趋化因子受体CCR7在肝门部胆管癌组织中的表达及其意义

　　作者：成雨　陈鸿强　赵松　吴小鹏　陈雨信　 作者单位：山东大学齐鲁医院　肝胆外科　(山东　济南　250012)

　　【摘要】 目的：探讨趋化因子受体CCR7在肝门部胆管癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法：免疫组织化学染色检测45例肝门部胆管癌手术标本和20例正常胆管组织中CCR7的表达，HE染色检测标本中肿瘤神经浸润情况，与临床病理因素进行相关性分析。结果：CCR7在45例肝门部胆管癌组织阳性表达32例(71.1%)，正常胆管组织中有2例表达弱阳性(10.0%)，二者阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。45例肝门部胆管癌组织中38例有神经浸润，其中30例CCR7呈阳性表达。相关分析认为，CCR7表达与淋巴结转移、神经浸润有关(P<0.05);与患者的性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05)。结论：CCR7在肝门部胆管癌组织中高表达，CCR7的表达与肿瘤的淋巴结转移、神经浸润有关。

　　【关键词】 受体，CCR7·肝门·胆管肿瘤

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of chemokine receptor CCR7 in hilar cholangiocarcinoma and relationship with clinical pathological parameters. Methods: The expression of chemokine receptor CCR7 was tested by immunohistochemical method in 45 hilar cholangiocarcinoma specimens and 20 normal bile duct specimens. Results: CCR7 expression was positive in 71.1%(32/45) of hilar cholangiocarcinoma specimens, and in 10.0%(2/20) of normal bile duct specimens. There was 38 perineural invasion in 45 hilar cholangiocarcinoma specimens, and 30 had CCR7 expression. The expression of CCR7 was relevant to lymph node metastasis and perineu　　肝门部胆管癌易出现局部复发和转移，很少发生远处转，肿瘤细胞的组织趋向性在肝门部胆管癌转移中起着重要的作用。趋化因子受体CCR7是使肿瘤细胞产生趋向性的一种重要引诱物。CCR7是1998年由Yashida等[1]在EB病毒感染的B细胞中发现的。以往研究发现CCR7在乳腺癌、胃癌组织中呈高表达状态，参与了肿瘤的转移与侵袭[2]。Arigami等[3]发现胃癌组织中CCR7和CXCR4的表达可作为预测淋巴微转移的工具。本研究分析45例肝门部胆管癌组织中CCR7的表达，探讨其与临床病理因素的关系。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　收集我院2004年7月—2009年12月行肝门部胆管癌手术患者的石蜡标本45例，其中男28例，女17例;年龄39～78岁，平均年龄58.4岁。腺癌39例，腺鳞癌6例。高分化18例，中分化20例，低分化7例。有淋巴结转移24例，无转移21例。45例经病理组织学检查确诊为肝门部胆管癌。同时随机选取其中经HE染色、病理组织检查确定为正常组织的20例作为对照组。所有病例术前均未进行过抗肿瘤治疗。

　　1.2　主要试剂和方法

　　采用免疫组织化学染色SP法，鼠抗人CCR7抗体(BA0710)购于武汉博士德生物公司，SP试剂盒购于福州迈新生物技术公司。严格按试剂盒操作步骤进行：CCR7抗体1∶100稀释，DAB显色、苏木精复染透明后中性树胶封片，光学显微镜下观察。PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3　结果判定

　　CCR7染色结果判定：按照Andre等[4]的方法，根据免疫组织化学染色肿瘤细胞阳性比例和染色强度进行评分：无阳性细胞为0分，<10%为1分，10%～50%为2分，>50%为3分;无着色为0分，轻度着色(浅黄色)为1分，中度着色(棕黄色)为2分，重度着色(棕褐色)为3分。二者评分之和<3分为阴性，≥3分为阳性。肿瘤浸润神经的判断标准：光学显微镜下观察肿瘤包绕神经外膜、侵入神经周围间隙和神经纤维内部生长者，即定为肿瘤浸润神经。

　　1.4　统计学处理

　　采用SPSS16.0统计软件包进行分析，行χ2检验。以P≤0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　CCR7在肝门部胆管癌组织中的表达及神经浸润的病理学检查

　　CCR7阳性表达于肿瘤细胞的细胞膜和(或)细胞质，呈淡黄色至棕黄色(图1)。45例肝门部胆管癌组织中，阳性表达32例，阳性率为71.1%;正常胆管组织中有2例表达弱阳性，阳性率为10.0%，二者差异具有统计学意义(P<0.05)。45例癌组织中有7例肿瘤未侵犯胆管壁，未发生神经浸润，其余38例均有神经浸润表现(图2)，其中30例CCR7呈阳性表达。

　　2.2　CCR7的表达与肝门部胆管癌临床病理因素的关系

　　相关分析显示，CCR7的表达与肝门部胆管癌患者的淋巴结转移、神经浸润有关(P<0.05，表1);与患者的性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(P>0.05，见表1)。

