocellular carcinoma(HCC). Methods Bcl2, Bax and Cmyc gene′s expressions in HCC tissue, paracancerous tissue and normal liver tissue were detected by immunohistochemistry. Results The rates of Bcl2 and Cmyc positive expressions in HCC tissue were higher than those in normal liver tissue (P<0.05). The rate of Bax in HCC tissue was lower than that of normal liver tissue (P<0.05). The expression of Bcl2 had no association with the patients′ age, sex, the size of tumor, UICC stage and the metastasis (P>0.05). The expression of Bax had no association with the patients′ age, sex, the size of tumor and the metastasis (P>0.05), but had some association with UICC stage of HCC (P<0.05). The expression of Cmyc had no association with the patients′ age, sex, the size of tumor and UICC stage (P>0.05), but had some association with the metastasis of HCC (P<0.05). Conclusions Bcl2, Bax and Cmyc gene maybe cooperate to promote the occurrence and development of HCC.

　　【Key words】Hepatocellular carcinoma; Bcl2; Bax; Cmyc

　　目前认为在恶性肿瘤发生和发展过程中，细胞凋亡抑制比细胞过度增殖所起的作用更重要。它是许多凋亡相关基因协同作用的结果。目前证明Bcl2家族是在细胞凋亡中起重要作用的一类蛋白质。Bcl2和Bax分别是Bcl2家族中最有代表性的抑制和促进凋亡基因，并且Bax是Bcl2活性的主要调控因子〔1〕。原癌基因Cmyc是调控细胞增殖的主要基因，其表达产物是一种转录因子，与细胞增殖分化及癌变有密切关系〔2，3〕。为探讨Bcl2、Bax和Cmyc基因表达在肝细胞癌(HCC)中的临床意义，本研究利用免疫组化技术，检测了50例HCC患者的Bcl2、Bax和Cmyc基因的表达情况并加以分析。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　收集本科2005年3月～2008年3月收治HCC患者50例，其中男35例，女15例，年龄35～82(平均62)岁。全部病例均由组织学病理确诊。按UICC(1997)分期标准，Ⅰ期10例，Ⅱ期18例，Ⅲ期13例，Ⅳ期9例。所有患者术前均未行放疗及化疗，随访时间为6～24个月。选取同期病理科正常肝组织10例(7例肝脏外伤，3例肝脏血管瘤)作为正常对照。所有组织均经10%福尔马林溶液固定后石蜡包埋。

　　1.2 试剂与方法

　　Bcl2、Bax和Cmyc基因表达产物兔抗人单克隆抗体和免疫组化(SABC法)试剂盒均为美国California Biotech Inc公司产品。免疫组化方法按试剂盒说明书操作。PBS代替第一抗体作阴性对照，已知肝癌组织作阳性对照。

　　1.3 结果判定

　　细胞核和或细胞浆呈明显棕黄色反应即为阳性。阳性细胞计数：每个标本切片选取2个高倍(400×)视野作阳性细胞计数，以超过10%细胞呈清晰棕褐色为阳性(+)，超过50%细胞呈清晰棕褐色为强阳性()，低于10%表达或细胞无棕黄色染色为阴性(-)。

　　1.4 统计学处理

　　实验数据用率或百分比表示，采用SPSS11.5进行统计学处理，组间比较用χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 Bcl2蛋白的表达

　　Bcl2在HCC组、癌旁组和正常对照组中均有部分阳性表达;HCC组中Bcl2表达个体阳性率明显高于正常对照组(P<0.05);HCC组与癌旁组之间个体阳性率统计学分析表明无显著差异;癌旁组与正常对照组比较也无显著差异。

　　2.2 Bax蛋白的表达

　　Bax在HCC组、癌旁组、正常对照组中均有部分阳性表达;其在HCC组中个体阳性率明显低于对照组(P<0.05);HCC组与癌旁组之间个体阳性率无显著差异;癌旁组与正常对照组比较也无显著差异。

　　2.3 Cmyc蛋白的表达

　　Cmyc在HCC组、癌旁组和正常对照组中均有部分阳性表达;HCC组个体阳性率明显高于对照组(P<0.05);HCC组与癌旁组个体阳性率比较有显著差异(P<0.05);癌旁组与对照组个体阳性率比较无显著差异。 Bcl2、Bax和Cmyc基因在不同组织中的阳性表达