　　3　讨论

　　肝门部胆管癌由于解剖部位的特殊性和区域性癌变的特点，根治性切除率低，复发率高，主要沿胆管壁血管、神经、淋巴结局部转移，很少发生远处转移[5]。肝门部胆管癌多为腺癌，其淋巴结转移的发生率为30%～60%[6]，2009年Yonemori等[7]研究证实淋巴结微转移是影响肝门部胆管癌预后的“独立性因素”。国内外研究认为神经浸润可能是肿瘤切除后局部复发的重要原因[8-9]。肿瘤神经浸润是一相对“ 独立的事件”，不是经过血管、淋巴管途径，而是肿瘤侵犯胆管壁全层后直接蔓延的结果。

　　肿瘤细胞的组织趋向性表现为肿瘤细胞迁徙至首选器官或组织，可能是由转移前微龛(premetastatia niche)所分泌的化学引诱物形成浓度梯度介导的[10]。CCR7是1998年由Yashida等[1]在EB病毒感染的B细胞中发现的，是趋化因子SLC的高亲合力受体。含378个氨基酸残基，基因定位于17q12~21.2。主要在幼稚T细胞、B细胞和树突状细胞表面，在记忆T细胞、NK细胞和NK T细胞也有表达。CCR7是使肿瘤细胞产生组织趋向性的一种重要引诱物。以往研究发现CCR7在乳腺癌细胞、胃癌转移淋巴结和受累的淋巴管中呈高表达状态[2]，Arigami等[3]发现胃癌组织中CCR7和CXCR4的表达可作为预测淋巴微转移的工具。

　　本研究中发现CCR7在肝门部胆管癌组织中高表达，阳性率为71.1%，而在正常胆管组织中阳性表达率为10.0%，差异有统计学意义(P<0.05)。与临床病理因素进行相关性分析发现，CCR7的表达与肝门部胆管癌患者的淋巴结转移、神经浸润有关(P<0.05)。提示CCR7可能通过淋巴转移、神经浸润途径诱导肝门部胆管癌的浸润和转移。因此，临床可以通过对CCR7表达的检测来预测淋巴结转移和肿瘤神经浸润程度，这对于术中确定肿瘤切除范围、术后病情分析、预后评估和选择术后个体化治疗方案有重要价值。关于CCR7通过淋巴转移、神经浸润诱导肝门部胆管癌转移和复发的具体机制，还需要通过细胞水平、动物实验进一步研究证实。沉默CCR7技术将来可能应用于肝门部胆管癌转移早期的干预，从而减缓肝门部胆管癌的转移、减少肝门部胆管癌术后复发。

　　【参考文献】

　　[1] Yoshida R, Nagira M, Kitaura M, et al. Secondary lymphoid tissue chemokine is a functional ligand for the CC chemokine recep tor CCR7[J]. J Biol Chem, 1998,273(12)：7118-7122.

　　[2] Muller A, Homey B, Soto H, et al. Involvement of chemokine receptors in breast cancermetastasis[J]. Nature, 2001,410(6824)：50-56.

　　[3] Arigami T, Natsugoe S, Uenosono Y, et al. CCR7 and CXCR4 expression predicts lymph node status including micrometastasis in gastric cancer[J]. Int J Oncol, 2009,35(1):19-24.

　　[4] Andre F, Cabioglu N, Assi H, et al. Expression of chemokine receptors predicts the site of metastatic relapse in patients with axillary node positive primary breast cancer[J]. Ann Oncol, 2006,17(6)：945-951.

　　[5] 黄志强.肝门部胆管癌外科治疗的现状与我见[J]. 中国实用外科杂志，2007，27(5)：341-347.

　　[6] Nagino M, Kamiya J, Arai T, et al. One hundred consective hepotobiliary resections for biliary hilar malignancy. Preoperative blood donation, blood loss, transfution, and outcome[J]. Surgery, 2005,137(2)：148-155.

　　[7] Yonemori A, Kondo S, Matsuno Y, et al. Prognosis impact of para-aortic lymph node micrometastasis in patients with regional node-positive biliary cancer[J]. Br J Surg, 2009,96(5)：509-516.

　　[8] Yamaguchi R, Nagino M, Oda K, et al. Perineural invasion has a negative impact on survival of patients with gallbladden carcinoma[J]. Br J Surg, 2002,89(9)：1130-1136.

　　[9] 李成刚，黄志强，韦立新，等. 肝门部胆管癌神经浸润特征的临床病理学分析[J].世界华人消化杂志，2008，16(4)：379-384.

　　[10] Kaplan RN, Riba RD, Zacharoulis S, et al. VEGFR1-positive haematopoietic bone marrow progenitors initiate the pre-metastatic niche[J]. Nature, 2005,438(7069)：820-827.