　　2.4 Bcl2、Bax和Cmyc蛋白表达与HCC临床特征的关系

　　Bcl2蛋白表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小、UICC分期和转移均无关(P>0.05);Bax蛋白表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和转移无关(P>0.05)，而与HCC的UICC分期有关(P<0.05);Cmyc蛋白表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和UICC分期无关(P>0.05)，而与HCC的转移有关(P<0.05)。Bcl2、Bax和Cmyc基因的表达与HCC临床特征的关系

　　3 讨论

　　Bcl2家族中最重要的两个成员Bcl2和Bax与肿瘤有明显相关性〔1〕。与一般癌基因和抑癌基因不同的是，Bcl2和Bax不是通过调节细胞增殖,而是通过调控细胞凋亡来发挥调节肿瘤细胞生长状态的作用。与其起源组织相比，多数肿瘤的Bcl2表达升高，而Bax表达下降，说明Bax/Bcl2比例下调在肿瘤的发生和发展中有一定意义。过表达Bcl2或下调Bax可抑制许多因素诱导的多种肿瘤细胞凋亡，而下调Bcl2水平或过表达Bax能使肿瘤细胞凋亡率升高，并促进多种因素诱导的多种肿瘤细胞凋亡〔4〕。进一步说明Bcl2和Bax在肿瘤调控中的重要作用。但其在肝细胞癌组织中的表达水平，能否反映肝细胞癌的分化、级别、浸润程度和预后，目前尚无定论〔5〕。本研究结果显示，Bcl2蛋白在HCC组织中高度表达，癌旁组织中的表达明显下降，而在正常肝组织中表达则进一步下降。Bcl2蛋白表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小、UICC分期和转移均无相关性。Bax蛋白在HCC组织中表达率明显下降，且Bax蛋白的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小和转移无关，而与HCC的UICC分期有关。

　　Cmyc基因作为原癌基因，是myc基因家族的成员之一，属核内转录因子，其编码蛋白介导细胞外传入细胞内的生物信号向细胞核内传递，参与细胞增殖和细胞凋亡的调控。已有研究证实Cmyc功能正常时维持细胞分裂增殖，如果外在信号改变或细胞遗传基因受损时，Cmyc基因就诱导细胞发生凋亡〔6〕。本研究结果显示，Cmyc蛋白在HCC中高度表达，癌旁组织中的表达明显下降，而在正常肝组织中则少有表达;Cmyc蛋白的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小及分化无关，而与HCC的转移有明显的相关性，提示Cmyc基因的表达增强与HCC的发生发展有着密切的关系，同时可以作为判断HCC有否转移的指标之一。

　　Bcl2基因和Bax基因在肝癌中可能不是分别激活和丢失，而可能是分别由于其他增强子的作用，使Bcl2基因表达增强，产生蛋白的量增加;而使Bax基因表达降低，产生蛋白的量减少。Cmyc基因有刺激细胞凋亡的作用，而Bcl2可抑制这种作用。所以肝癌细胞中凋亡作用减少，可能是Cmyc基因刺激细胞凋亡作用不能够充分表现的结果，或者Cmyc基因仍然作为一个癌基因发挥作用，促进细胞的增殖。

　　【参考文献】

　　1 Guo B, Zhai D, Cabezas E, et al. Humanin peptide suppresses apoptosis by interfering with Bax activation〔J〕.Nature, 2003;423(6938)：45661.

　　2 Jonas JC, Laybutt DR, Steil GM, et al. High glucose stimulates early response gene cmyc expression in rat pancreatic beta cells〔J〕. Biol Chem, 2001;276(38)：3537581.

　　3 Fields WR, Desiderio JG, Putnam KP, et al. Quantification of changes in cmyc mRNA levels in normal human bronchial epithelial(NHBE) and lung adenocarcinoma(A549)cells following chemical treatment〔J〕. Toxicol Sci, 2001;63(1)：10714.

　　4 Javin JG, William BC, Joe WG, et al. Baxmediated apoptosis in the livers of rats after partial hepatectomy in the retrorsine model of hepatocellular injury〔J〕. Hepatology,2000;32(5):312.

　　5 徐宏勇,李开宗,付由池,等.人肝细胞癌中促凋亡基因bax 的原位检测及临床意义〔J〕.中国普外基础与临床,2000;7:23840.

　　6 宝福凯.程序性细胞死亡的基因调控〔J〕.生命科学,1995;7(5):15.